微生物的實驗室培養(yǎng)2014XU

選修一《傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用》《微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用》生殖方式：

二分裂細菌的形態(tài)球菌弧菌桿菌螺旋菌放線菌單細胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌孢子—生殖細胞病毒的結(jié)構(gòu)病毒的增殖：專題

微生物專題微生物概念及分類微生物培養(yǎng)微生物分離和計數(shù)微生物應(yīng)用一、微生物概念及分類1、概念：是指自然界中那些形態(tài)微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。第1節(jié)微生物的實驗室培養(yǎng)選修一專題2

課題1.微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識（一）微生物1、概念：是指自然界中那些形態(tài)微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看清楚的生物。2、包括：沒有細胞結(jié)構(gòu)的病毒、原核生物界、真菌界（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）生物細胞生物動物植物真菌原生生物非細胞生物真核生物原核生物細菌放線菌支原體衣原體藍藻病毒微生物————酵母菌、霉菌、蘑菇等菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)微生物的菌落特征因種而異.專題2課題1.微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(筆記）(一)微生物：1、微生物包括沒有細胞結(jié)構(gòu)的_______、原核生物、___菌（酵母菌、霉菌、蘑菇等）、原生生物界（草履蟲、變形蟲屬真核生物）2、菌落:（1）概念：單個或少數(shù)細菌等在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的子細胞群體，叫做菌落。（2）應(yīng)用：鑒定、分離、計數(shù)病毒真思考回憶:*組成細胞的主要元素有哪些?

C、H、O、N、P、S*是否還需要其它元素？

C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg等大量元素；Fe、Mn、Cu、Zn、B、CL、等微量元素*細菌等微生物的細胞也應(yīng)需要這些元素。C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg、Fe、Mn等碳源水氮源無機鹽（二）培養(yǎng)基1、概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需要，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。思考：配制培養(yǎng)基的基本原則（確定培養(yǎng)基配方的依據(jù)）_________________________2、營養(yǎng)成分（營養(yǎng)要素）多數(shù)培養(yǎng)基都含有水、無機鹽、碳源、氮源等四類營養(yǎng)物質(zhì)，在提供上述幾種營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還應(yīng)滿足微生物對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需要。根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要配制CC（二）培養(yǎng)基1、配制培養(yǎng)基的基本原則（確定培養(yǎng)基配方的依據(jù)）__________________________(2、多數(shù)培養(yǎng)基都含有_____________________等四類營養(yǎng)物質(zhì)，還應(yīng)滿足微生物對______、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及________的需要。3、最常用的碳源是____________；蛋白胨或牛肉膏可以為細菌提供___________類營養(yǎng)物質(zhì))根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要配制水、無機鹽、碳源、氮源葡萄糖氮源和碳源筆記PH氧氣2.微生物所需的營養(yǎng)要素碳源氮源(特殊營養(yǎng)物質(zhì))水無機鹽無機碳源：CO2、碳酸鹽—自養(yǎng)型有機碳源：糖類、脂肪等—異養(yǎng)型固氮菌：N2硝化細菌：NH3

其他：銨鹽、硝酸鹽、尿素、蛋白胨維生素、氨基酸、堿基等筆記3、培養(yǎng)基的種類

液體培養(yǎng)基（工業(yè)生產(chǎn)）固體培養(yǎng)基（分離計數(shù)）（1）根據(jù)物理性質(zhì)

半固體培養(yǎng)基（觀察運動，鑒定菌種）

選擇培養(yǎng)基（2）根據(jù)用途

鑒別培養(yǎng)基（3）化學(xué)成分學(xué)案P1(加大量瓊脂)(加少量瓊脂)合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基分離菌種鑒別菌種成分已知成分未知劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基3、培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基1）加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌2）不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌3）不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物4）加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基（依據(jù)標記基因）篩選導(dǎo)入了重組DNA的受體細胞單克隆抗體的制備選擇培養(yǎng)基（筆記）選擇培養(yǎng)基篩選、分離的細胞加入青霉素無氮培養(yǎng)基無碳培養(yǎng)基依標記基因，加入某種抗生素等酵母菌、霉菌等真菌固氮菌自養(yǎng)型細菌導(dǎo)入了重組DNA的受體細胞思考：1、所有的培養(yǎng)基都必須含碳源、氮源、水、無機鹽嗎？2、培養(yǎng)基中的營養(yǎng)要素，除了水以外的無機物只能是無機鹽？3、CO2既是自養(yǎng)型生物的碳源也是能源物質(zhì)？4、利用動物細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)病毒，行嗎？否；可以無碳源，也可無氮源否；碳源和氮源也可能是無機物否；光能或化學(xué)能病毒無細胞結(jié)構(gòu)，只能寄生在活細胞中生存。所以，要利用活細胞培養(yǎng)病毒。（三）無菌技術(shù)防止外來雜菌入侵。方法：消毒(溫和)滅菌(強烈)煮沸:巴氏：80℃下煮15min化學(xué)藥劑:

75%酒精、氯氣紫外線消毒：灼燒滅菌：干熱滅菌：。高壓蒸氣滅菌：獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：

無菌技術(shù)1、獲取純化培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。2、無菌措施：1)對實驗操作空間、操作者衣著和手進行清潔和消毒；對將培養(yǎng)用的器皿、接種工具和培養(yǎng)基進行滅菌2)實驗操作時已滅菌材料等應(yīng)避免與周圍物品接觸；實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行；接種工具等應(yīng)在酒精等火焰上灼燒后使用1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？2、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面?(15頁）3、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？防止雜菌污染消毒：指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌消毒的方法：1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線或化學(xué)藥物消毒滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）滅菌；（3）消毒。旁欄思考（三）無菌技術(shù)1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是？

防止外來雜菌的入侵2、消毒與滅菌的區(qū)別？消毒是殺死部分對人體有害的微生物；滅菌是殺死所有微生物。3、最常用的滅菌方法是？

高壓蒸汽滅菌。筆記1）、科學(xué)家們用脈胞霉（一種真菌）為材料，進行科學(xué)研究，用基本培養(yǎng)基來培養(yǎng)脈胞霉?；九囵B(yǎng)基中所含的營養(yǎng)要素一般包括：

_______________________________2）、酵母菌可用于食品工業(yè)的廢水處理，廢水中的淀粉或廢糖可為酵母菌的生長提供________類營養(yǎng)物質(zhì)。3）、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作為______類營養(yǎng)物質(zhì)加入到牛奶中的。4）、硝化細菌的碳源、氮源、能源依次為__________________________________。碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化釋放的化學(xué)能練習(xí)：二、實驗操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）1、計算2、稱量操作步驟3．溶化

4．滅菌：高壓蒸汽滅菌

5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。

閱讀:P16(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基目的：______滅菌平板冷凝后，為什么要將平板倒置？防止冷卻后形成的水珠滴落到培養(yǎng)基上，造成污染1、在液體培養(yǎng)基中加入_____________而制成固體培養(yǎng)基.2、制備培養(yǎng)基的操作排序①溶化（使各種原料、瓊脂等加熱溶化）②滅菌③調(diào)PH值④計算（各成分用量）⑤稱量⑥倒平板（冷卻至50℃，將平板倒過來放置）正確的操作順序：_____________3、平板倒置的目的_____________________________________________________瓊脂（凝固劑）④⑤①③②⑥防止冷卻后形成的水珠滴落到培養(yǎng)基上，造成污染6．無菌檢查：

將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

二、實驗操作1、在液體培養(yǎng)基中加入______________而制成固體培養(yǎng)基.3、平板倒置的目的___________________________________________________瓊脂（凝固劑）

滴落到培養(yǎng)基上，造成污染筆記2、制備培養(yǎng)基的操作排序：___________________________________________________________（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基防止冷卻后形成的水珠計算——稱量——溶化——調(diào)PH值——滅菌—倒平板（二）純化大腸桿菌1、接種：將要培養(yǎng)的菌種接入到培養(yǎng)基上的過程叫接種。微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。思考討論:1、在接種前如何檢測培養(yǎng)基是否被污染？2、調(diào)查湖水中細菌污染情況，要使實驗結(jié)果更可靠，對照組如何處理？3、使用過的培養(yǎng)基（物），在遺棄前應(yīng)如何處理？將未接種的培養(yǎng)基在無菌條件下放置一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。在另一平板上接種等量的無菌水滅菌；防止培養(yǎng)物污染環(huán)境。

平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次劃線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.微生物的恒溫培養(yǎng)思考討論：1、平板劃線法接種的目的是什么？2、平板劃線法接種的用途？3、平板劃線法能不能調(diào)查某種微生物的種群密度（計數(shù)）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。思考討論：1、稀釋涂布平板法接種的目的是什么？2、稀釋涂布平板法接種的用途？3、平板劃線法能不能調(diào)查某種微生物的種群密度（計數(shù)）？獲得單一菌落。微生物的分離、鑒定、篩選、計數(shù)。不能；一是不知道接種菌液的量，其次也沒有全部形成單一菌落。10-110-410-510-6平板劃線法稀釋涂布平板法相同點：分散出單細菌形成單菌落來分離菌種不同點：分別通過劃線和稀釋分散出單細菌，稀釋涂布平板法除分離菌種外還可以對微生物計數(shù)（二）純化大腸桿菌1、將準備培養(yǎng)的菌種放到培養(yǎng)基中的過程叫做__________。2、微生物接種的最常用方法是________________和_________________3、能夠獲得單一菌落的(分離）接種方法有_______________和________________4、能夠測定樣品中活菌數(shù)的接種方法是_______________平板劃線法稀