活細(xì)胞高速激光共聚焦原理及應(yīng)用-2014-1-8

活細(xì)胞高速激光共聚焦顯微鏡簡介

生物技術(shù)研究室顏次慧2014-1-8一.活細(xì)胞觀察的優(yōu)勢活細(xì)胞動態(tài)觀察靜態(tài)成像科研角度能夠連續(xù)觀察細(xì)胞及分子水平的動態(tài)變化，闡明機(jī)制，更能說明問題需要大量樣品、時間點，樣品的差異化問題，出現(xiàn)假陽性結(jié)果應(yīng)用范圍既能滿足高分辨，又能夠滿足時間分辨要求比較高的實驗無法做時間分辨比較高的實驗，以及對細(xì)胞或分子實時動態(tài)三維觀察實驗過程實驗簡單化，操作步驟少，數(shù)據(jù)信息充足實驗設(shè)計復(fù)雜，步驟多，數(shù)據(jù)信息少活細(xì)胞/活體熒光成像目標(biāo)：在最大程度保證生物活性的前提下獲得真實的連續(xù)動態(tài)影像要求：盡可能減少外界因素對生理功能的影響，把光毒性和光漂白減少到最低，盡可能降低激發(fā)光強(qiáng)度，所以熒光信號非常微弱高速活細(xì)胞轉(zhuǎn)盤式激光共聚焦顯微鏡活細(xì)胞工作站二、活細(xì)胞觀察的革命性技術(shù)共聚焦原理

點掃描激光共聚焦雙轉(zhuǎn)盤式掃描激光共聚焦高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)構(gòu)成

共聚焦掃描單元單光子探測器Z軸防漂移顯微鏡用活細(xì)胞CO2培養(yǎng)室高精度XY電動平臺激光光源、激光耦合系統(tǒng)高速壓電陶瓷Z軸馬達(dá)研究及倒置熒光顯微鏡系統(tǒng)軟件高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)用途主要用于長時間觀察并記錄熒光標(biāo)記的活細(xì)胞和固定細(xì)胞/組織的共聚焦圖像，進(jìn)而分析細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間發(fā)生的信號傳導(dǎo)、蛋白表達(dá)、囊泡運動、細(xì)胞動力學(xué)、細(xì)胞與粒子之間的相互作用及生理學(xué)行為。單光子探測器AndoriXon探測極微弱信號，顯著減少活細(xì)胞光漂白以及光毒性損傷1.減少光毒性和光漂白高速活細(xì)胞激光共聚焦系統(tǒng)特點CCD芯片接收光信號并將其轉(zhuǎn)換為電信號，這一過程系統(tǒng)會產(chǎn)生一定的電子噪聲電子信號經(jīng)芯片上的增益寄存器可放大至1000倍ElectronMultiplyingCCD(EMCCD)2.先進(jìn)的片上增益技術(shù)CCDEMCCD3.多維共聚焦成像3D:XYT、XYZ4D:XYZT、XYZ5D:XYZT6D:XYZTP4.多視野觀察

SingleImageField~20Cells2x2Montage~80Cells3x3Montage~180cells增加了實驗數(shù)據(jù)的樣本量XY電動平臺探測單元ZDCCoverGlass:170umGlassbottomdish5.

Z軸防漂移

Z軸零漂移系統(tǒng)785nmLase