呼吸道感染病原體抗體(IgM)九聯(lián)檢檢測及應(yīng)用教學(xué)課件

呼吸道感染病原體抗體（IgM）九聯(lián)檢檢測及應(yīng)用

2021/4/261概述呼吸道病原多通過空氣或唾液飛沫方式傳播，非常容易傳染他人，造成局部流行，甚至可導(dǎo)致爆發(fā)性流行。呼吸道感染病原體抗體IgM九聯(lián)檢的應(yīng)用有利于盡早快速準(zhǔn)確地找到病原體，對疾病的診斷、確定正確治療方案有重大意義。2021/4/262概述呼吸道感染的病原體種類多且臨床癥狀相似難以區(qū)分，因而快速檢測、診斷、明確病原體感染對臨床診治工作有很大的幫助。應(yīng)用呼吸道聯(lián)合檢測試劑盒可以提供快速診斷，對加強(qiáng)呼吸道疾病病原學(xué)診斷和合理使用抗生素可起到很好的指導(dǎo)作用。2021/4/263概述我科在實(shí)際檢測和應(yīng)用中積累了一定的心得和體會(huì)：各種病原體感染的臨床意義，抗體檢測的最佳時(shí)間，試劑的靈敏度、特異性、精密度，交叉反應(yīng)和檢測中的技巧等，希望能和廣大同行進(jìn)行交流和學(xué)習(xí)。2021/4/264

社區(qū)獲得性肺炎社區(qū)獲得性肺炎（community-acquiredpneumonia,CAP）是指在非醫(yī)院環(huán)境中受感染因子侵襲所發(fā)生的肺部炎癥，以及住院后48小時(shí)內(nèi)或特殊病原菌在潛伏期10天內(nèi)所患肺炎，又稱院外獲得性肺炎。CAP的發(fā)病率為4.7%-11.6%，其中22%-51%的CAP需住院治療；住院CAP死亡率7%，重癥CAP死亡率29%。2021/4/265社區(qū)獲得性肺炎的分類

（一）細(xì)菌性肺炎

1.需氧革蘭染色陽性球菌，如肺炎鏈球菌（即肺炎球菌）、金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌等。

2．需氧革蘭染色陰性菌，如肺炎克雷白桿菌、流感嗜血桿菌、埃希大腸桿菌、綠膿桿菌、軍團(tuán)菌等。

3．厭氧桿菌如棒狀桿菌、梭形桿菌等。2021/4/266社區(qū)獲得性肺炎的分類（二）病毒性肺炎如腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、麻疹病毒等。（三）支原體肺炎由肺炎支原體引起。（四）真菌性肺炎如白色念珠菌、曲菌、放線菌等。（五）其他病原體所致肺炎如立克次體（如Q

熱立克次體）、衣原體（如鸚鵡熱衣原體）、弓形體（如鼠弓形體）、原蟲（如卡氐肺孢子蟲）、寄生蟲（如肺包蟲、肺吸蟲、肺血吸蟲）等。2021/4/267嗜肺軍團(tuán)菌LP是社區(qū)獲得性肺炎的重要致病菌。在歐洲和北美軍團(tuán)軍肺炎占社區(qū)獲得性肺炎前3，4位，ICU重癥社區(qū)獲得性肺炎的第三位。對人致病的LP有16個(gè)血清型，軍團(tuán)菌肺炎8O%由LP1引起。美國每年新發(fā)軍團(tuán)菌肺炎病例1萬例，我國各省市均有散發(fā)病例報(bào)告。夏秋季為軍團(tuán)菌肺炎流行高峰季節(jié)，散發(fā)病例全年均有發(fā)生。2021/4/268嗜肺軍團(tuán)菌人感染軍團(tuán)菌主要是通過吸入被軍團(tuán)菌污染的氣溶膠而導(dǎo)致的，氣溶膠是軍團(tuán)菌傳播、感染的重要載體。目前尚無人—人之間直接接觸傳播軍團(tuán)菌病的報(bào)道。與其他介水傳播疾病不同的是軍團(tuán)菌沒有糞－口傳播途徑，人們也不會(huì)由于飲用了含有軍團(tuán)菌的水而感染。2021/4/269嗜肺軍團(tuán)菌

軍團(tuán)菌病因其無典型臨床特征，很難與其他病原體所致的肺炎相區(qū)別，又因其多系統(tǒng)受累還需與相關(guān)疾病鑒別，故臨床診斷比較困難，早期常被誤診，導(dǎo)致病死率較高。因此早期診斷對于疾病的轉(zhuǎn)歸具有重要的意義。應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析。治療建議使用紅霉素治療2021/4/26109、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:33:31PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32021/4/2612肺炎支原體是介于病毒與細(xì)菌之間的一種沒有細(xì)胞壁的病原體40%的非典型肺炎病例是由肺炎支原體引起的，同時(shí)由多達(dá)18%的住院病例是兒童。發(fā)病率高發(fā)于5到15周歲之間。肺炎支原體感染最嚴(yán)重的結(jié)果是導(dǎo)致肺炎。兒童最典型的癥狀是氣管、支氣管炎。建議使用大環(huán)內(nèi)脂類抗菌藥物治療2021/4/2613肺炎支原體MP肺炎在全球范圍內(nèi)均有發(fā)生，有年齡分布特征和季節(jié)高峰等。是各年齡段兒童急性呼吸道感染的常見病原，在我國社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中占據(jù)重要地位。兒童社區(qū)獲得性肺炎（CAP）中MP病原可占70%，國外有文獻(xiàn)報(bào)道為9.6%-66.7%，在我國流行期間占小兒肺炎總數(shù)的20%-30%，另外有報(bào)道CAP患兒MP感染陽性率與年齡關(guān)系：0~6月1.21%，~1歲5.08%，~3歲14.23%，~5歲18.95%，~10歲28.13%，>10歲30.27%。總體以學(xué)齡兒童為主，但現(xiàn)在年幼兒發(fā)病率有所增加。MP主要通過呼吸道飛沫傳播。MP感染暴發(fā)流行多見在一個(gè)密閉環(huán)境中，如學(xué)校、幼托機(jī)構(gòu)、夏令營等，密切接觸是重要因素。而且臨床癥狀不典型，MP感染重癥病人增多，難治性MP肺炎增多。2021/4/2614肺炎支原體潛伏期約為2～3周，一般起病較緩慢，但亦有急性起病者，常以發(fā)熱、熱型不定、熱程1～3周、多為弛張熱及不規(guī)則發(fā)熱，平均4-5d；刺激性咳嗽為突出表現(xiàn)，有的酷似百日咳樣咳嗽，多見干咳，可咳少量黏稠痰，甚至痰中帶血絲。伴喘息。嬰幼兒起病急、病程長，可表現(xiàn)喘憋、呼吸困難；年長兒可伴咽痛、胸悶、胸痛等癥狀，肺部常在整個(gè)病程中無任何陽性體征，這是本病的特點(diǎn)之一。少數(shù)病例呼吸音減弱，雙肺可聞及干濕性音，這些表現(xiàn)常在X線改變之后發(fā)現(xiàn).2021/4/2615肺炎支原體小齡兒童（〈5歲〉中肺炎支原體感染經(jīng)常無癥狀而消失或只導(dǎo)致輕度呼吸道感染。由于感染后沒有足夠的免疫力存在，會(huì)出現(xiàn)需要長時(shí)間康復(fù)期并不斷加重的再感染（多次）。2021/4/2616肺炎支原體支原體肺炎后遺問題是由于疾病的嚴(yán)重?fù)p害，致使氣道、肺組織的完全修復(fù)已不可能而造成的，已逐漸引起人們的重視。后遺問題最嚴(yán)重的是出現(xiàn)彌漫性肺間質(zhì)纖維化、肺功能衰竭。其他后遺問題還有反復(fù)呼吸道感染、支氣管哮喘等。2021/4/26172021/4/2618Q熱立克次體Q熱是由Q熱立克次體引起的全身疾病，會(huì)造成發(fā)熱、非典型性肺炎、肝炎或心內(nèi)膜炎。由于從臨床標(biāo)本中分離病原體困難，其診斷基于血清學(xué)方法。常用的檢測方法是補(bǔ)體結(jié)合（CF）和IFA。IgM檢測中IFA是特異性最好的。綿羊，牛和少數(shù)的山羊是人類的主要傳染源。感染的污染物的吸入是人類接觸到Q熱立克次體病菌的主要方式。大部分病例發(fā)于春天或是初夏。2021/4/2619Q熱立克次體多在宿主細(xì)胞空泡內(nèi)繁殖不含有與變形桿菌X株起交叉反應(yīng)的X凝集原對實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物一般不顯急性中毒反應(yīng)對理化因素抵抗力強(qiáng)。在干燥沙土中4～6℃可存活7～9個(gè)月，-56℃能活數(shù)年，加熱60～70℃30～60分鐘才能滅活。2021/4/2620Q熱立克次體感染后潛伏期12-39天，突然發(fā)作，伴發(fā)熱、劇烈頭疼、寒顫、嚴(yán)重乏力。Q熱的診斷為臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)合。建議使用氯霉素，四環(huán)素類抗生素治療。2021/4/26212021/4/2622肺炎衣原體衣原體是一類嚴(yán)格真核細(xì)胞內(nèi)寄生，具有獨(dú)特發(fā)育周期，并能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。2021/4/2623肺炎衣原體2021/4/2624肺炎衣原體肺炎衣原體極易造成呼吸系統(tǒng)感染，特別是支氣管炎和肺炎。該種屬在呼吸道感染中常見的是肺炎衣原體和鸚鵡熱衣原體。在老年人中發(fā)病率較高，所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。肺炎衣原體感染后無特異性的臨床表現(xiàn)，其診斷主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷。建議使用紅霉素、四環(huán)素或其他大環(huán)內(nèi)脂類藥物治療。2021/4/26252021/4/2626腺病毒腺病毒對呼吸道、胃腸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時(shí)伴有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛和肌肉痛等，包括以下4種不同的綜合征。1．急性發(fā)熱性咽喉炎通常為嬰兒和兒童發(fā)病，由C組病毒引起，出現(xiàn)咳嗽，鼻塞、發(fā)熱和咽喉部潰瘍等癥狀，這些表現(xiàn)難以與其他病毒引起的輕型呼吸道感染鑒別。2．咽結(jié)膜熱（pharyngoconjunctivalfever）癥狀與急性發(fā)熱性咽喉炎相似，但常同時(shí)發(fā)生結(jié)膜炎。咽結(jié)膜熱有暴發(fā)流行傾向，如游泳池結(jié)膜炎，多由B組腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般無后遺癥。2021/4/2627腺病毒3．急性呼吸道疾病（acuterespiratorydiseases，ARD）這一綜合征由咽炎、發(fā)熱、咳嗽和全身不適為特點(diǎn)，常在軍隊(duì)的新兵中流行，多因突然緊張、勞累、聚集等所致。此感染多由腺病毒4、7型引起，也可見于3型。4、腺病毒肺炎約占兒童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率為8%～10%；肺炎也是新兵急性呼吸道疾病的一種嚴(yán)重表現(xiàn)。2021/4/2628腺病毒腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，可引起低齡兒童的肺炎和細(xì)支氣管炎。在集體兒童機(jī)構(gòu)中往往同時(shí)發(fā)生腺病毒上呼吸道感染及肺炎。腺病毒肺炎80%發(fā)生于7～24月嬰幼兒。腺病毒肺炎約占病毒性肺炎的20%～30%。

建議抗病毒藥物治療并注意繼發(fā)細(xì)菌感染的防治。

2021/4/26292021/4/2630呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是導(dǎo)致嬰幼兒下呼吸道感染的重要原因，大約有65%的1歲兒童感染了呼吸道合胞病毒，幾乎所有兒童在2歲時(shí)至少感染過1次，呼吸道合胞病毒感染引發(fā)的支氣管炎的住院兒童可增加其以后發(fā)生反復(fù)喘息和哮喘的風(fēng)險(xiǎn)，而且，感染后機(jī)體獲得的免疫反應(yīng)維持時(shí)間不長，仍可再次感染。2021/4/2631呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是一種RNA病毒，屬于副粘液病毒。感染后臨床癥狀不典型。建議抗病毒治療，重癥病人可以使用三氮唑核苷做霧化治療。2021/4/26322021/4/2633流感病毒該病毒呈季節(jié)性周期性流行爆發(fā)（12月-4月）甲型流感的流行每年都會(huì)發(fā)生。乙型流感的流行只在每3-6年爆發(fā)一次，感染人數(shù)超過總?cè)丝诘?5%。流感病毒降低了人體抵御呼吸道感染的能力，因此流感經(jīng)常會(huì)造成繼發(fā)性感染。建議使用干擾素、金剛烷胺、奧司他韋等藥物進(jìn)行治療。2021/4/26342021/4/26352021/4/2636副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎（哮吼）。血清3型是引起1歲以下兒童肺炎的重要病原體，且具有流行性；血清1型和血清2型常與哮吼有關(guān)。建議使用病毒唑、雙黃蓮抗病毒治療。2021/4/26372021/4/2638診斷總則對于肺炎的診斷，血清學(xué)檢測是所有實(shí)驗(yàn)室診斷的一部分，其他診斷還包括培養(yǎng)和抗原或核酸檢測。每種方法都是對其它診斷方法的一種證實(shí)和有效的確認(rèn)。像肺炎這樣難以診斷的臨床病例，應(yīng)該使用不同的診斷方法同時(shí)檢測，以獲得最佳的診斷結(jié)果，各種方法之間是一種互補(bǔ)的關(guān)系。2021/4/2639檢測原理2021/4/2640載玻片2021/4/2641檢測注意事項(xiàng)1.試劑復(fù)溫2.血清IGG吸附3.加樣4.溫育5.熒光二抗6.封片2021/4/2642檢測注意事項(xiàng)檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰現(xiàn)象：（1）檢查陰陽性對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以確認(rèn)試劑盒是否在有效期；（2）檢查實(shí)驗(yàn)記錄，是否嚴(yán)格按照操作規(guī)程，是否漏加、錯(cuò)加酶結(jié)合物或樣本；（3）是否洗滌時(shí)正對孔沖洗、水流過猛，使固相化的復(fù)合體被沖洗掉；（4）加樣量、反應(yīng)時(shí)間、溫度不夠；（5）沒有及時(shí)觀察結(jié)果或判斷有誤。

2021/4/2643檢測注意事項(xiàng)檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象：（1）加樣時(shí)操作不規(guī)范造成加樣污染；（2）洗滌時(shí)發(fā)生交叉污染或洗滌不徹底；

（3）檢查實(shí)驗(yàn)記錄，是否嚴(yán)格按照操作規(guī)程，是否忘記加IgG吸附劑；

（4）判斷有誤；

（5）試劑盒過期2021/4/2644抗原抗體檢測IgMIgG2021/4/2645病原體潛伏期IgM抗體產(chǎn)生時(shí)間病原體潛伏期IgM產(chǎn)生時(shí)間Igm存在時(shí)間嗜肺軍團(tuán)菌2-10天1周左右3-6個(gè)月肺炎支原體14-21天1周左右3-6個(gè)月Q熱立克次體12-19天2周左右3-4個(gè)月肺炎衣原體30天左右2-3周2-6個(gè)月腺病毒2-14天1周左右2-3個(gè)月呼吸道合胞3-7天1周左右2-3個(gè)月流感病毒1-7天1周左右2-3個(gè)月副流感2-7天1周左右2-3個(gè)月2021/4/2646試劑性能指標(biāo)靈敏度和特異性：驗(yàn)證方法：方法學(xué)對比；靈敏度：檢測感染樣本的陽性率

DS(%)=(TP/TP+FN)x100；特異性：檢測未感染樣本的陰性率

ED(%)=(TN/TN+FP)x100；2021/4/2647對比試劑及樣本數(shù)量病原體方法廠家腺病毒ELISAVirotech立克次體IFABiomerieux衣原體IFAFOCUS甲型流感病毒ELISAVirotech乙型流感病毒ELISAVirotech嗜肺軍團(tuán)菌IFAMarDX支原體ELISAVIRCELL副流感病毒ELISAVirotech呼吸道合胞病毒ELISAVirotech2021/4/2648靈敏度和特異性病原體樣本數(shù)量靈敏度特異性嗜肺軍團(tuán)菌8294.4%98.4%肺炎支原體6296.8%100.0%立克次體74100.0%97.6%肺炎衣原體61100.0%98.0%腺病毒7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒9793.8%100.0%甲型流感病毒4694.1%96.4%乙型流感病毒40100.0%96.4%副流感病毒36100.0%96.3%2021/4/2649臨床研究結(jié)論和討論呼吸道感染的病原體種類多且臨床癥狀相似難以區(qū)分，因而快速檢測、診斷、明確病原體感染對臨床診治工作有很大的幫助。應(yīng)用呼吸道聯(lián)合檢測試劑盒可以提供快速診斷，對加強(qiáng)呼吸道疾病病原學(xué)診斷和合理使用抗生素可起到很好的指導(dǎo)作用。2021/4/2650臨床研究結(jié)論和討論呼吸道病原多通過空氣或唾液飛沫方式傳播，非常容易傳染他人，造成局部流行，甚至可導(dǎo)致爆發(fā)性流行。呼吸道感染病原體抗體IgM九聯(lián)檢的應(yīng)用有利于盡早快速準(zhǔn)確地找到病原體，對疾病的診斷、確定正確治療方案有重大意義。2021/4/2651謝謝！2021/4/26529、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20234:33:31PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03