第四軍醫(yī)大分子生物學(xué)基因工程

一、重組DNA技術(shù)相關(guān)概念克隆(clone)來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。獲取同一拷貝的過程稱為克隆化(cloning)，即無性繁殖。（一）DNA克隆技術(shù)水平：分子克隆(molecularclone)即DNA克隆

細(xì)胞克隆個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物）DNA克隆應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)（同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）與載體DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的DNA分子——復(fù)制子(replicon)，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA分子，也稱基因克隆或重組DNA(recombinantDNA)

。目的①分離獲得某一感興趣的基因或DNA②獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）基因工程(geneticengineering)

——實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱基因工程，又稱重組DNA技術(shù)。重組DNA技術(shù)中常用的工具酶工具酶功能限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別特異序列，切割DNADNA連接酶催化DNA中相鄰的5′磷酸基和3′羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合或使兩個(gè)DNA分子或片段連接DNA聚合酶Ⅰ合成雙鏈cDNA分子或片段連接缺口平移制作高比活探針DNA序列分析填補(bǔ)3′末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而無53外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈DNA3末端標(biāo)記等逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA替代DNA聚合酶I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5′羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3′羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾TaqDNA聚合酶PCR堿性磷酸酶切除末端磷酸基（二）分子克隆實(shí)驗(yàn)指南—冷泉港實(shí)驗(yàn)室5’---A-G-C-T-A-G-A-A-T-T-C-T-T-A-C-C---3’3’---T-C-G-A-T-C-T-T-A-A-G-A-A-T-G-G---5’限制性核酸內(nèi)切酶（RestrictionEndonuclease）EcoRIenzymeG-A-A-T-T-CC-T-T-A-A-G5’---A-G-C-T-A-G3’---T-C-G-A-T-C-T-T-A-AA-A-T-T-C-T-T-A-C-C---3’G-A-A-T-G-G---5’-OH3’5’P--P5’3’OH-EcoliStrainR#I互補(bǔ)的5’突出末端限制性核酸內(nèi)切酶

限制性核酸內(nèi)切酶(restrictionendonuclease,RE)是識(shí)別DNA的特異序列,并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC

G+BamHⅠ細(xì)菌限制/修飾體系細(xì)菌基因組噬菌體DNAEcoRI甲基化酶EcoRI核酸酶限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine,1978限制性核酸內(nèi)切酶的類型及特性按限制酶的組成、與修飾酶活性關(guān)系以及切斷核酸的情況不同，分為三類：

Ⅰ型

Ⅱ型*

Ⅲ型限制性核酸內(nèi)切酶第一類（I型）限制性內(nèi)切酶能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在識(shí)別點(diǎn)附近的一些核苷酸上切割DNA分子中的雙鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨機(jī)的。這類限制性內(nèi)切酶在DNA重組技術(shù)或基因工程中用處不大，無法用于分析DNA結(jié)構(gòu)或克隆基因。這類酶如EcoB、EcoK等。限制性核酸內(nèi)切酶第二類(II型)限制性內(nèi)切酶能識(shí)別專一的核苷酸順序，并在該順序內(nèi)的固定位置上切割雙鏈。由于這類限制性內(nèi)切酶的識(shí)別和切割的核苷酸都是專一的。因此，這種限制性內(nèi)切酶是DNA重組技術(shù)中最常用的工具酶之一。限制性核酸內(nèi)切酶第三類（III型）限制性內(nèi)切酶也有專一的識(shí)別順序，但不是對(duì)稱的回文順序,在識(shí)別順序旁邊幾個(gè)核苷酸對(duì)的固定位置上切割雙鏈。但這幾個(gè)核苷酸對(duì)不是特異性的。因此，這種限制性內(nèi)切酶切割后產(chǎn)生的一定長(zhǎng)度DNA片段，具有各種單鏈末端。因此不能應(yīng)用于基因克隆。限制性核酸內(nèi)切酶限制酶識(shí)別序列特征A5’----3’----TTCGAHin

dIII

A----5’----3’AGCTT5’----CTGCAG3’----G----3’ACGTC----5’Pst

I

5’----AG3’----TCCT----3’GA----5’Alu

I

平末端長(zhǎng)度為4~8bp特征為回文結(jié)構(gòu)粘性末端限制性核酸內(nèi)切酶第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名，用大寫；第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫；第四個(gè)字母代表株；用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。命名HindⅢ

屬

系

株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血桿菌d株的第三種酶限制性核酸內(nèi)切酶同功異源酶來源不同的限制酶，但能識(shí)別和切割同一位點(diǎn)，這些酶稱同功異源酶。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC

G+BamHⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC

G+BstⅠ限制性核酸內(nèi)切酶同尾酶有些限制性內(nèi)切酶雖然識(shí)別序列不完全相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，稱為同尾酶。這兩個(gè)相同的粘性末端稱為配伍末端(compatibleend)。BamHⅠBglⅡGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCC

G++ATCTAG

GATCT

A限制性核酸內(nèi)切酶https:///products/restriction-endonucleases酶的活性：在適當(dāng)反應(yīng)條件下（溫度，pH，離子強(qiáng)度），1小時(shí)內(nèi)完全降解1μgλ

噬菌體DNA中所有同一限制內(nèi)切酶位點(diǎn)所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素(1)DNA的純度（蛋白質(zhì)，酚，氯仿，乙醇，SDS，高鹽濃度）；(2)DNA的甲基化程度；(3)酶切消化反應(yīng)的溫度；(4)DNA的分子結(jié)構(gòu)；(5)緩沖液的pH值。限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶反應(yīng)體系（15uL）：質(zhì)粒DNA6uL酶10.5uL酶20.5uLBuffer1.5uLH2O6.5uL限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶（DNALigase）催化雙鏈DNA的5’-磷酸末端和3’-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合

T4DNALigase

，10×T4DNALigaseBufferT4連接酶：連接效率高，既可用于粘端連接，也可用于平端連接。DNA連接酶DNA聚合酶TheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine,1959ForthediscoveryofDNApolymeraseI合成雙鏈cDNA分子缺口平移制作同位素標(biāo)記DNA探針DNA序列分析（一）大腸桿菌DNA聚合酶I（二）Klenow聚合酶Klenowfragment

smallfragment(323AA):having5′→3′exonucleaseactivitylargefragment(604AA):calledKlenowfragment,havingDNApolymerizationand3′→5′exonucleaseactivityNendCendcaroidDNA-polⅠ（三）熱穩(wěn)定DNA聚合酶第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的熱穩(wěn)定DNA聚合酶：Taq。最初的具有耐熱性的DNA聚合酶來自于水生棲熱菌（Thermusaquaticus），因此被稱為Taq。改善了低效的PCR反應(yīng)。Taq酶缺乏3‘-5’校正外切酶活性，因此，在復(fù)制DNA時(shí)有時(shí)會(huì)出錯(cuò)，造成DNA序列突變（錯(cuò)配），從古菌中獲得的Pwo酶及Pfu酶均有校正機(jī)制，能夠大大降低PCR反應(yīng)中的突變。將Taq與Pfu結(jié)合使用可以保證真實(shí)準(zhǔn)確得擴(kuò)增DNA。目的基因的獲取方法文庫篩選PCR獲取化學(xué)合成可以獲取序列未知基因，操作繁瑣獲取序列已知基因，操作相對(duì)簡(jiǎn)單合成序列已知的基因HumanDNA文庫（Library）（一）基因組DNA文庫胰島素基因生長(zhǎng)激素基因血紅蛋白基因存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)由載體攜帶所有基因組DNA的集合問題：如何篩選含目的基因的克隆？文庫篩選文庫篩選（二）CDNA文庫cDNA文庫概述

利用某種生物的總mRNA合成cDNA，再將這些cDNA與載體連接，轉(zhuǎn)入細(xì)菌細(xì)胞中進(jìn)行保存和擴(kuò)增，稱cDNA文庫。cDNA文庫特點(diǎn)

1)時(shí)空特異性構(gòu)建cDNA文庫時(shí)最好選取目的基因表達(dá)量最高的發(fā)育時(shí)期或這一時(shí)期的特殊組織。2)基因特異性來自結(jié)構(gòu)基因，僅代表某種生物的一小部分遺傳信息，且只代表正在表達(dá)的基因的遺傳信息。3）器官特異性有的結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)就有器官特異性，故由不同器官提取的mRNA所組建的cDNA文庫也就不同。4）代謝或發(fā)育特異性處于不同代謝階段（或發(fā)育階段）的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)亦不相同。相對(duì)于基因組文庫而言，cDNA文庫有優(yōu)點(diǎn)1）特別適用于RNA病毒的基因組結(jié)構(gòu)研究。2）出現(xiàn)假陽性的概率較低。3）有效地分析間斷基因的結(jié)構(gòu)。4）發(fā)育過程中時(shí)間調(diào)節(jié)基因及組織特異基因的表達(dá)特征的分析，都要用到cDNA文庫。不足之處1）包含的遺傳信息遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于基因組DNA文庫。2）不能直接獲得基因內(nèi)含子序列和基因編碼區(qū)外調(diào)控序列的結(jié)構(gòu)與功能方面信息。3）在cDNA文庫中，高豐度mRNA的cDNA克隆所占的比例比較高，分離起來比較容易，而低豐度mRNA的cDNA克隆所占的比例較低，分離也比較困難?；瘜W(xué)合成已知基因的核苷酸序列，或根據(jù)氨基酸序列推導(dǎo)核苷酸序列

一般用于小分子活性多肽基因的合成轉(zhuǎn)化菌篩選鑒定載體DNA

基因組DNA已知基因克隆---PCRβ-globingene

問題：如何在體外大量擴(kuò)增單基因？Forthe

improvementofthe

polymerasechainreaction

(PCR)technique,TheNobelPrizeinChemistry,1993KaryMullis引物dNTP模板DNA

耐高溫

DNA聚合酶PCR反應(yīng)要素PCR反應(yīng)過程變性

(95℃,30s）退火（55℃,30s）延伸（72℃,1min）30循環(huán)HowtoPerformPCR?“PCR僅僅是實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)小技巧，雖然其中的知識(shí)和智慧含量似乎并不豐富，但是畢竟沒有人更早的發(fā)明它。它對(duì)分子生物學(xué)的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了其他所有的技術(shù)”——諾貝爾頒獎(jiǎng)典禮AmazingImagination染色體DNA細(xì)菌Ori載體DNA（VectorDNA）

載體：指可以攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞的運(yùn)載工具。理想的載體應(yīng)符合的條件：1.具有自主復(fù)制能力，以保證重組DNA在宿主細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增；2.具有較多拷貝數(shù)，易與宿主細(xì)胞染色體DNA分開，便于分離提純；3.分子量相對(duì)較小，易于操作，并有足夠的接納目的基因的容量；4.在非宿主功能必須的DNA區(qū)段有較多的單一限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)用于目的基因的克??；5.有一個(gè)或多個(gè)篩選標(biāo)記抗性基因Ori目的DNA載體DNA克隆載體抗性基因Ori目的DNA啟動(dòng)子序列表達(dá)載體克隆載體——克隆了外源DNA后，轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞中進(jìn)行繁殖，使克隆的DNA片段數(shù)量大大增加。表達(dá)載體——將外源基因或DNA片段在宿主細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)。是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子--核糖體結(jié)合位點(diǎn)--克隆位點(diǎn)--轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，這是用來區(qū)別克隆載體和表達(dá)載體的標(biāo)志1.質(zhì)粒

DNA存在于細(xì)菌染色體之外的環(huán)狀雙鏈DNA分子，可獨(dú)立自主地進(jìn)行自我復(fù)制可從一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)菌廣泛存在于原核細(xì)胞，對(duì)宿主的生存不是必需的所攜帶的遺傳信息可賦予宿主一些遺傳性狀，如抗藥性按復(fù)制方式分類：嚴(yán)緊型，1-10拷貝/細(xì)胞;松弛型，10-1000拷貝/細(xì)胞載體DNApBR3221977年，F(xiàn)ranciscoBolivar克服當(dāng)時(shí)載體的各種缺陷，構(gòu)建了一個(gè)新的載體——pBR322，成為后來幾乎所有基因工程質(zhì)粒載體的祖先。質(zhì)粒載體的代表，長(zhǎng)4.36kb；在細(xì)菌中的拷貝數(shù)（分子個(gè)數(shù)）高，便于制備；有數(shù)個(gè)限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)用于插入外源片段；有四環(huán)素Tetr和Ampr兩個(gè)抗藥性基因標(biāo)記λ噬菌體DNA改造系統(tǒng)（允許插入的外源片段遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過質(zhì)粒，感染能力也大于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌的能力，所以一直作為基因組文庫和cDNA文庫的克隆載體）λgt系列（插入型，允許插入6-8kb，適用cDNA克?。〦MBL系列（置換型，允許插入可達(dá)30kb，適用基因組克隆，）2.噬菌體(phage)

M13噬菌體DNA改造系統(tǒng)（含lacZ基因）M13mp系列pUC系列載體DNA酵母人工染色體

(yeastartificialchromosome,YAC)細(xì)菌人工染色體

(bacterialartificialchromosome,BAC)動(dòng)物病毒DNA改造的載體（如腺病毒，腺病毒相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒）其他載體DNA1.粘性末端連接方式：(1)同一限制酶切位點(diǎn)連接(2)不同限制酶切位點(diǎn)連接配伍末端連接非配伍末端連接外源基因與載體的連接BamHⅠ切割反應(yīng)

GGATCCCCTAGGT4

DNA連接酶16oCGATCCGGCCTAG+目的基因用BamHⅠ切割載體DNA用BamHⅠ切割重組體載體自連目的基因自連同一限制酶切位點(diǎn)連接目錄不同限制酶切位點(diǎn)（非配伍末端）的連接EcoRⅠ切割位點(diǎn)Bg

lⅡ切割位點(diǎn)+EcoRⅠ+Bg

lⅡ雙酶切EcoRⅠ+Bg

lⅡ雙酶切T4

DNA連接酶16oC重組體配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點(diǎn)連接相似。目錄2.平端連接適用于：限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生的平端粘端補(bǔ)齊或切平形成的平端3.同聚物加尾連接在末端轉(zhuǎn)移酶(terminaltransferase)的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進(jìn)行粘端連接。5′3′3′5′載體DNA5′3′3′5′目的基因限制酶或機(jī)械剪切限制酶5′3′3′5′5′3′T(T)nT

T(T)nT3′5′5′

3′3′5′5′3′A(A)nA

A(A)nA3′5′λ-核酸外切酶λ-核酸外切酶末端轉(zhuǎn)移酶+dATP末端轉(zhuǎn)移酶+dTTPT(T)nTA(A)nAA(A)nAT(T)nTT4

DNA連接酶15oC重組體目錄4.人工接頭(linker)連接由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接。

人工接頭及其應(yīng)用CCGAATTCGGGCTTAAGC5′-3′-EcoRⅠEcoRⅠEcoRⅠEcoRⅠ目錄導(dǎo)入方式轉(zhuǎn)化(transformation)：

重組載體導(dǎo)入原核細(xì)胞轉(zhuǎn)染(transfection)：重組載體導(dǎo)入真核細(xì)胞感染(infection)：病毒載體導(dǎo)入細(xì)胞重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞受體菌條件安全宿主菌限制酶和重組酶缺陷處于感受態(tài)(competent)

重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞重組載體導(dǎo)入原核細(xì)胞重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞常用轉(zhuǎn)染方法：1.磷酸鈣轉(zhuǎn)染：使DNA形成一種DNA-磷酸鈣沉淀物粘附于細(xì)胞表面，通過內(nèi)吞作用被細(xì)胞捕獲。優(yōu)點(diǎn)：不需昂貴的儀器和試劑。2.電穿孔：利用儀器產(chǎn)生的高壓電脈沖，使細(xì)胞膜表面出現(xiàn)微小孔洞，重組質(zhì)粒可通過這些孔洞進(jìn)入細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)染效率高3.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法：利用脂質(zhì)體（一種人造類脂膜）攜帶DNA進(jìn)入細(xì)胞真核細(xì)胞表達(dá)載體：大多是穿梭載體，有兩套復(fù)制原點(diǎn)及選擇標(biāo)記，分別在大腸桿菌和真核細(xì)胞中作用。重組載體導(dǎo)入真核細(xì)胞

1.直接選擇法(1)

抗藥性標(biāo)記選擇(2)標(biāo)志補(bǔ)救(markerrescue)(3)分子雜交法原位雜交Southern印跡

2.免疫學(xué)方法如免疫化學(xué)方法及酶免檢測(cè)分析等重組體的篩選(插入失活法)抗藥性標(biāo)記選擇目錄抗性基因OriAmpR氨芐青霉素Ampicillin質(zhì)粒細(xì)菌人DNA組氨酸缺陷型大腸桿菌無組氨酸的培養(yǎng)基酵母咪唑甘油磷酸脫水酶基因促進(jìn)組氨酸合成λDNA重組體標(biāo)志補(bǔ)救目錄α互補(bǔ)的檢測(cè)目錄原位雜交目錄瓊脂糖凝膠電泳分離DNA凝膠制備上樣電泳染色結(jié)果觀察瓊脂糖凝膠電泳分離DNA凝膠制備——瓊脂糖的稱量凝膠濃度（％）分辨ＤＮＡ范圍（ｂｐ）０.３５０００～６０００００.６１０００～２０００００.９５００～７０００１.２４００～６０００１.５２００～３０００２１００～２０００瓊脂糖凝膠電泳分離DNA1.凝膠制備——瓊脂糖的熔解加熱后加熱前瓊脂糖凝膠電泳分離DNA1.凝膠制備——冷卻凝固瓊脂糖凝膠電泳分離DNA2.上樣瓊脂糖凝膠電泳分離DNA3.電泳瓊脂糖凝膠電泳分離DNA4.DNA染色溴化乙錠瓊脂糖凝膠電泳分離DNA5.結(jié)果觀察表達(dá)體系的建立表達(dá)載體的構(gòu)建受體細(xì)胞的建立表達(dá)產(chǎn)物的分離純化（六）克隆基因的表達(dá)克隆基因的表達(dá)1.原核表達(dá)體系（E.coli表達(dá)體系最為常用）標(biāo)準(zhǔn)：選擇標(biāo)志 強(qiáng)啟動(dòng)子翻譯調(diào)控序列 多接頭克隆位點(diǎn)E.coli表達(dá)體系的不足

不宜表達(dá)真核基因組DNA不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì)表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體(inclusionbody)

很難表達(dá)大量可溶性蛋白優(yōu)點(diǎn)：可表達(dá)克隆的cDNA及真核基因組DNA可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì)表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累缺點(diǎn)：操作技術(shù)難、費(fèi)時(shí)、經(jīng)濟(jì)轉(zhuǎn)染

——將表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程方法：磷酸鈣轉(zhuǎn)染DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染電穿孔脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染顯微注射

2.真核表達(dá)體系

酵母、昆蟲、哺乳類動(dòng)物細(xì)胞（一）疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆根據(jù)基因定位克隆之并研究其性質(zhì)，而認(rèn)識(shí)疾病的分子機(jī)制。三、重組技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系（二）生物制藥

重組DNA醫(yī)藥產(chǎn)品產(chǎn)品功能組織胞漿素原激活劑抗凝血液因子VIII促進(jìn)凝血顆粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落剌激因子剌激白細(xì)胞生成促紅細(xì)胞生成素剌激白細(xì)胞生成生長(zhǎng)因子(bFGF,EGF)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)與分化生長(zhǎng)素治療侏儒癥胰島素治療糖尿病干擾素(1b,2a,2b,)抗病毒感染及某些腫瘤白細(xì)胞介素激活、剌激各類白細(xì)胞超氧化物歧化酶抗組織損傷單克隆抗體利用其結(jié)合特異性進(jìn)行診斷試驗(yàn)、腫瘤導(dǎo)向治療乙肝疫苗(CHO,酵母)預(yù)防乙肝口服重組B亞單位菌體霍亂菌苗預(yù)防霍亂目錄基因診斷(geneticdiagnosis)是利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理，在DNA水平分析、鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換、缺失或插入等突變。（三）基因診斷基本過程區(qū)分或鑒定DNA的異常分離、擴(kuò)增待測(cè)的DNA片斷標(biāo)準(zhǔn).能正確擴(kuò)增靶基因；.能準(zhǔn)確區(qū)分單個(gè)堿基的差別；.本底或噪聲低，不干擾DNA的鑒定;.便于完全自動(dòng)化操作，適合大面積、大人群普查。（四）基因治療定義基因治療(genetherapy)是向有功能缺陷的細(xì)胞補(bǔ)充相應(yīng)功能的基因，以糾正或補(bǔ)償其基因的缺陷，從而達(dá)到治療的目的。方式體細(xì)胞基因治療(somaticcellgenetherapy)性細(xì)胞基因治療(germlinegenetherapy)1.產(chǎn)前診斷2.攜帶者測(cè)試3.癥候前診斷4.遺傳病易感性（五）遺傳疾病的預(yù)防思考題

Therearemanypossiblebenefitsofgeneticengineeringinhumans,likeendofhunger,cureforallailments,longlife,