結(jié)核分枝桿菌課件

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌1結(jié)核分枝桿菌2023/2/6結(jié)核分枝桿菌2選題？2023/2/6結(jié)核分枝桿菌31.結(jié)核的現(xiàn)狀

結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬(wàn)人死于結(jié)核。我國(guó)是世界上22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，結(jié)核感染導(dǎo)致的死亡人數(shù)是其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的2倍以上，曾經(jīng)一度控制良好，再次死灰復(fù)燃，隨著耐藥菌株的出現(xiàn)和傳播，結(jié)核控制更加棘手。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌53.醫(yī)生的需求有醫(yī)生咨詢結(jié)核病的檢查2023/2/6結(jié)核分枝桿菌64.各類考試常見的考點(diǎn)中級(jí)職稱高級(jí)職稱研究生考試2023/2/6結(jié)核分枝桿菌7分枝桿菌屬M(fèi)ycobacterium一類直或微彎曲的桿菌，有分枝生長(zhǎng)趨勢(shì)，可呈絲狀或菌絲樣生長(zhǎng)。細(xì)胞壁脂質(zhì)含量高（分枝菌酸），耐酸，抗酸染色陽(yáng)性。對(duì)氧和營(yíng)養(yǎng)要求高，生長(zhǎng)慢。又稱抗酸桿菌(acid-fastbacillus)---不易著色，可抵抗鹽酸酒精的脫色作用分類屬放線菌科，本屬有80多種，可分三類：結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌。細(xì)菌的DNAG+Cmol%為62－702023/2/6結(jié)核分枝桿菌9二、細(xì)菌特性形態(tài)染色

TB菌細(xì)長(zhǎng)略彎曲，有時(shí)可見分枝，呈單、成堆或成束排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜?？沙霈F(xiàn)多形性，在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長(zhǎng)絲形等。TB菌革蘭染色陽(yáng)性。熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌10培養(yǎng)特性專性需氧菌，3%－5%的CO2能促進(jìn)生長(zhǎng)。最適ph6.5～6.8，最適溫度為37℃，低于30℃難生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求高，在含有蛋黃、馬鈐薯、甘油和天門冬素等的固體培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)緩慢。固體培養(yǎng)基---典型菌落為干燥、堅(jiān)硬、表面呈顆粒狀、乳酪色或淡黃色，形似菜花樣。液體培養(yǎng)基---生長(zhǎng)較快呈粗糙皺紋狀菌膜生長(zhǎng)，有毒株可呈索狀生長(zhǎng)（吐溫干擾）。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌11生化反應(yīng)

生化不活潑。不發(fā)酵糖類，多數(shù)菌株觸酶陽(yáng)性，熱觸酶陰性，非結(jié)核分枝桿菌正好相反。結(jié)核分枝桿菌煙酸和硝酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性，耐噻吩－2－羧酸肼(T2H)，牛型則相反。有毒株中性紅試驗(yàn)陽(yáng)性。變異性

TB菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、最適生長(zhǎng)溫度、毒力和耐藥性的變異。如卡介苗、Much顆粒和多重耐藥菌株出現(xiàn)等。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌13致病物質(zhì)（未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶）1.脂質(zhì)－脂質(zhì)占菌體干重的20～40%，占胞壁干重的60%。①磷脂：能刺激單核細(xì)胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用，使病灶形成干酷樣壞死。②索狀因子：是分枝菌酸與海藻糖的復(fù)合物，具有破壞細(xì)胞線粒體膜，毒害微粒體酶類，抑制中性粒細(xì)胞游走和吞噬作用，引起慢性肉牙腫。具有該物質(zhì)的TB菌毒株，在液體培養(yǎng)基中能緊密粘成索狀。③蠟質(zhì)D：是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并具有佐劑作用。④硫酸腦苷脂：TB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬細(xì)胞中的吞噬體與溶酶體融合，使結(jié)核桿菌在細(xì)胞內(nèi)存活。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌14致病物質(zhì)2.莢膜－主要為多糖，少量脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。①粘附和入侵②分解物質(zhì)提供營(yíng)養(yǎng)③防止有害物質(zhì)入侵3.蛋白質(zhì)－TB菌菌體內(nèi)都含有數(shù)種蛋白質(zhì)，其中重要的蛋白質(zhì)是結(jié)核菌素。結(jié)核茵素與蠟質(zhì)D結(jié)合，能引起較強(qiáng)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。其他蛋白質(zhì)可引起機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，但無(wú)保護(hù)作用。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌15三、臨床意義

TB菌引起結(jié)核病。對(duì)人類致病的有人結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核桿菌和非洲分枝桿菌，人型結(jié)核桿菌感染引起的發(fā)病率最高。成為全球性重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。所致疾病TB菌的致病作用可能是細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)增殖引起炎癥反應(yīng)，以及誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)性損傷，屬于IV型（遲發(fā)型）變態(tài)反應(yīng)。通過(guò)呼吸道、消化道和破損的皮膚粘膜進(jìn)入機(jī)體，侵犯多種組織器官，引起相應(yīng)器官，其中以肺結(jié)核最常見?？煞衷l(fā)感染和繼發(fā)感染。免疫性TB菌的感染率很高，發(fā)病率卻較低，這表明人體感染結(jié)核桿菌可獲得一定的抗結(jié)核免疫力，這種免疫稱為有菌免疫或傳染性免疫。TB菌的免疫原rRNA和變應(yīng)原結(jié)核菌素誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌17肺結(jié)核實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核菌檢查：痰中找到結(jié)核菌是確診肺結(jié)核的主要依據(jù)。直接厚涂片陽(yáng)性率優(yōu)于薄涂片無(wú)痰或兒童不會(huì)咳嗽，可采用清晨的胃洗液找結(jié)核菌，成人亦可通過(guò)纖支鏡刷片或涮洗液查找結(jié)核菌PCR法，40個(gè)結(jié)核菌即可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果2023/2/6結(jié)核分枝桿菌182.腸結(jié)核患者多有開放性肺結(jié)核或喉結(jié)核，經(jīng)常吞咽含結(jié)核桿菌的痰液而患病。，主要位于回盲部。輔助診斷：結(jié)核菌素試驗(yàn)

X線胃腸鋇餐造影或鋇劑灌腸結(jié)腸鏡，活檢找到干酪樣壞死性肉芽腫或結(jié)核桿菌具有確診意義。大便找抗酸桿菌？大便結(jié)核桿菌PCR？2023/2/6結(jié)核分枝桿菌193.泌尿生殖系統(tǒng)結(jié)核---尿液4.結(jié)核性腦膜炎---腦脊液5.結(jié)核性腹膜炎---腹水6.關(guān)節(jié)結(jié)核---關(guān)節(jié)液2023/2/6結(jié)核分枝桿菌21標(biāo)本采集感染部位不同，取不同的標(biāo)本常見標(biāo)本：痰、纖支鏡刷片、尿、胸腹水、腦脊液、關(guān)節(jié)液等檢查方法1.顯微鏡檢查

1）直接涂片：用萋－尼氏法染色，若鏡檢找到抗酸性桿菌，通常應(yīng)報(bào)告：“找到抗酸性桿菌”，需進(jìn)一步分離培養(yǎng)鑒定。

2）濃縮集菌涂片：如標(biāo)本中菌量少，雜菌和雜質(zhì)多時(shí)，用離心沉淀法將菌濃縮聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染色檢查

熒光染料金胺O染色，在熒光下菌體呈橘黃色。萋～尼氏抗酸性染色法染色，菌體染成紅色。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌222023/2/6結(jié)核分枝桿菌232023/2/6結(jié)核分枝桿菌252023/2/6結(jié)核分枝桿菌262023/2/6結(jié)核分枝桿菌29鑒別試驗(yàn)：

NAP(p-nitro-α-acetylamino-β-hydroxy-propiophenome)抑制試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌NAP-

非結(jié)核分枝桿菌NAP+

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌30藥物敏感試驗(yàn)動(dòng)物接種

菌株分離和檢測(cè)毒力2023/2/6結(jié)核分枝桿菌313、結(jié)核菌素試驗(yàn)：OT或PPD遲發(fā)型超敏反應(yīng)結(jié)核菌素的純蛋白衍化物（PPD）皮內(nèi)注射0.1ml（5IU）硬結(jié)≥5mm為陽(yáng)性反應(yīng)，如無(wú)反應(yīng)，可在一周后再用5IU，如仍為陰性，大致可除外結(jié)核感染，但也要考慮感染的窗口期，還未建立充分的變態(tài)反應(yīng)，應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制藥物、免疫力低下或營(yíng)養(yǎng)不良也成陰性反應(yīng)。結(jié)核菌素試驗(yàn)對(duì)嬰幼兒的診斷價(jià)值較成人大，3歲以下強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)者，應(yīng)視為有新近感染的活動(dòng)性肺結(jié)核。

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌324、抗體檢測(cè)檢測(cè)PPDIgG輔助診斷。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗體是一種新的較好的診斷結(jié)核病的指標(biāo)。5、抗原檢測(cè)6、核酸檢測(cè)

快速診斷：PCR-特異性核酸探針7、高效液相色譜分析技術(shù)測(cè)分枝菌酸可鑒定菌種8、全血干擾素測(cè)定2023/2/6結(jié)核分枝桿菌332023/2/6結(jié)核分枝桿菌34基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長(zhǎng)期存在抗原特異性的記憶性T細(xì)胞當(dāng)再次遇到抗原刺激時(shí)，能迅速活化增殖，釋放r干擾素r干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中最重要的細(xì)胞因子2023/2/6結(jié)核分枝桿菌35由來(lái)----γ干擾素釋放試驗(yàn)（IGRAs）IFN-γ在調(diào)節(jié)對(duì)結(jié)核分支桿菌的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起重要作用，從而使得（interferongammareleaseassays）IGRAs用于檢測(cè)結(jié)核感染。IGRAs通過(guò)檢測(cè)代表結(jié)核分支桿菌的抗原刺激T淋巴細(xì)胞反應(yīng)后釋放IFN-γ的量來(lái)判斷是否存在結(jié)核桿菌感染。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌36T-SPOT-TB—定義以結(jié)核特異的混合抗原A和混合抗原B（分別為ESAT-6和CFP-10的部分多肽片斷）刺激結(jié)核桿菌感染者外周血單核細(xì)胞中存在結(jié)核特異的活化T淋巴細(xì)胞分泌γ干擾素，從而應(yīng)用ELISPOT方法檢測(cè)對(duì)結(jié)核桿菌反應(yīng)的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量，對(duì)結(jié)核桿菌感染進(jìn)行輔助診斷。特異抗原ELISPOT活化的T細(xì)胞否存在感染2023/2/6結(jié)核分枝桿菌37T-SPOT-TB—幾個(gè)概念ELISPOT（enzyme-linkedimmunospotassay,）是一種新型的免疫酶技術(shù)，它是從單細(xì)胞水平檢測(cè)分泌抗體細(xì)胞或分泌細(xì)胞因子細(xì)胞。（簡(jiǎn)單說(shuō)：可以數(shù)出分泌特異因子的細(xì)胞的個(gè)數(shù)）ESAT-6和CFP-10蛋白：存在結(jié)核分枝桿菌及少數(shù)致病非結(jié)核分枝桿菌中名為“RD1”的基因序列，編碼產(chǎn)生兩種蛋白。在卡介苗菌株和大部分環(huán)境中的分枝桿菌基因中則缺乏次序列。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌38基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理T-SPOT.TB技術(shù)：利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中存在結(jié)核特異性T細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異抗原刺激后分泌r干擾素而設(shè)計(jì)的T細(xì)胞免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)。檢測(cè)外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放r干擾素的T淋巴細(xì)胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過(guò)ELISPOT分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，計(jì)算計(jì)算對(duì)結(jié)核桿菌反應(yīng)的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)量2023/2/6結(jié)核分枝桿菌39基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理包2023/2/6結(jié)核分枝桿菌40基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理2023/2/6結(jié)核分枝桿菌41基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理2023/2/6結(jié)核分枝桿菌42基于T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)核感染的原理空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)小于10且陽(yáng)性對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)大于20時(shí)視為試驗(yàn)有效T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果用每106PBMCs中斑點(diǎn)形成細(xì)胞（SFCs）的數(shù)目來(lái)描述，即SFCs/106PBMCs2023/2/6結(jié)核分枝桿菌43T-SPOT.TB的臨床意義T-SPOT.TB高靈敏度

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌44T-SPOT-TB—解釋非黃金標(biāo)準(zhǔn)敏感性95.3%-98.8%特異性94.1%-100%薩斯分枝桿菌(Mycobacteriumkansasii)、海分枝桿菌(Mycobacteriummarinum)、斯氏分枝桿菌(Mycobacteriumszulgai)等少數(shù)分枝桿菌中也存在完整RD1區(qū)，編碼ESAT6和CFP10,可造成檢測(cè)結(jié)果成假陽(yáng)性。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌45T-SPOT-TB—應(yīng)用在活動(dòng)性結(jié)核病中的診斷意義

1.敏感性86-94%，特異性89-99%2.在肝移植術(shù)后、艾滋病、血液腫瘤等免疫抑制患者中，T-SPOT-TB陽(yáng)性率略低于免疫正常組，但仍具有較高的敏感性，且優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)。

3.在肺外結(jié)核患者診斷中的，敏感性優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)。

4.對(duì)小于4歲兒童，與結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)比較敏感性無(wú)優(yōu)勢(shì)，美國(guó)CDC更推薦結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)。2023/2/6結(jié)核分枝桿菌46T-SPOT-TB—應(yīng)用在結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性胸膜炎中的診斷意義

1.敏感性優(yōu)于ADA、TB-DNA，約在62-75%，特異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在結(jié)核病治療中的評(píng)價(jià)意義

1.其數(shù)值高低與嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)。

2.效應(yīng)T細(xì)胞隨結(jié)核桿菌的清除而消失，其陰性及陽(yáng)性結(jié)果可作為評(píng)估治療效果的手段之一。

2023/2/6結(jié)核分枝桿菌47T-SPOT-TB—應(yīng)用在潛伏性結(jié)核桿菌感染者的篩選中

1.敏感性優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，且不受卡介苗接種影響。

2.較少受到其他