呼吸道九聯(lián)檢病原體檢測及其臨床意義教學(xué)課件

呼吸道九聯(lián)檢病原體抗體

檢測及其臨床意義

2021/4/261呼吸道感染呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)分為上呼吸道感染和下呼吸道感染2021/4/262上呼吸道感染常見急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，是呼吸道最常見的一種傳染病常見病因為病毒，少數(shù)由細(xì)菌引起?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥2021/4/263下呼吸道感染包括急性氣管/支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張等由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等微生物引起，其防治應(yīng)遵循預(yù)防為主、準(zhǔn)確診斷、及時治療的原則，治療時必須明確引起感染的病原體以選擇有效的抗生素2021/4/264呼吸道病原體常見的呼吸道病原體主要有病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體和立克次體等據(jù)統(tǒng)計，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起一種病原體可引起多種臨床癥狀，同一臨床表現(xiàn)可由多種病原體引起2021/4/265呼吸道病原體感染概況一、典型“致病菌”細(xì)菌：肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌等

癥狀：典型，咳嗽、膿性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有發(fā)熱，或有膿血痰病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多細(xì)菌性肺炎

②重癥致死性肺炎很多是細(xì)菌性

③上世紀(jì)50年代以前的肺炎90%以上為細(xì)菌性肺炎，現(xiàn)在報道約在40%左右

④肺炎鏈球菌大約占在60%2021/4/266呼吸道病原體感染概況二、非典型病原體

①進(jìn)展的、開放的概念，始用于20世紀(jì)30年代末，60年代首次發(fā)現(xiàn)了非典型的病原體——肺炎支原體

②泛指各種能引起肺炎的、臨床表現(xiàn)與典型肺炎不同的各種病原體（廣義）

③臨床癥狀不典型，差異大

④在CAP中感染的比例逐年增加，據(jù)報道大約占40-60%，逐漸引起各國醫(yī)療工作者注意2021/4/267（一）最常見的非典型病原體肺炎支原體、肺炎衣原體、軍團(tuán)菌等（狹義的非典型病原體）①感染比例高，超過“非典”50%②臨床癥狀：干咳為主，少痰或無痰，肺外癥狀較常見明顯，尤其軍團(tuán)菌感染，表現(xiàn)相對較重，多臟器受累明顯?？捎懈邿帷⒍Q、相對緩脈、血尿、腹痛、腹瀉、肝酶升高、電解質(zhì)紊亂、精神神經(jīng)癥狀等③β-內(nèi)酰胺類（青霉素類、頭孢類）、氨基糖苷類（鏈霉素）等藥物無效④治療：呼吸喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類2021/4/268（二）病毒類流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒、禽流感病毒等①季節(jié)性或區(qū)域性流行②臨床癥狀：干咳為主，少痰或無痰、呼吸困難，低氧血癥③治療：主要依靠對癥支持治療。早期抗病毒治療可能效果較好。預(yù)后取決于病毒類型和宿主對病毒的反應(yīng)2021/4/269（三）真菌性肺炎念珠菌，曲菌，新型隱球菌，放線菌，組織胞漿菌，毛霉菌屬等①除組織胞漿菌為原發(fā)吸入性感染外，多數(shù)為條件致?、诙喟l(fā)生在免疫低下患者和長時間接受廣譜抗生素治療的患者白色念珠菌肺炎2021/4/26109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:33:31PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3

社區(qū)獲得性肺炎社區(qū)獲得性肺炎（community-acquiredpneumonia,CAP）是指在非醫(yī)院環(huán)境中受感染因子侵襲所發(fā)生的肺部炎癥，以及住院后48小時內(nèi)或特殊病原菌在潛伏期10天內(nèi)所患肺炎，又稱院外獲得性肺炎。這種肺炎之所以被叫做”社區(qū)獲得性肺炎”是由于它很容易從社區(qū)中的一個成員傳播到另一個。CAP的發(fā)病率為4.7%-11.6%，其中22%-51%的CAP需住院治療；住院CAP死亡率7%，重癥CAP死亡率29%。（數(shù)據(jù)來自西班牙）2021/4/2612

社區(qū)獲得性肺炎

美國：感染率第一位的疾病美國：每年560萬感染肺炎，感染率5-10人/1000人/年WHO：第二大死因，僅次于心血管疾病中國：第五大死因中國：兒童死亡的第一病因

2021/4/2613各病原體在CAP中感染率《各國社區(qū)獲得性肺炎指南對非典型病原體的重視情況》《肺炎的診斷與治療研究進(jìn)展》數(shù)據(jù)來源：《重視非典型病原體在CAP致病中的作用》《要重視非典型病原體在小兒呼吸道疾病中的致病作用》等2021/4/2614呼吸道病原菌合并感染的分析119例小兒肺炎細(xì)菌感染97例，細(xì)菌感染及肺炎支原體同時感染19例。------檢驗醫(yī)學(xué)與臨床2009年12月第6卷第23期在SARS發(fā)病前階段，合并MP感染陽性率為69．3％(39／56)；發(fā)病后階段，合并MP感染陽性率為l8．6％(8／43）------JoumalofTropicalMedicineVo1．3No．3Sep．2003Mpn和Cpn合并陽性有27例．占總陽性數(shù)的45．0％

------中國優(yōu)生與遺傳雜志2001年第9卷第3期9例(1．2％)患兒MP-IgM和Cpn．IgM同時陽性；------世界感染雜志2006年第6卷第4期本次調(diào)查同時檢測了8種感染呼吸道的常見病毒，結(jié)果提示Mp、Cp多混合有病毒感染。

-------中國人獸共患病雜志：1002-2694(2005)03—0269-022021/4/2615社區(qū)獲得性肺炎青霉素問世前：CAP80%以上是由肺炎鏈球菌所致。1928年英國科學(xué)家弗萊明發(fā)現(xiàn)青霉素：拯救了千百萬肺炎患者的生命，肺炎鏈球菌雖仍是CAP最常見的病原體，但比例已明顯下降。非典型的病原體：如：肺炎支原體、肺炎衣原體、病毒、嗜肺軍團(tuán)菌等，明顯上升!

在非典型病原體感染中，

支原體肺炎病毒性肺炎尤其最為常見。2021/4/2616非典型呼吸道病原體這些病原體變異快，傳播廣，由于不易形成長期免疫力而難以預(yù)防和控制

流感病毒副流感病毒病毒呼吸道合胞病毒

腺病毒

2021/4/2617呼吸道病原體檢測現(xiàn)有的主要方法：病毒分離培養(yǎng)抗原檢測抗體檢測分子生物學(xué)方法等2021/4/2618檢測方法的比較檢測方法優(yōu)點缺點病毒分離培養(yǎng)特異性高，金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件要求高、靈敏度低，標(biāo)本中病原體量少時，易致假陰性?？乖瓩z測直接免疫熒光法簡便、快速、靈敏度和特異性均較高且可用于疾病的早期診斷需要特異性抗體、熒光顯微鏡，易受采樣限制抗體檢測

間接免疫熒光法靈敏度、特異性較高對疾病早期診斷沒有太大幫助酶聯(lián)免疫吸附法較快速，批量篩查特異性不高，假陽性多分子生物學(xué)方法靈敏度和特異性均很高操作繁瑣，價格昂貴2021/4/2619采樣抗原檢測拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。

伸入距離為從耳垂部到鼻尖長度的一半，一般針對兩周歲以下兒童，伸入距離約為拭子絨毛頭的長度兩倍拭子伸入后要輕輕捻動拭子轉(zhuǎn)3圈。

取樣后在一小時之內(nèi)洗脫到生理鹽水中，12小時內(nèi)送檢2021/4/2620抗原檢測采樣2021/4/2621采樣對結(jié)果影響較大非典型感染多為干咳，無痰/少痰陽性率低（標(biāo)本問題，病毒顆粒?。┛乖隗w內(nèi)存在時間短抗原檢測的劣勢2021/4/2622采樣抗體檢測2021/4/2623

檢測樣本要求

本試劑盒僅適用于檢測人血清。其血液采集需由專業(yè)人員無菌靜脈穿刺采集。建議使用消毒或無菌技術(shù)，以保持樣本的完整性。血清樣本采集后如不在8小時內(nèi)檢測應(yīng)2～8oC冷藏，如7天內(nèi)不檢測，則應(yīng)冷凍（-20oC）保存。不要反復(fù)凍融以防止免疫球蛋白滴度降低，特別是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若樣本中含有微粒要離心使之澄清。

2021/4/2624九項呼吸道病原體IgM抗體檢測試劑2021/4/2625九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測2021/4/2626常見檢測的九種非典型病原體嗜肺軍團(tuán)菌肺炎支原體Q熱立克次體肺炎衣原體腺病毒呼吸道合胞病毒流感病毒(甲型、乙型)副流感病毒2021/4/2627嗜肺軍團(tuán)菌廣泛分布于天然淡水或人工水域，革蘭氏陰性短桿菌易感人群：通常為老年人、兒童、吸煙者、等免疫功能低下者。流行：夏秋季節(jié)。尤其是在裝有中央空調(diào)的封閉空間內(nèi)易爆發(fā)。軍團(tuán)菌肺炎潛伏期為2-10天，癥狀：發(fā)冷、不適、肌痛、頭暈、頭痛，并有煩躁、呼吸困難、胸痛。IgM抗體在感染后1周左右出現(xiàn)，并可持續(xù)存在3-6個月。我國各省市每年均有病例報告。陽性率2%-5%2021/4/2628肺炎支原體肺炎支原體，是介于病毒與細(xì)菌之間的一種沒有細(xì)胞壁的病原體經(jīng)14-21天的潛伏期開始發(fā)病，患者有頭痛、乏力、無力干咳等癥狀I(lǐng)gM抗體一般在感染后1周出現(xiàn)，3-4周達(dá)到高峰，可持續(xù)存在3-6個月學(xué)齡兒童、嬰幼兒、青少年患病較多，兒童中最典型的綜合癥是氣管支氣管炎，許多成年感染者是無臨床癥狀的社區(qū)獲得性肺炎患者中由肺炎支原體引起的達(dá)40%冬季較多，地區(qū)性流行2021/4/2629Q熱立克次體Q熱立克次體，，是介于最小細(xì)菌和病毒之間的一類獨特的嚴(yán)格在活細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物

病原體儲存于動物中，傳染源主要是受染的牛，羊等家畜，在動物間以蜱傳播。動物感染后多無癥狀，但乳汁，尿，糞中可長期帶有病原體。對人的感染力特別強，是立克次體中唯一可不借助于媒介節(jié)肢動物而通過感染動物的排泄物污染環(huán)境后，通過接觸氣溶膠感染呼吸道。消化道等途徑感染。大部分病例發(fā)于春天或是初夏。其流行行分布全世界，我國吉林、四川、云南、新疆、西藏、廣西、福建、貴州等十幾個省市、自治區(qū)均有本病流行。其潛伏期12～39天，平均18天。IgM抗體一般在感染后2周左右出現(xiàn)，4-8周達(dá)高峰，可持續(xù)存在3-4個月。癥狀主要是高熱，劇烈頭痛，寒顫，嚴(yán)重乏力，肌痛，且常有胸痛，體溫升高。陽性率1%-2%2021/4/2630肺炎衣原體肺炎衣原體是一種比細(xì)菌小但比病毒大的生物，專性細(xì)胞內(nèi)寄生感染方式：人與人可通過呼吸道分泌物傳播8歲以上兒童易被感染，尤其是人群聚集處。肺炎衣原體肺炎占社區(qū)獲得性肺炎比例的10%左右多數(shù)起病緩慢，潛伏期30天左右，IgM抗體在發(fā)病2-3周出現(xiàn)，一般來說可持續(xù)存在2-6個月。臨床開始出現(xiàn)流感樣的癥狀如咽痛、頭痛、發(fā)熱。陽性率一般在1-5%左右2021/4/2631腺病毒腺病毒是一種無外殼的雙鏈DNA病毒，其很多與人類上、下呼吸道感染密切有關(guān)。

腺病毒肺炎多發(fā)生于7～24月嬰幼兒。起病時潛伏期2-14天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)存在2-3個月。冬春兩季常見，腺病毒肺炎約占病毒性肺炎的20%～30%。陽性率：15%-25%，居病毒性肺炎的第二位；

2021/4/2632呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是RNA病毒；

呼吸道合胞病毒（RSV）是嬰幼兒下呼吸道感染(包括毛細(xì)支氣管炎和肺炎)最重要的病因之一，可能是致命性的；在年長兒和成年人中也非常常見。在冬季爆發(fā)流行。呼吸道合胞病毒感染的潛伏期為3-7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)存在2～3個月；占病毒性肺炎的25%-35%左右；位居兒童病毒性肺炎第一位；2021/4/2633流感病毒流行性感冒病毒是一種造成人類及動物患流行性感冒的RNA病毒，呈球形；根據(jù)其核蛋白的抗原性可以分為三類:甲型、乙型、丙型該病毒呈季節(jié)性周期性流行爆發(fā)（12月-4月）甲型流感的流行每年都會發(fā)生乙型流感的流行只在每3-6年爆發(fā)一次，感染人數(shù)超過總?cè)丝诘?5%流感病毒的潛伏期為1-7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)存在2-3個月2021/4/2634副流感病毒常常引起兒童下呼吸道感染的一種病毒，其致病性僅次于呼吸道合胞病毒，它是單鏈的RNA病毒副流感病毒的潛伏期為2-7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)存在2-3個月

副流感病毒感染全年均可發(fā)生，第1和第2型副流感病毒感染常見于幼兒，局部流行發(fā)生于托兒所，兒科病房，小學(xué)及其他兒童場所。第3型為地方性流行，傳染性強陽性率：10%-20%臨床無法做出副流感的診斷，只能通過實驗室檢測來診斷2021/4/2635病原體潛伏期IgM抗體產(chǎn)生時間病原體潛伏期IgM產(chǎn)生時間Igm存在時間嗜肺軍團(tuán)菌2-10天1周左右3-6個月肺炎支原體14-21天1周左右3-6個月Q熱立克次體12-19天2周左右3-4個月肺炎衣原體30天左右2-3周2-6個月腺病毒2-14天1周左右2-3個月呼吸道合胞3-7天1周左右2-3個月流感病毒1-7天1周左右2-3個月副流感2-7天1周左右2-3個月2021/4/2636抗原抗體檢測IgMIgG2021/4/2637檢測原理間接免疫熒光法（IFA）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果2021/4/2638實驗步驟1樣本的稀釋：血清標(biāo)本與PBS按1:1比例稀釋稀釋后的血清加入吸附劑中，徹底混勻。處理后的血清要離心10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測2021/4/2639實驗步驟22021/4/26404.顯微鏡觀察病原體形態(tài)或熒光模式嗜肺軍團(tuán)菌桿狀肺炎支原體細(xì)胞外圍熒光模式立克次體球桿狀肺炎衣原體球狀腺病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）呼吸道合胞病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）甲型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）乙型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）副流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）2021/4/26415.結(jié)果判讀

1）陽性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞）；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。2021/4/2642

2）陰性結(jié)果：可觀察到軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。2021/4/2643嗜肺軍團(tuán)菌陰性：熒光弱、少、不規(guī)則2021/4/2644嗜肺軍團(tuán)菌陽性：熒光密集，且亮度較好，桿狀形態(tài)2021/4/2645肺炎支原體陰性：紅色細(xì)胞周圍無或少量熒光，亮度弱2021/4/2646肺炎支原體陽性：熒光占視野50%以上，亮度好，形態(tài)為明顯的細(xì)胞膜或胞漿2021/4/2647Q熱立克次體陰性：熒光弱、少、不規(guī)則2021/4/2648Q熱立克次體陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，形態(tài)典型2021/4/2649肺炎衣原體陰性：熒光弱、少2021/4/2650肺炎衣原體陽性：熒光密集，且亮度較好2021/4/2651腺病毒陰性：熒光弱、少2021/4/2652腺病毒陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞>3-5個2021/4/2653呼吸道合胞病毒陰性：熒光弱、少2021/4/2654呼吸道合胞病毒陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞>3-5個2021/4/2655甲型流感病毒陰性：熒光弱、少2021/4/2656甲型流感病毒陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞>3-5個2021/4/2657乙型流感病毒陰性：熒光弱、少2021/4/2658乙型流感病毒陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞>3-5個2021/4/2659副流感病毒陰性：熒光弱、少2021/4/2660副流感病毒陽性：熒光亮度強且數(shù)量多，平均每個視野的陽性細(xì)胞>3-5個2021/4/2661總結(jié)1、一卡九項，范圍更廣，不僅可以檢測五項病毒，而且可以檢測肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團(tuán)菌、Q熱立克次體2、檢測IgM抗體，利于早期發(fā)現(xiàn)，采用間接免疫熒光法，操作簡便，結(jié)果快速3、標(biāo)本為血清標(biāo)本，容易采集、容易保存4、鏡下熒光形態(tài)清晰，容易判定5、觀察熒光，準(zhǔn)確性好6、準(zhǔn)確檢測出哪種病原體感染，能為臨床診斷、治療提供強有力的幫助2021/4/2662臨床問題總結(jié)1、查到病毒陽性臨床意義大不大？病毒性呼吸道感染雖屬于自限性疾病，主要引起上呼吸道疾病，但具有較強的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥病毒性呼吸道感染疾病的預(yù)后取決于病毒類型和宿主對病毒的反應(yīng)臨床主要依靠對癥支持治療，早期抗病毒治療可能效果較好。2021/4/26632.與凝集法查支原體不同在哪里？哪種方法準(zhǔn)確？為什么？凝集法檢查的是總抗體IgM和IgG，九聯(lián)檢是檢測IgM在初次感染和再次感染的過程中，IgG和IgM抗體有不同的表現(xiàn)方式：初次感染時，幾乎在所有的情況下IgM和IgG均出現(xiàn)（IgM早于IgG出現(xiàn)）；而再次感染時可能不出現(xiàn)IgM，因此IgM的檢測是唯一有用的診斷方法。在許多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情況下僅在感染后2—3個月存在于血清中，因此是近期感染的一個有效標(biāo)志物。再次，對與嬰兒來說，因為出生前母體的IgG會被動的傳遞給了胎兒，所以對6個月以下的嬰兒IgM檢測是更為有用感染標(biāo)志物2021/4/26643.有一位病人，臨床表現(xiàn)為典型的病毒感染，九聯(lián)查出來是陰性？醫(yī)生有疑惑檢測時間？抗體峰值？再次感染？九種病原體之外的病毒感染？2021/4/26654.呼吸道九聯(lián)檢能否查H7N9?九聯(lián)檢甲型流感血清學(xué)反應(yīng)主要針對的是：所有血清亞型中常見的非可變區(qū)蛋白（基質(zhì)蛋白和核衣殼蛋白）的免疫學(xué)反應(yīng)。所以沒有必要每年改變包被的菌株。九聯(lián)檢能夠檢測到其他甲流血清亞型共同抗原表位引起的免疫反應(yīng)。臨床免疫檢驗手冊第六版摘錄如下：用細(xì)胞或蛋黃培養(yǎng)的病毒檢測針對核衣殼和基質(zhì)蛋白的抗體，由于存在型的特異性，不需要每年改變包被的抗原。這些檢測在檢驗中被廣泛應(yīng)用，特別是那些正在流行沒有被分離出的抗原。病原體感染人體后，一般于1周左右產(chǎn)生抗體，2周左右達(dá)到高峰，以后逐漸降低至消失，可在體內(nèi)存留2-3個月左右2021/4/2666

呼吸道傳染病的預(yù)防措施

避免受涼凈化環(huán)境管理傳染源，切斷傳播途徑補充營養(yǎng)注意生活規(guī)律加強個人衛(wèi)生和個人防護(hù)自動免疫2021/4/2667

謝謝！2021/4/26689、人的價值，在招收