ABI熒光定量PCR中文說明書與培訓(xùn)資料ABIPrism7300安裝培訓(xùn)課件

ABIPrism7300/7500實時定量PCR儀

用戶培訓(xùn)講義2005年用戶培訓(xùn)流程：4、報修請撥打全國的維護(hù)中心電話：8008100192。1、安裝完畢，工程師按照SOP培訓(xùn)儀器和軟件的操作；2、具備一定經(jīng)驗的用戶，建議參加AB公司的培訓(xùn)班，接受應(yīng)用及故障排除培訓(xùn)；培訓(xùn)班在北京、上海、廣州等地定期舉行，每臺儀器有兩個免費名額；培訓(xùn)班日程表每半年更新一次，可以到AB公司的網(wǎng)站上查詢：。3、鼓勵用戶與AB公司的應(yīng)用專家直接聯(lián)系，協(xié)商進(jìn)行現(xiàn)場標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣品的實驗培訓(xùn)；AB產(chǎn)品線的聯(lián)系方法：陳云地：-407，8008203939培訓(xùn)內(nèi)容傳統(tǒng)PCR的過程：三個步驟一、變性：DNA雙鏈結(jié)構(gòu)被分開；94oC-96oC二、復(fù)性：引物結(jié)合到DNA鏈上；40oC-65oC三、延伸：新DNA合成。72oC傳統(tǒng)PCR的過程：24816傳統(tǒng)的檢測方法使用的是“終點法”：即在反映完成以后再進(jìn)行檢測，如跑膠。傳統(tǒng)PCR的檢測方法：入射光染料分子出射光熒光物質(zhì)在接受了外界光的照射后，能夠向外發(fā)射波長比入射光長的光探針法：HighEnergymoleculeLowenergymolecule能量不同的兩個染料分子在空間距離上很接近時，在受到外界光照射的時候，能量高的分子就會將吸收到的能量轉(zhuǎn)移至能量低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已經(jīng)降低，高能的分子就不會向外發(fā)光，所以，對于高能分子來說，光就好像是被淬滅了一樣。能量轉(zhuǎn)移：探針法：HighEnergymoleculeLowenergymolecule探針法：當(dāng)兩個染料分子在空間位置上距離很遠(yuǎn)時，能量高的分子所吸收的能量就不能轉(zhuǎn)移至能量低的分子上，這樣，兩個分子就會各自向外發(fā)出自己特定波長的光。每產(chǎn)生一個新的片段，就產(chǎn)生一個熒光分子探針法：1248熒光值的不斷增加，代表著體系里面的DNA量越來越多。染料法：實時定量PCR的結(jié)果計算所有的樣品里的DNA的量都是在按每個循環(huán)兩倍的速度增加；當(dāng)所有的樣品的報告熒光的強(qiáng)度都達(dá)到某一個數(shù)值時，各個樣品所經(jīng)歷過的循環(huán)數(shù)與樣品的起始濃度有關(guān)，起始濃度越高，所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)越少。循環(huán)數(shù)濃度lg1250lg2500lg5000lg10000lg20000141516171815lg1000017lg2500例子：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們可以算出未知樣品的起始濃度是：未知樣品1：未知樣品2：2500100001517例子：ABIPrism7300光源入射光濾光片半透鏡樣品架四色濾光片組檢測器7300光路圖光源入射光濾光片半透鏡樣品架五色濾光片組檢測器7500光路圖電腦對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到各種顏色的光的信號強(qiáng)度數(shù)據(jù)：Ct定義好了基線的start和endcycle，threshold后，軟件對每個樣品進(jìn)行分析，得到了各個樣品的Ct值。線性圖譜：對數(shù)圖譜：基線期指數(shù)增長期線