動物實驗方案設計

動物試驗方案設計動物試驗指在試驗室內(nèi)，為了獲得有關生物學、醫(yī)學等方面的試驗方案設計，期望對你有所參考幫助。一、試驗設計的根本要素和原則試驗設計就是擬定試驗方案，在進展科學爭論時，對爭論方案作合理的安排，以削減隨機誤差的影響。承受適當?shù)臓幷撛囼灤螖?shù)，從而實現(xiàn)爭論的目的。爭論設計包括專業(yè)設計與統(tǒng)計設計兩個局部。統(tǒng)計設計主要是依據(jù)爭論目的，從爭論的現(xiàn)況條件動身，規(guī)定爭論因素、選擇效應指標、確定爭論對象的引入方式方法和規(guī)模，擬實施的方法、方案，及數(shù)據(jù)收集、分析的模式，直至結果的解釋，進展系統(tǒng)的安排，使其消耗最少的人力物力和時間，而獲得牢靠的信息與結論。試驗設計的根本要素試驗設計的根本要素為：試驗單位、處理因素和試驗效應。大多數(shù)狀況下，試驗單位等同于試驗對象、受試對象，在動物試驗中的動物即為試驗單位。受試對象產(chǎn)生試驗效應的因素，照試驗動物的雌雄、體重等因素。突果的最終表達，其根本要求客觀性、特異性、靈敏性和準確性。試驗效應：處理因素作用于試驗動物后，消滅試驗效應，一“痊愈”“顯效”“好轉”“無效”，“存活”“死亡”等。計量指標指可測量(含間接測量)的指標，如很多檢查和檢驗指標。在對指標進展觀看時應留意：①試驗效應的觀看應避開偏性。爭論者的心理往往偏于陽性結果，為了消退或削減測量偏差，設計時常承受盲法。如劑量反響曲線。做試驗應選擇一個適宜的試驗劑量。試驗設計的根本原則試驗設計的三大原則即為重復(replication)、隨機化(randomization)和比照(control)，這是藥理試驗設計的根本要求。其目的是排解非處理因素的作用，掌握隨機誤差，避開系統(tǒng)誤差，提高試驗效率。必定，將試驗結果錯誤推廣，同一試驗條件下、同一觀測指標的屢次測量會有變異，屢次測量才能描述變異，估量隨機誤差。試驗單位足位數(shù)稱為樣本含量(樣本量)。重復原則的應用就是樣本含量的估量。首先要考慮試驗要有足夠的例數(shù)，能準確重復再現(xiàn)，同時盡可能排解對試驗的干擾，它包括：①動物方面，如品種、品系、體重、年齡、性別、飼料及飼養(yǎng)環(huán)境等；②儀器方面：準確性、穩(wěn)定性、電壓穩(wěn)定性及操作嫻熟程度等；③藥物方面：性能、批號、純度、劑量和注射速度等。此外還有室溫、氣壓、季節(jié)等物理因素，甚至試驗是表或小計算機上的隨機數(shù)字鍵。在試驗分組時，每個受試對象均有一樣的概率或時機被安排到“隨便”和“非選擇性”。隨機化的意義是保證各種非處理因素在各客觀因素可能導致的偏性，削減系統(tǒng)誤差，提高爭論結果的效度。隨象都屬于同一個總體。比照原則：確定試驗組時，同時設立比照組，即不施加處理因素的試驗組，只暴露于非處理因素。比照組除沒有處理因素外，其試驗組盡量一樣。常用的比照形式，分為空白比照(blankcontrol)、試驗比照(experimentalcontrol)、標準比照(standardcontrol)、相互比照(mutualcontrol)、潛在比照(potentialcontrol)?？瞻妆日占磳Ρ日战M不施加干預，比照組的處理因素為“空白”；試驗比照即比照組組的干預承受現(xiàn)有“標準”方法或常規(guī)方法，主要用于臨床試驗，目前療效確定的藥物作為比照藥；相互比照則不特地設立比照組，不用特地設立比照組，以過去的爭論結果為比照(歷史比照)。另外，或比照較少是錯誤的和不妥當?shù)?。二、抽樣和分組抽樣和分組必需嚴格遵守隨機原則，主要因素要均衡全都，但拿取動物，先取到的為第一組，依次遞推，則反響活潑靈敏不易抓到的動物勢必集中到最終幾組，各組的條件就有了偏性誤差。為此，下面介紹幾種主要的分組試驗設計方法。完全隨機設計完全隨機設計(pletelyrandomdesign本量可相等，也可不相等，但是樣本相等時統(tǒng)計分析效率較高。112A、B1212……1212物編號下。61920124-1)。將隨機數(shù)字從小到大挨次排列后得序號R，并規(guī)定R=1～6者為AR：7～12B4-112〔承受隨機數(shù)字表〕2151、2……1515動物編號下。將隨機數(shù)字從小到大挨次排列后得序號R。(3)規(guī)定R=1～5者為AR=6～10BR=11～15C(451718154-2)。4-2150602，但前面已經(jīng)消滅過，故舍去。隨機分組應留意：(1)隨機數(shù)的位數(shù)不應小于N(2)隨機數(shù)假設有重號數(shù)字應舍棄：(3)假設科研上需要各組例數(shù)不等可利用序號(R)調(diào)整各組例數(shù)。2A6B5C4R=1～6AR=7～11BR＝12～15C統(tǒng)計假設檢驗方法：計量資料：t計數(shù)資料：卡方檢驗等。完全隨機設計的優(yōu)缺點：設計及統(tǒng)計分析簡潔。但是，試驗效率不高，只能分析單因素。配對試驗設計將受試對象按某些特征或條件配成對子，然后分別把每對中的同處理，連續(xù)試驗假設干對，觀看對子間的差異有無意義。配對設計的特征或條件：動物試驗常以種屬、品系、性別一樣，年齡、體重相近的兩只動物配成對子；臨床療效觀看常將病種、病型、族別、性別一樣，年2～3進展配對設計時應留意不要“配對過頭”。例如，爭論高血壓與鈉鹽病例與比照在鈉鹽攝入量上的差異；試驗者必需在整個爭論過程中，的；記錄試驗數(shù)據(jù)應保持每對的一一對應關系，不能錯亂或缺失。計算每對試驗數(shù)據(jù)的差值時，挨次應當全都。2010到試驗組與比照組中去。1.11.22.12.2……10.110.2，然后再在隨機數(shù)字表上任意指定行列及查找方向，將隨機數(shù)字依次抄寫在“對子號”下。事先規(guī)定，遇單數(shù)定為ABBA4631324～3)4-320常用統(tǒng)計假設檢驗方法twilcoxon計數(shù)資料：卡方檢驗、全都性檢驗等。配對試驗設計的優(yōu)點：配對設計可做到嚴格掌握非處理因素對因素的差異所引起的偏差，同時還可以削減樣本含量。是在自身配對設計根底上進展的雙因素設計，可在同一對象身上觀看兩種處理的效應，并能削減誤差，提高檢驗效率。例如：爭論ABAB另一組先給B藥后再給A4-4：4-4析因試驗設計(factorialdesign)析因設計是一種多因素多水平穿插分組進展全面試驗的設計方法，將兩個或多個試驗因素的各水平進展試驗。例如：2222=44-5332=99試驗設計。析因設計可以供給三方面的重要信息：各因素不同水平的效應大小；各因素間的4-52×2交互作用；通過比較各種組合，找出最正確組合。假設在一次試驗中，當一個因素的水平間的效應隨其他因素的水平不同而變化時，因素間存在交互作用，它是各因素效應間不獨立的表現(xiàn)。正交試驗設計正交設計適用于多因素分析，可算出各因素不同水平對試驗的影響，找出最正確組合。現(xiàn)以L4(23)及L9(34)正交設計結合例子簡潔(L94932個水平，3443濃度、低濃度)，要分析它們對試驗的影響，找出最正確組合，可設計4-6：4-6L4(23)正交設計表中Ca218.6+6.2=14.8，K+18.6+9.7=18.3…?？梢钥闯觯珻a2+的差值確定值最大，說明Ca2+對K+Mg2+的影響最小，高濃度好。結論是以低Ca2+，高K+，高Mg2+為最正確組合。但是，這一組合在試驗中并未消滅，但正交設計提示這是最正確組合，可安排復試加以驗證。2L9(344-7：丙、丁三藥影響較小，可列為輔藥，最正確組合為甲藥大劑量，乙藥大34=819三、預試驗及篩選預試驗在正式試驗前應充分重視預試驗的重要性，小規(guī)模的預試驗是使用少量的動物得到預示性的數(shù)據(jù)或通過預試驗將操作和技術固定象、用藥劑量和試驗條件及檢測指標，如溫度、刺激強度、養(yǎng)分液組方等，為正式試驗做必要的預備，提高試驗的重復穩(wěn)定性和靈敏度。為此，預試驗中應留意以下問題：4-7L9(34)正交設計試驗穩(wěn)定性：變異系數(shù)越小，說明試驗波動越小，試驗的重復穩(wěn)定性越好。變異系數(shù)CV=。(D1D2)，測定其反響強度(E1、E2)。計算因變系數(shù)，因變系數(shù)越小，試驗靈敏度越好。因變系數(shù)CI=(E2-E1)／(lgD2-lgD1)。篩選篩選是在預試驗或既往閱歷的根底上，用少量動物對多種藥物P<0.1有價值的藥物。常見篩選試驗有以下幾種。解毒藥與毒劑的半數(shù)致死量(LD504無死亡，說明該藥篩選合格(P<0.1)；如有一只動物死亡時，可增加330／4、1／7、2／9、3／12、4／14表示值得進展正式試驗，不肯定正式試驗必定有良好結果。4-8?！睵<0.1〕一、LD50值測定1．要求和留意事項雌雄各半，20±2g藥物及給藥途徑：以靜脈注射、腹腔注射和灌胃為主，最好1ml；0.2ml；腹腔注射應小于1ml。另外，藥液pH透壓應在生理范圍內(nèi)。7d。試驗報告：必需說明試驗條件，制定LD50結果，應求出95％可信區(qū)間和LD10LD50和LD10LD5、LD95及回歸系數(shù)。LD50(Bliss測機率單位法、目測圖解法、寇氏法(Korlbor)等，對短期內(nèi)致死藥物還可承受序貫法。對于中毒表現(xiàn)和致死緣由的分析應賜予充分重視。2．LD50預試驗：依據(jù)閱歷或文獻找出試驗動物0100％死亡的劑量，即上下限劑量(Dn、Dm)。對于無毒性參考資料的藥物，一般先配44／4，其前一組為2／43／4Dm，0／41／4，則以該組1.5Dm，同法找出DnDm，Dn為正式試驗供給依據(jù)。4～9依據(jù)試驗結果計算LD50：LD5095％平均可信限LD50±1.4×(LD84LD16)／其中N”5％～95％致死率間動物數(shù)。二、慢性毒性試驗動物選擇可以覺察藥物對生長及各組織器官成熟的影響。慢性毒性試驗開頭選擇的小鼠年齡最好是2～38～10g，350～60g。但是避孕藥物的毒性試驗則要求60120。劑量選擇常用三個劑量組，大動物可用兩個劑量組，并嚴格按要求設動物比照組。高劑量組(LD501／10～1／4LD501／30～1／10具體劑量依據(jù)試驗目的而定。給藥途徑最好選擇臨床試用的給藥途徑。給藥期限3～430d觀看指標包括體征、常規(guī)血、尿檢查、臟器解剖及肉眼觀看、生化指標組織學檢查(二十幾個臟器)，必要時行骨髓檢查、酸堿平衡、水和電解質(zhì)代謝等。由于在慢性毒性試驗中，受試藥物的給藥劑量較低，往往一些觀看指標，以利于給藥后的比較；在給藥期間進展定期指標觀看時，1～2有助于探討受試藥物對試驗動物有無后續(xù)作用，以及損傷可否恢復。結果定論按觀看記錄的結果定論，但不應無視綜合因素及其他因素對結果的影響。三、致癌試驗動物選擇其選擇動物最重要的依據(jù)是對誘發(fā)腫瘤的易感性，所以應考慮物種、品系、年齡和性別。物種的選擇對受試物有特定的靶器官時尤100為近交系的第一代雜交動物。劑量選擇此點較難，但格外重要，一般使用三個劑量，其中最高劑量應10％，1／4～1／3，低劑量最好相當于或低于人類實際可能接觸的劑量，同時應設計好陰性比照組和陽性比照組。觀看指標體征，一般病癥，定期稱體重，最主要是親熱觀看有無腫瘤發(fā)結果定論一般以組織學結果判定。四、其他簡潔試驗1．局部刺激性試驗到類似的結果，則會增加從動物外推到人的牢靠性。不變的狀況下，不應通過增加厚度來滿足增加給藥劑量的目的。給藥途徑：一般應與臨床給藥途徑全都，否則應加以說明。(4暴露時間。(5)觀看指標：首先要進展肉眼觀看，具體描述動物局部反響，包括紅斑、水腫、充血程