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文檔簡介

FRET術(shù)研究目標(biāo)蛋白之間在小鼠神經(jīng)（經(jīng)質(zhì)胞）的相互作用一術(shù)本理（即發(fā)生FRET是通過可以也就并且保證了供體CFP（protein）、YFP（yellowprotein與YFP當(dāng)用CFP，CFP的發(fā)以CFP的發(fā)射熒的的6對空質(zhì)a和b間的據(jù)FRET原：（protein）、蛋白bYFP（yellow）用CFP長質(zhì)a與，CFP與是CFP為476nm質(zhì)與b由于質(zhì)b質(zhì)CFP是的為質(zhì)-青色熒光蛋白報(bào)告載體，如下圖一．質(zhì)粒的選擇及載體構(gòu)建：訂購：帶有SalI和II兩個切位點(diǎn)的小PEDF表達(dá)克隆質(zhì)粒帶有I和Xba個酶切位點(diǎn)的小鼠目標(biāo)蛋白過表達(dá)克隆質(zhì)粒pECFP．質(zhì)粒pEYFP．質(zhì)SalI、SacIII、XbaI內(nèi)切酶dna合成酶等PEDF（pECFP-C1）表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定鼠列blst1的的入al和acIIF：、GTCGAC-atgcaggccctggtgctact-3、R：、、中GTCGAC為點(diǎn)alI，CCGCGG為酶點(diǎn)SacII。引物中未粒pedf的有文體將到pECFP-C1中，不知道這個實(shí)驗(yàn)需要不需要做這一盒Cloned將。pECFP-C1酶化(~4．盒膠NA／PCR—A：DV805A)1．DNA于／質(zhì)的的’入pnXbaF：、。。。。。。-3、R：、。。。-3、中GTCGAC為點(diǎn)pn，，CCGCGG點(diǎn)點(diǎn)XbaI。引物中5基AT。pEYFP-C1-目標(biāo)粒ECFP-C1-YFP的構(gòu)建及鑒定55中GTCGAC為S，為酶．PEDF和目標(biāo)蛋白在神經(jīng)細(xì)胞（或膠質(zhì)細(xì)胞）中FRET研究2.PEDF蛋白和目標(biāo)蛋白在神petri皿里。PBS胞用15min，PBS液洗用0.5％Triton孔5min用PBS洗次用％閉30min將用％BSA按：1000的用PBS洗C孵1用BS洗3加200ulFluo—Antimedium防止熒光淬滅，在共聚焦顯微鏡下觀察。染48h后熒光顯微鏡下觀察并拍照后胞提取總蛋白進(jìn)行FRET：將和于，pECFP-PEDF和EYFP-目：

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