高中生物人教版現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題本冊(cè)總復(fù)習(xí)總復(fù)習(xí)【區(qū)一等獎(jiǎng)】

選修3高二期中考試復(fù)習(xí)大題一、綜合題1．糖尿病是一種常見(jiàn)病，且發(fā)病率有逐年增加的趨勢(shì)，以致西方發(fā)達(dá)國(guó)家把它列為第三號(hào)“殺手”。治療該病的胰島素過(guò)去主要從動(dòng)物（如豬、牛）中獲得，自20世紀(jì)70年代遺傳工程（又稱(chēng)基因工程）發(fā)展起來(lái)以后，人們開(kāi)始采用這種高新技術(shù)生產(chǎn)胰島素，其操作的基本過(guò)程如下圖所示：（1）圖中基因工程的基本過(guò)程可概括為“四步曲”，即_________________、_________________、__________________、________________。（2）圖中的質(zhì)粒存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，在基因工程中通常被用作__________，從其分子結(jié)構(gòu)可確定它是一種_______________。（3）根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)的規(guī)律，在____________酶的作用下，把圖中甲與乙拼接起來(lái)（即重組）。（4）細(xì)菌進(jìn)行分裂后，其中被拼接起來(lái)的質(zhì)粒也由一個(gè)變成兩個(gè)，兩個(gè)變成四個(gè)……質(zhì)粒的這種增加方式在遺傳學(xué)上稱(chēng)為_(kāi)___________。目的基因通過(guò)活動(dòng)（即表達(dá)）后，能使細(xì)菌產(chǎn)生治療糖尿病的激素，這是因?yàn)榛蚓哂锌刂芲_______合成的功能，它的過(guò)程包括____________________。2．為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，沿海灘涂鹽堿地的開(kāi)發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)獲取真核生物的基因通常采用人工合成法，通過(guò)圖示中①方法合成的耐鹽堿基因中是不含____________的，如果要將耐鹽堿基因和質(zhì)粒重組，應(yīng)該在基因兩側(cè)的A和B位置除了接上以上兩個(gè)結(jié)構(gòu)外還需分別加入____________限制酶識(shí)別序列，這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)有利于質(zhì)粒和目的基因定向連接。(2)過(guò)程②采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，在PCR反應(yīng)體系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物質(zhì)，若目的基因擴(kuò)增4代，則共用了引物Ⅰ________個(gè)。(3)請(qǐng)畫(huà)出PstⅠ切割DNA形成黏性末端的過(guò)程：__________________________。(4)圖示中將基因表達(dá)載體構(gòu)建完成后沒(méi)有直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌，而是先將其導(dǎo)入大腸桿菌，目的是____________________。(5)在步驟⑤⑥過(guò)程中都需用__________________________處理兩類(lèi)細(xì)菌。為了確認(rèn)目的基因通過(guò)⑦過(guò)程導(dǎo)入植物細(xì)胞中后是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測(cè)的方法是用____________法。(6)假設(shè)該抗鹽堿基因D，通過(guò)基因工程導(dǎo)入水稻后連接到水稻的一條染色體上，則該水稻進(jìn)行減數(shù)分裂的細(xì)胞在聯(lián)會(huì)時(shí)有________個(gè)D基因。(12分)下列是生物學(xué)技術(shù)制備抗體的兩個(gè)途徑模式簡(jiǎn)圖。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)過(guò)程①至②抗體的獲取稱(chēng)為_(kāi)_________，其中①是__________過(guò)程。(2)④過(guò)程需要__________酶，⑤過(guò)程則需要的工具酶為_(kāi)___________。(3)②處需要篩選，其目的是____________________________________________。(4)結(jié)構(gòu)甲的組成必須包括____________________________________及目的基因等。(5)如果想用棉花產(chǎn)生該種抗體，則⑥過(guò)程的受體細(xì)胞通常選用__________，經(jīng)過(guò)篩選后再侵染棉花體細(xì)胞，轉(zhuǎn)化成功后通過(guò)________技術(shù)獲得能產(chǎn)抗體的轉(zhuǎn)基因棉花植株。4．（15分）下面是一項(xiàng)“利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)人胰島素的方法”的專(zhuān)利摘要，請(qǐng)回答：本發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)人胰島素。所用的人胰島素基因是依據(jù)植物“偏愛(ài)”的密碼子來(lái)設(shè)計(jì)所含的密碼子，通過(guò)某方法合成若干DNA片段，拼接而成，重組DNA分子可通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入番茄中，在番茄的果實(shí)中表達(dá)人胰島素。（1）本專(zhuān)利是采用__________方法獲得目的基因。獲得的人胰島素基因與人體細(xì)胞中胰島素基因的堿基序列不同，但兩者所編碼的蛋白質(zhì)中氨基酸序列相同，原因是________________。要想在體外獲得大量該目的基因的片段，可以采用__________技術(shù)。該技術(shù)中使用的關(guān)鍵酶是____________；原料是四種脫氧核苷酸。（2）根據(jù)上述摘要，轉(zhuǎn)基因操作時(shí)所用的載體是___________，載體上的________可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。（3）如果要檢測(cè)在受體細(xì)胞中是否存在目的基因可采用____________技術(shù),再經(jīng)方法培養(yǎng)成個(gè)體。5．為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開(kāi)發(fā)利用備受關(guān)注。我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。（1）若已獲取耐鹽基因的mRNA，可通過(guò)獲取PG基因。（2）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性?xún)?nèi)切酶作用于圖中的處，DNA連接酶作用于處。（填“a”或“b”）（3）將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和法。（4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)導(dǎo)入是否成功，又要用方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。（5）進(jìn)行基因工程操作一般要經(jīng)過(guò)的四個(gè)步驟是_______________、_____________、____________、_____________。6．下面是將乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過(guò)程及有關(guān)資料，請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。資料1：巴斯德畢赤酵母菌可用培養(yǎng)基中甲醇作為其生活的唯一碳源，同時(shí)AOX1基因（醇氧化酶基因）受到誘導(dǎo)而表達(dá)，5'AOX1和3'AOXl（TT）是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子，此啟動(dòng)子也能使外源基因高效表達(dá)。資料2：巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒，下圖為科學(xué)家改造的pPIC9K質(zhì)粒，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒在特定部位酶切后形成的重組DNA片段可以整合到酵母菌染色體上，最終實(shí)現(xiàn)目的基因的表達(dá)。（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上_________限制酶識(shí)別序列（SnaBI、AvrII、SacI、BglII四種限制酶的識(shí)別序列均不相同），這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化。（2）酶切獲取HBsA9基因后，需用______________將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，根據(jù)步驟②可知步驟①將重組質(zhì)粒先導(dǎo)入大腸桿菌的目的是______________。（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶______________來(lái)切割從大腸桿菌分離的重組質(zhì)粒從而獲得圖中所示的重組DNA片段，然后將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。（4）為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入______________以便篩選。（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入______________以維持其生活，同時(shí)誘導(dǎo)HBsA9基因表達(dá)。（6）與大腸桿菌等細(xì)菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是在蛋白質(zhì)合成后，細(xì)胞可以對(duì)其進(jìn)行_______并分泌到細(xì)胞外，便于提取。（7）培育轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞所利用的遺傳學(xué)原理是______________。7．（11分）如圖為制作奶山羊乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)某種蛋白質(zhì)的流程圖，請(qǐng)分析回答：(1)圖中A、B分別表示：____、____。(2)①過(guò)程用激素對(duì)奶山羊a進(jìn)行________處理，②過(guò)程中對(duì)奶山羊b產(chǎn)生的精子在體外受精前需用________法進(jìn)行獲能處理。對(duì)采集的卵母細(xì)胞要在體外培養(yǎng)至________期，才能與獲能的精子受精。過(guò)程④常采用________法將目的基因?qū)胧芫褍?nèi)。為獲得較多的相同的轉(zhuǎn)基因奶山羊d的早期胚胎，⑤可采用________。在將早期胚胎移植入代孕奶山羊子宮內(nèi)之前，需檢測(cè)早期胚胎細(xì)胞是否已經(jīng)導(dǎo)入目的基因，宜采用________技術(shù)。(3)蛋白質(zhì)工程中，要對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，必須通過(guò)基因修飾或基因合成來(lái)完成，而不直接改造蛋白質(zhì)，原因是__________________________________________________。8．2023年，屠呦呦因發(fā)現(xiàn)青蒿素治療瘧疾的新療法獲獎(jiǎng)。工業(yè)上青蒿素一般從青蒿植株中提取,產(chǎn)量低，價(jià)格高?；蚬こ碳凹?xì)胞工程等為培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路?？茖W(xué)家先通過(guò)紫外線(xiàn)處理大量青蒿幼苗后，偶然發(fā)現(xiàn)一株高產(chǎn)植株。通過(guò)基因測(cè)序發(fā)現(xiàn)該高產(chǎn)植株控制青蒿素合成相關(guān)的一種關(guān)鍵酶的基因發(fā)生了突變。（1）提取了高產(chǎn)植株的全部DNA后，要想快速大量獲得該突變基因可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是。（2）如果用青蒿某個(gè)時(shí)期mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的雙鏈cDNA片段，用該雙鏈cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)后，理論上可以產(chǎn)生約為_(kāi)_________個(gè)DNA分子，該雙鏈與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做青蒿的________________,獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列___________（填“相同”或“不同”）。（3）將獲得的突變基因?qū)肫胀ㄇ噍镏?，先?gòu)建基因表達(dá)載體，圖l、2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答：用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒在其目的基因前要加上特殊的啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是__________識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)。（4）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)，應(yīng)采取技術(shù)。目的基因?qū)虢M織細(xì)胞后，通過(guò)技術(shù)培育出青蒿幼苗。10．干擾素是抗病毒的特效藥，干擾素基因缺失的個(gè)體，免疫力嚴(yán)重下降，科學(xué)家設(shè)計(jì)了以下流程，利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失的患者進(jìn)行基因治療，根據(jù)所學(xué)的知識(shí)，結(jié)合圖中相關(guān)信息，回答以下問(wèn)題：（1）上圖中進(jìn)行的是_________（填“體內(nèi)”或“體外”）基因治療，該過(guò)程中利用的生物工程技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)和_____________等。（2）ES細(xì)胞是由早期胚胎或_____________中分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞,具有_____________性，可以將其培養(yǎng)成人體各種組織器官。（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的_________________，該結(jié)構(gòu)除了復(fù)制原點(diǎn)外，至少包含_________________和干擾素基因等；為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá)，可以采用_________________的方法。（4）為了快速獲得更多的目的基因常常采用________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。11．慢性病人常出現(xiàn)白蛋白值偏低的狀況（比如慢性肝病、慢性腎病、腫瘤等），缺乏白蛋白人就容易出現(xiàn)浮腫。人體的白蛋白正常值在每100ml血液中含有3．8～4．8克，如果比正常值低很多時(shí)就需要注射人血白蛋白，所以臨床上對(duì)白蛋白需求量很大。下圖是利用嶗山奶山羊乳腺生物反應(yīng)器制備藥用白蛋白的流程圖：(1)要實(shí)現(xiàn)①超數(shù)排卵，應(yīng)在嶗山奶山羊A發(fā)情周期的某一階段用處理，然后在恰當(dāng)時(shí)期采集卵子。通過(guò)②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理，對(duì)羊的精子常用化學(xué)誘導(dǎo)法，即用一定濃度的誘導(dǎo)精子獲能。(2)若我們已知白蛋白基因的堿基序列，一般采用獲取目的基因。要使人的白蛋白基因在奶山羊乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)，完整的基因表達(dá)載體要包括目的基因、、、標(biāo)記基因等部分。(3)過(guò)程④需將重組質(zhì)粒用方法注入受精卵的雄原核內(nèi)，在顯微鏡下判斷是否完成受精作用的標(biāo)志是。(4)對(duì)移植前的胚胎進(jìn)行性別鑒定時(shí)，宜取囊胚期的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，一般采用SRY-PCR方法，選擇出現(xiàn)陰性反應(yīng)的（性別）胚胎進(jìn)行移植。（5）為了使胚胎移植能成功，需要對(duì)代孕奶山羊C進(jìn)行處理，使之與供體的生理狀況保持相同。12．下圖是利用工程菌(大腸桿菌)生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的實(shí)驗(yàn)流程。所用的pBR322質(zhì)粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切點(diǎn)各一個(gè)，且三種酶切割形成的末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因。請(qǐng)回答以下相關(guān)問(wèn)題：(1)過(guò)程①所用到的組織細(xì)胞是________________，過(guò)程④所用的酶是________。⑤過(guò)程常用________溶液處理大腸桿菌。(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時(shí)形成的DNA片段種類(lèi)與用一種酶和兩種酶分別切割時(shí)形成的DNA片段種類(lèi)________(填“相同”或“不同”)。(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和質(zhì)粒，完成過(guò)程④、⑤后(受體大腸桿菌不含Ampr、Tetr質(zhì)粒)，將三角瓶?jī)?nèi)的大腸桿菌先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無(wú)菌牙簽挑取培養(yǎng)基甲上的單個(gè)菌落，分別接種到乙和丙兩個(gè)培養(yǎng)基的相同位置上，一段時(shí)間后，菌落的生長(zhǎng)狀況如圖乙、丙所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選________________的大腸桿菌；接種到培養(yǎng)基乙上的大腸桿菌菌落，能存活的大腸桿菌體內(nèi)導(dǎo)入的是______________________的質(zhì)粒。含有目的基因的大腸桿菌在培養(yǎng)基乙和丙上的生存情況是____________________。(4)將大腸桿菌培養(yǎng)在含青霉素、四環(huán)素培養(yǎng)基上的過(guò)程，屬于基因工程基本操作中的__________________________步驟。參考答案1．（1）獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定（2）載體小型環(huán)狀DNA分子（3）DNA連接（4）擴(kuò)增蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和翻譯【解析】（1）基因工程的操作步驟為：獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。（2）質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀DNA分子，基因工程中常用的一種載體。（3）把圖中甲與乙拼接起來(lái)需要采用DNA連接酶；（4）質(zhì)粒為DNA分子，質(zhì)粒由一個(gè)變成兩個(gè)，兩個(gè)變成四個(gè)…的增加方式在遺傳學(xué)上稱(chēng)為DNA擴(kuò)增?；蚓哂锌刂频鞍踪|(zhì)合成的功能，且基因控制蛋白質(zhì)的合成包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過(guò)程。2．(1)啟動(dòng)子和終止子EcoRⅠ、SmaⅠ(2)15(3)(4)獲取大量重組質(zhì)粒(讓目的基因擴(kuò)增)(5)Ca2＋抗原—抗體雜交(6)2【解析】試題分析：（1）由于目的基因的非編碼區(qū)不轉(zhuǎn)錄形成mRNA，所以反轉(zhuǎn)錄獲得的基因不含非編碼區(qū)，即不含啟動(dòng)子和終止子。為了有利于質(zhì)粒和目的基因定向連接，應(yīng)選擇雙酶切，即選擇EcoRⅠ、SmaⅠ。（2）目的基因擴(kuò)增4代，共形成16個(gè)DNA，需引物15個(gè)。（3）黏性末端由兩條鏈構(gòu)成。（4）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是讓目的基因擴(kuò)增，獲取大量重組質(zhì)粒。（5）將目的基因?qū)爰?xì)菌的方法是用Ca2+處理，使之處于感受態(tài)，檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)，方法是抗原－抗體雜交法。（6）該轉(zhuǎn)基因水稻中有一個(gè)基因D，聯(lián)會(huì)時(shí)DNA已復(fù)制，此時(shí)有2個(gè)D基因?？键c(diǎn)：本題主要考查基因工程，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)和能用文字、圖表以及數(shù)學(xué)方式等多種表達(dá)形式準(zhǔn)確地描述生物學(xué)方面的內(nèi)容的能力。3．（1）單克隆抗體細(xì)胞融合（或B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合）（2）逆轉(zhuǎn)錄限制酶和DNA連接酶（3）篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞（4）啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因（5）土壤農(nóng)桿菌植物組織培養(yǎng)【解析】試題分析：（1）分析圖中細(xì)胞A是B淋巴細(xì)胞，Y細(xì)胞是骨髓瘤細(xì)胞，所以①細(xì)胞融合過(guò)程，②是篩選、培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞分泌獲得單克隆抗體的過(guò)程。（2）圖中④過(guò)程是利用mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成目的基因的過(guò)程該過(guò)程需要反轉(zhuǎn)錄酶。⑤過(guò)程是構(gòu)建基因表達(dá)載體，需要對(duì)目的基因與質(zhì)粒進(jìn)行切割和連接，所以需要工具酶：限制酶和DNA連接酶。（3）②處篩選目的是淘汰不能增殖的細(xì)胞和不能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。（4）構(gòu)建的基因表達(dá)載體必須包含的結(jié)構(gòu)組成有目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。（5）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法必須先把基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞——土壤農(nóng)桿菌中，再通過(guò)土壤農(nóng)桿菌去侵染棉花體細(xì)胞，最后經(jīng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)得到能產(chǎn)生抗體的棉花植株?？键c(diǎn)：本題考查選修三中細(xì)胞工程和基因過(guò)程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，能理論聯(lián)系實(shí)際，綜合運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決自然界和社會(huì)生活中的一些生物學(xué)問(wèn)題。4．（除特殊標(biāo)出外，每空2分，共15分）（1）人工合成（1分）密碼子具有簡(jiǎn)并性，基因序列不同，蛋白質(zhì)可以相同PCR熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（或Taq酶）（2）農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒T–DNA（3）DNA分子雜交組織培養(yǎng)【解析】⑴由題意可知，所用的人胰島素基因是依據(jù)植物“偏愛(ài)”的密碼子來(lái)設(shè)計(jì)所含的密碼子，通過(guò)人工合成若干DNA片段拼接而成，所以本專(zhuān)利是采用人工合成方法獲得目的基因的。獲得的人胰島素基因與人體細(xì)胞中胰島素基因的堿基序列不同，但兩者所編碼的蛋白質(zhì)中氨基酸序列相同，原因是密碼子具有簡(jiǎn)并性，基因序列不同，蛋白質(zhì)可以相同；體外擴(kuò)增目的基因采用的技術(shù)是PCR，使用的酶是耐高溫的DNA聚合酶。⑵利用農(nóng)桿菌作為運(yùn)載體時(shí)，需要將基因表達(dá)載體插入到農(nóng)桿菌的T—DNA，因?yàn)槠渚哂锌梢赞D(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上的特點(diǎn)。⑶檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是DNA分子雜交；含有目的基因的受體細(xì)胞經(jīng)過(guò)植物組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因個(gè)體。5．（1）反轉(zhuǎn)錄（2）a；a（3）基因槍法（花粉管通道法）（4）耐鹽基因（目的基因）一定濃度的鹽水澆灌（移裁到鹽堿地中）（5）目的基因的獲??；基因表達(dá)載體的構(gòu)建；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)與鑒定【解析】試題分析：（1）若已知mRNA，可通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因。（2）a是磷酸二酯鍵，b是氫鍵，限制性?xún)?nèi)切酶和DNA連接酶都作用于磷酸二酯鍵。（3）植物作受體細(xì)胞是導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法。（4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功可用放射性同位素標(biāo)記的耐鹽基因作探針進(jìn)行ＤＮＡ分子雜交，又可用一定濃度的鹽水澆灌（移裁到鹽堿地中）方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。（5）基因工程的四個(gè)步驟是：目的基因的獲?。换虮磉_(dá)載體的構(gòu)建；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)與鑒定。考點(diǎn)：基因工程6．（1）SnaBⅠAvrⅡ（2）DNA連接酶大量重組質(zhì)粒（3）BglⅡ（4）DNA分子雜交（5）甲醇（6）加工（修飾）（7）基因重組【解析】（1）重組質(zhì)粒上的目的基因若要表達(dá)，需要目的基因的首尾含有啟動(dòng)子和終止子．而SnaBⅠ、AvrⅡ識(shí)別的序列在啟動(dòng)子與終止子之間，只要在目的基因兩側(cè)A和B位置分別接上這兩種序列，并用SnaBⅠ、AvrⅡ這兩種內(nèi)切酶對(duì)質(zhì)粒和目的基因同時(shí)切割，便會(huì)各自出現(xiàn)相同的粘性末端，便于重組與表達(dá)，同時(shí)防止自身環(huán)化，因此在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的識(shí)別序列。（2）①用DNA連接酶將切割后的HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒；②導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)，目的是利用大腸桿菌無(wú)性繁殖速度，短時(shí)間內(nèi)可獲取大量的重組質(zhì)粒。（3）重組DNA的兩側(cè)分別是啟動(dòng)子和終止子，除BglⅡ外，其它限制酶會(huì)破壞含有啟動(dòng)子、終止子的目的基因。（4）用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)是否導(dǎo)入目的基因。（5）資料1顯示，甲醇為該酵母菌的唯一碳源，同時(shí)誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。（6）酵母菌為真核生物，細(xì)胞內(nèi)具有對(duì)分泌蛋白加工的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，細(xì)菌等原核生物，不具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器。（7）培育轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞所利用的遺傳學(xué)原理是基因重組。【考點(diǎn)定位】基因工程的應(yīng)用7．(1)推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列基因表達(dá)載體(2)超數(shù)排卵化學(xué)誘導(dǎo)MⅡ顯微注射胚胎分割技術(shù)DNA分子雜交(3)改造后的基因能夠遺傳（或改造基因易于操作）【解析】(1)蛋白質(zhì)工程的基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)的功能出發(fā)一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列一找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）。(2)對(duì)供體母奶山羊進(jìn)行超數(shù)排卵處理，對(duì)羊、牛等生物進(jìn)行精子獲能處理采用化學(xué)誘導(dǎo)法。采集的卵母細(xì)胞要在體外培養(yǎng)至MⅡ期，才能與獲能的精子受精。將基因表達(dá)載體導(dǎo)人動(dòng)物受精卵常采用顯微注射法。獲得多個(gè)相同胚胎用胚胎分割技術(shù)，檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞用DNA分子雜交技術(shù)。(3)蛋白質(zhì)工程通過(guò)改造基因?qū)崿F(xiàn)是因?yàn)榛蚰軌蜻z傳。【答案】（1）DNA雙鏈復(fù)制（2）230cDNA文庫(kù)（或部分基因文庫(kù)）不同（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因（答對(duì)一個(gè)即得分）RNA聚合酶（4）抗原抗體雜交技術(shù)植物組織培養(yǎng)（1分）【解析】（1）PCR擴(kuò)增原理是DNA雙鏈復(fù)制。（2）DNA復(fù)制是指數(shù)級(jí)增加的，擴(kuò)增了30次，理論上應(yīng)有230個(gè)DNA分子。該雙鏈與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做青蒿的cDNA文庫(kù)。獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列不同，因?yàn)閏DNA文庫(kù)中沒(méi)有基因的內(nèi)含子。（3）由圖分析可知用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，因?yàn)镾maⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因。啟動(dòng)子是RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，是一段特殊的DNA序列。（4）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)，應(yīng)采取抗原-抗體雜交技術(shù)。目的基因?qū)虢M織細(xì)胞后應(yīng)通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出青蒿幼苗，利用的原理是植物細(xì)胞的全能性。【考點(diǎn)定位】本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考察考生對(duì)知識(shí)點(diǎn)的理解掌握和對(duì)圖形分析能力?！久麕燑c(diǎn)睛】易錯(cuò)警示規(guī)避與基因工程操作有關(guān)的7個(gè)失分點(diǎn)（1）目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟動(dòng)子與終止子之間的部位。（2）基因工程操作過(guò)程中只有第三步（將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞）沒(méi)有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。（3）原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。（4）轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是目的基因整合到受體細(xì)胞染色體基因組中。（5）一般情況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時(shí)可用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。（6）不熟悉標(biāo)記基因的種類(lèi)和作用：標(biāo)記基因的作用——篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見(jiàn)的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因（表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì)）等。（7）還應(yīng)注意的問(wèn)題有：①基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子（DNA片段）≠起始密碼子（RNA）；終止子（DNA片段）≠終止密碼子（RNA）。②基因表達(dá)載體的構(gòu)建是最核心、最關(guān)鍵的一步，在體外進(jìn)行。9．（1）限制性核酸內(nèi)切酶微生物能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列并在特定位點(diǎn)切斷DNA（2）鳥(niǎo)槍法分別與運(yùn)載體結(jié)合帶有目的基因的DNA片段（3）提取目的基因目的基因與運(yùn)載體結(jié)合將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)和表達(dá)【解析】試題分析：⑴在基因工程中，獲取目的基因使用的工具酶是限制酶，限制酶主要存在于微生物中，限制酶的特點(diǎn)是識(shí)別特定序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA分子。⑵鳥(niǎo)槍法獲得目的基因的過(guò)程中，將目的基因片段與運(yùn)載體結(jié)合，然后選擇出含有目的基因的DNA片段。⑶基因工程的四個(gè)步驟為獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，目的基因的檢測(cè)和鑒定?？键c(diǎn)：本題主要考查基因工程，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。10．體外核移植技術(shù)原始性腺發(fā)育的全能基因表達(dá)載體啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因抗原一抗體雜交PCR【解析】試題分析：分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程，其中①表示獲得重組胚胎的過(guò)程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程；③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。（1）分析圖解可知，上圖中進(jìn)行的是體外基因治療，該過(guò)程利用的生物工程技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)和核移植技術(shù)等。

（2）ES細(xì)胞是由早期胚胎或原始性腺中分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞，利用其具有（發(fā)育的）全能性，可以將其培養(yǎng)成人體各種組織器官。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體除了復(fù)制原點(diǎn)外，至少包含啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和干擾素基因等；為檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況，可采用抗體-抗原雜交技術(shù)，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已成功表達(dá)。（4）可以利用PCR技術(shù)對(duì)體外基因進(jìn)行大量復(fù)制?！军c(diǎn)睛】本題結(jié)合利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程圖，綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記細(xì)胞工程的操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記核移植技術(shù)的過(guò)程