微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證第一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化管理制定嚴(yán)格的管理度制定規(guī)范化操作程序

影響微生物試驗(yàn)結(jié)果的重要因素包括：培養(yǎng)基的質(zhì)量和規(guī)范化操作菌種的保藏及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確判斷等。第二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無(wú)菌性檢查適用性檢查有效的方法方法驗(yàn)證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷第三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的配制及質(zhì)量控制

第四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品

化成品培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基除附有處方和使用說(shuō)明外還應(yīng)注明

有

效期、貯存條件、適用性試驗(yàn)的質(zhì)控菌株和用途。

配制時(shí)應(yīng)按使用說(shuō)明上的要求操作，受潮結(jié)塊不能使用，確

保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。

第五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制

使用容器

-配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿。

-使用的器皿應(yīng)用蒸餾水或純化水完全沖洗。-配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水.

第六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的配制

對(duì)配制培養(yǎng)基的過(guò)程作詳細(xì)的記錄

記錄內(nèi)容

配制日期、培養(yǎng)基名稱(chēng)、成分、配制數(shù)量、

質(zhì)量監(jiān)控結(jié)果等進(jìn)行全面詳細(xì)記錄。第七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

稱(chēng)量

按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的規(guī)定稱(chēng)量，各稱(chēng)量物的重量應(yīng)記錄。對(duì)培養(yǎng)基的組分應(yīng)準(zhǔn)確稱(chēng)量，并要求有一定的精確度。第八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

配制將準(zhǔn)確稱(chēng)量的各組分或脫水培養(yǎng)基加入溶劑中，完全

溶解，如需要可適當(dāng)加熱。

所有的培養(yǎng)基對(duì)熱都或多或少的敏感，因此當(dāng)培養(yǎng)基需要

加熱溶解時(shí)，應(yīng)注意不要加熱過(guò)度，否則會(huì)使培養(yǎng)基顏色變

深。配制培養(yǎng)基所用的器具應(yīng)能方便控制加熱和不斷攪拌。

當(dāng)培養(yǎng)基需要添加其它組分時(shí)，添加后也應(yīng)將其充分混勻。第九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備方法

分裝配制的培養(yǎng)基根據(jù)試驗(yàn)需要分裝試管、傾注平皿、

制備斜面。經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基分裝，應(yīng)在無(wú)菌環(huán)境下操作，避免污染。第十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的制備方法

對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基分裝容器

應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無(wú)菌性。第十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的制備方法

矯正pH

配制培養(yǎng)基必須矯正pH，干燥培養(yǎng)基也必須對(duì)pH進(jìn)行驗(yàn)證，高壓滅菌前的pH應(yīng)比最終pH值高0.2左右。

矯正pH后的培養(yǎng)基應(yīng)加熱、過(guò)濾，使培養(yǎng)基澄清。第十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

滅菌方法及條件不當(dāng)可直接影響培養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)通過(guò)無(wú)菌

性試驗(yàn)和促生長(zhǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證.驗(yàn)證方法同《中國(guó)藥典2010年版》附錄滅菌法。

第十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的

參數(shù)進(jìn)行。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方

法的資料。第十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

不同種類(lèi)培養(yǎng)基應(yīng)采用不同的滅菌方法，配制好的培養(yǎng)基滅菌一般多用流通蒸汽滅菌和濾膜過(guò)濾除菌。

流通蒸汽滅菌

是最常用的最有效的滅菌法，121℃，15min(121℃，30min)或116℃，40min可殺死所有的細(xì)菌芽孢。第十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的滅菌

濾膜過(guò)濾除菌

如配制的培養(yǎng)基含有不耐熱成分可采用濾膜過(guò)濾除菌和血清凝固器除菌。

-濾膜過(guò)濾除菌采用孔徑0.22um的濾膜過(guò)濾器.-濾膜材質(zhì)依過(guò)濾物品的性質(zhì)及目的而定。

不得對(duì)被濾過(guò)成分有吸附作用，不得有物質(zhì)釋放

和纖維

的脫落，也不得使用含有石棉的濾器。-濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)行滅菌。血清凝固器80～100℃、30min，連續(xù)三天，間歇滅菌。第十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

-商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行儲(chǔ)存。-培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有批號(hào)，生產(chǎn)日期、有效期及培

養(yǎng)基的有關(guān)特性。-所采用的保藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去

水分并提供機(jī)械保護(hù)。第十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯存，

如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密閉，尤其是盛

有脫水培養(yǎng)基的容器.第十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏

配制好的培養(yǎng)基應(yīng)驗(yàn)證的條件下貯藏-保存在2～25℃避光的環(huán)境。

-若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用，-若保存于密閉容器中，一般在一年內(nèi)使用。

第十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏-瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷凍破

壞凝膠特性。

-瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超

過(guò)一周，且應(yīng)密閉包裝，若延長(zhǎng)保存，保存期需經(jīng)

驗(yàn)證確定。

-培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)立即取出，不得儲(chǔ)藏在高壓滅菌器

中，避免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。

第二十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的貯藏-固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采

用流通蒸汽進(jìn)行，只允許一次，融化的培養(yǎng)基應(yīng)放在45～50℃的水浴中，不得超過(guò)8小時(shí)。

-使用過(guò)的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國(guó)家

污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。第二十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證方法參照《中國(guó)藥典2010年版》附錄無(wú)菌檢查或微生物限度檢

查項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。第二十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基監(jiān)控項(xiàng)目

外觀、性狀、pH、促生長(zhǎng)試驗(yàn)、定期的穩(wěn)定性檢查

以及培養(yǎng)基有效期的確定。第二十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

驗(yàn)證時(shí)間

-由同一批脫水培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時(shí)，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序，那么可不進(jìn)行批批促生長(zhǎng)試驗(yàn)。-如果培養(yǎng)基制備的方法未經(jīng)驗(yàn)證，那么，配制的每一批培養(yǎng)基必須進(jìn)行促生長(zhǎng)試驗(yàn)。

試驗(yàn)方法

-根據(jù)培養(yǎng)基的用途參照《中國(guó)藥典2010年版》附錄

無(wú)菌檢查或微生物限度檢查項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

第二十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的有效期是指已通過(guò)促生長(zhǎng)試驗(yàn)的培養(yǎng)基在整個(gè)

有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。

每批培養(yǎng)基儲(chǔ)存的時(shí)間將取決于一定存放條件（包括容器

和密封性）的培養(yǎng)基組成成分的穩(wěn)定性。第二十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

試驗(yàn)結(jié)果處理

-當(dāng)批培養(yǎng)基不符合促生長(zhǎng)試驗(yàn)，應(yīng)尋找造成不合格的原因。

-這個(gè)調(diào)查包括采取適當(dāng)?shù)男袆?dòng)以防止問(wèn)題的重復(fù)出現(xiàn)。

-如果未找到原因或還沒(méi)有解決有關(guān)培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)問(wèn)題，

任何不符合要求的批次均不能使用。第二十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

鑒定微生物的診斷試劑

如

革蘭染色、氧化酶試驗(yàn)試劑等。質(zhì)量控制試驗(yàn)與培養(yǎng)基質(zhì)量控制試驗(yàn)相似。

試劑用于未知樣品鑒定-選擇正確的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌-按使用說(shuō)明上的要求進(jìn)行質(zhì)控試驗(yàn)。第二十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基應(yīng)特別小心防護(hù)。尤其是用

于關(guān)鍵區(qū)域監(jiān)控的培養(yǎng)基最好是終端滅菌，如果不能

采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%

的預(yù)培養(yǎng)。防止將外來(lái)的污染帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。第二十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

測(cè)定PH值每批培養(yǎng)基滅菌后均應(yīng)測(cè)定PH值；在冷卻至室溫

（25℃）進(jìn)行測(cè)定。

除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的PH允許的變化范圍很寬，

否則，培養(yǎng)基的PH的范圍不得超過(guò)規(guī)定的±0.2。第二十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

一般性狀

-制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)檢查；容器和蓋

子的破裂，裝量。

-固體培養(yǎng)基因水分流失而造成表面產(chǎn)生裂縫或漣漪。

-其他如溶血，可能冷藏溫度下形成的結(jié)晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數(shù)

量和有效期的檢查和記錄，培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查等。第三十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

-液體培養(yǎng)基應(yīng)觀察培養(yǎng)基的顏色，是否有沉淀，

微生物污染，氧化還原指示劑的狀況，批數(shù)量

和有效期的檢查和記錄等。第三十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)和抑制性能試驗(yàn)

無(wú)菌檢查用培養(yǎng)基使用前應(yīng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)

適用性試驗(yàn)

無(wú)菌性試驗(yàn)

靈敏度檢查第三十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基的靈敏度檢查

菌種金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

第三十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日靈敏度檢查培養(yǎng)基接種量試驗(yàn)菌培養(yǎng)溫度培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間接種管數(shù)裝量

(℃)(天)（支）（支）

金黃色葡萄球菌30～35硫乙醇酸鹽流體3212銅綠假單胞菌3212生孢梭菌3212白色念珠菌23～28改良馬丁529黑曲霉39

①每種菌液接種量含菌小于100cfu②同時(shí)做1支空白對(duì)照培養(yǎng)基的質(zhì)量控制第三十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

結(jié)果判定空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

-若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度

檢查符合規(guī)定。

-若加菌的培養(yǎng)基管不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好，判培養(yǎng)基的靈

敏度檢查不符合規(guī)定，不能用于無(wú)菌試驗(yàn)，并尋找造

成不合格的原因。培養(yǎng)基的適用性檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供

試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。第三十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

微生物限度檢查(計(jì)數(shù)培養(yǎng)基)培養(yǎng)基的適用性檢查

微生物限度檢查(計(jì)數(shù)培養(yǎng)基)

使用前應(yīng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)，適用性試驗(yàn)包括促生長(zhǎng)、抑制及指示能力檢查。第三十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的適用性檢查菌種大腸埃希菌[CMCC（B）26003]金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]白色念珠球菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（F）98003]第三十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的適用性檢查

檢查方法菌種培養(yǎng)基加入菌數(shù)培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（cfu）（℃）（h）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂50~10030~3548

枯草芽孢桿菌黑曲霉玫瑰紅鈉瓊脂50~10023~2872

白色念珠球菌白色念珠球菌酵母浸出粉胨50~10023~2872

葡萄糖瓊脂

第三十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

培養(yǎng)基的適用性檢查

-菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。-保存在2～8℃可以在24小時(shí)內(nèi)使用。-黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗(yàn)證過(guò)

的貯存期內(nèi)使用。第三十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日

結(jié)果判定

被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不得小于對(duì)照培養(yǎng)基菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。第四十頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日⑶控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)、抑制及指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗(yàn)菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌

MUG促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽促生長(zhǎng)能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發(fā)酵促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長(zhǎng)能力+指示能力大腸埃希菌

第四十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基的適用性檢查沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯促生長(zhǎng)能力乙型付傷寒沙門(mén)菌四硫磺酸鈉亮綠促生長(zhǎng)能力乙型付傷寒沙門(mén)菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂或沙門(mén)、志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型付傷寒沙門(mén)菌曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力+指示能力乙型付傷寒沙門(mén)菌