中藥制劑分析中供試品制備

章中藥制劑分析中供試品的制備

2020/12/181學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握樣品預(yù)處理的步驟以及每一步驟常用的方法結(jié)合化學(xué)成分理化性質(zhì)、分析目的和制劑背景等因素合理設(shè)計供試品制備的步驟和方法2020/12/182第一節(jié)樣品預(yù)處理原則和常用預(yù)處理方法一、樣品預(yù)處理的原則消除干擾因素盡可能完整保留待測組分，避免待測組分在預(yù)處理過程中丟失防止污染使被測組分濃縮便于成批處理試樣，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度

2020/12/183HOW在設(shè)計或執(zhí)行某一個預(yù)處理步驟時需要考慮的問題：理化性質(zhì)；化學(xué)組成；干擾物類型；樣品組分處理過程中穩(wěn)定性；樣品在收集、儲存和預(yù)處理過程中容器的污染；適合分析儀器的樣品的最終使用的溶劑；預(yù)處理過程盡量簡單，有盡可能高地精密度和準(zhǔn)確度；預(yù)處理的最后一步應(yīng)使被測組分富集。

2020/12/184二、常用預(yù)處理方法（一）分離純化技術(shù)（二）濃縮技術(shù)（三）衍生化與標(biāo)記技術(shù)（四）消解技術(shù)2020/12/185第二節(jié)取樣取樣？從整批成品中抽出一部分具有代表性的供試樣品供檢驗、分析、留樣觀察之用。要求：科學(xué)性、真實性和代表性原則：均勻、合理2020/12/186一、抽樣概念從整批藥品中抽取一部分具有代表性的樣品的過程。原則規(guī)范性針對性公正性合法性2020/12/187一、抽樣包裝件批常用術(shù)語抽樣批抽樣單元單元樣品最終樣品均質(zhì)性藥品非均質(zhì)性藥品正常最小包裝異常2020/12/188一、抽樣（二）抽樣的一般步驟檢查藥品所處環(huán)境確定抽樣單元數(shù)、抽樣單元及抽樣量檢查抽樣單元的外觀情況用適當(dāng)方法拆開抽樣單元的包裝，觀察內(nèi)容物的情況；用適宜取樣工具抽取單元樣品，進(jìn)而制作最終樣品，分為三份，并做好標(biāo)記；已抽取的包裝上，貼上已被抽樣的標(biāo)記《抽樣記錄和憑證》2020/12/189隨機(jī)抽樣法偶遇抽樣法針對性抽樣確定抽樣單元一、抽樣2020/12/1810一、抽樣（四）、抽樣量中藥制劑的抽樣量一般為3倍全檢量，貴重藥品為2倍全檢量。制劑抽樣至少應(yīng)有3個最小包裝。所抽樣品裝入清潔、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批號、數(shù)量、取樣日期及取樣人。

最終抽取的供檢驗用樣品量原則上應(yīng)至少為一次全檢量的3倍。2020/12/1811五、取樣Sampling抽取樣品法圓錐四分法直接取樣法（分散均勻）分層取樣法（糖漿劑）搖勻取樣法（混懸劑）固體樣品取樣方法液體樣品取樣方法取樣方法樣品量不大的粉末狀、小塊狀及小顆粒狀樣品2020/12/1812取樣量粉狀制劑（散劑、顆粒劑）

一般取樣100g，可從包裝的上、中、下三層及周圍間隔相等部位取樣若干，將所得樣品混勻，按〝四分法〞從中取出所需供試量。液體制劑（口服液、藥酒、糖漿、酊劑等）

一般取樣200mL。同時須注意均勻取樣固體中成藥（丸劑、片劑）成品取樣一般為100g，壓片后取樣200片。丸劑一般取10丸。2020/12/1813取樣量膠囊劑

稱取不少于20個膠囊，傾出其中的藥料，稱定空膠囊的重量，由總重中減去，即為膠囊內(nèi)藥料的重量。依標(biāo)示量及供試量稱取部分藥料供分析。注射液

灌注、熔封，滅菌前后應(yīng)經(jīng)過兩次分析。灌封前將注射液混合均勻，如液體取樣方法取樣，再按標(biāo)示量及供試量分別取部分進(jìn)行檢驗；經(jīng)滅菌后的注射液須按原來的方法進(jìn)行分析檢驗。已封好的安瓿，取樣量一般為200支。2020/12/1814二、樣品的粉碎粉碎目的：

一、保證所取樣品均勻而有代表性，提高測定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度；二、使樣品中的被測組分能更快地完全提取出來。粉碎的設(shè)備：粉碎機(jī)、各種食品料理機(jī)銅沖、研缽2020/12/1815三、樣品預(yù)處理前的取樣量根據(jù)制劑的物理形態(tài)，決定取樣的形式以含量測定為例，取樣原則如下：固體樣品半固體浸膏劑和煎膏劑液體樣品氣體類中藥制劑

2020/12/1816第三節(jié)樣品的提取2020/12/1817二、分析目的與樣品提取供鑒別用樣品提取定性方法：超聲、回流供雜質(zhì)檢查用樣品提取視檢查的內(nèi)容而定，對于無機(jī)雜質(zhì)檢查，常用到消化法供含量測定用樣品提取方法設(shè)計要考慮到準(zhǔn)確確定最終供試品溶液的體積提取完后用容量瓶來定容最終提取液2020/12/1818第四節(jié)樣品的凈化

萃取法直接萃取;離子對萃取沉淀法需加入沉淀試劑

色譜法

應(yīng)用比較多2020/12/1819第四節(jié)樣品的凈化常見色譜法凈化的原理和適用對象色譜填料分離原理分離對象注意事項硅膠氧化鋁大孔樹脂聚酰胺離子交換樹脂硅藻土、纖維素2020/12/1820第四節(jié)樣品的凈化固相萃取法2020/12/1821第四節(jié)樣品的凈化固相萃取的一般操作程序：上樣柱的活化清洗洗脫2020/12/1822第四節(jié)樣品的凈化特點(diǎn)：無需柱填充物和使用溶劑解吸被測組分的前處理，能直接從樣品中采集揮發(fā)和非揮發(fā)性的化合物，然后直接在ＧＣ，GC/MS,HPCE上分析，集采集、提取、濃縮、進(jìn)樣于一體。缺點(diǎn)：提取率低、重復(fù)性差。固相微萃取技術(shù)（SPME）2020/12/1823第四節(jié)樣品的凈化提取方式：

石英纖維直接插入試樣中進(jìn)行提取，適用于氣體和液體中組分的分析；

頂空提取，適用于所有基質(zhì)的試樣中揮發(fā)性、半揮發(fā)性組分的分析。固相微萃取技術(shù)（SPME）2020/12/1824第五節(jié)樣品的濃縮與衍生化自然揮散水浴蒸發(fā)減壓蒸發(fā)氣流吹蒸法冷凍干燥樣品提取液的濃縮2020/12/1825二、樣品的衍生化衍生化反應(yīng)需要滿足的條件：1.對反應(yīng)要求不苛刻，且能迅速定量進(jìn)行；2.對某個樣品只能生成一種衍生物，反應(yīng)副產(chǎn)物（包括過量的衍生化試劑）不干擾待測組分的分離和檢測；3.化學(xué)衍生化試劑方便易得，通用性好。確保有檢測器可以進(jìn)行檢測；改善分離效果2020/12/1826二、樣品的衍生化硅烷化?；榛粚ΨQ衍生化氣相色譜法衍生化提高成分的揮發(fā)性增加成分的穩(wěn)定性生成非對映體方法2020/12/1827二、樣品的衍生化紫外衍生化熒光衍生化非對映衍生化HPLC法衍生化1柱前衍生化2柱后衍生化衍生化方法2020/12/1828固體制劑預(yù)處理的特點(diǎn)根據(jù)劑型特點(diǎn)和制備工藝，重點(diǎn)考慮如何排除賦形劑的干擾丸劑片劑膠囊劑顆粒劑散劑滴丸栓劑第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)2020/12/1829片劑中的常見賦形劑糖粉硫酸鈣淀粉糊精一般為研細(xì)后，過一定數(shù)目的藥篩，稱量，選擇適宜的溶劑將被測成分提取第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)片劑2020/12/1830硅藻土具有吸附性，會導(dǎo)致回收率偏低測定成分如果含有酚羥基，需要特別處理，除掉含有的鐵離子；硅藻土注意用量。丸劑的種類蜜丸水丸糊丸、蠟丸濃縮丸第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)丸劑2020/12/1831提取中可能黏度大，形成不溶性板結(jié)物，造成指標(biāo)成分包裹或吸附現(xiàn)象種類糖糊精提取物顆粒劑第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)顆粒劑飲片顆粒劑賦形劑2020/12/1832根據(jù)膠囊中內(nèi)容物狀態(tài)不同，進(jìn)行合理設(shè)計制備供試品溶液種類腸溶膠囊硬膠囊第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)膠囊劑軟膠囊2020/12/1833注意取樣代表性，均勻取樣很重要特點(diǎn)中藥飲片粉末入藥毒性藥材第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)散劑貴重藥材2020/12/1834組成藥物油溶性水溶性常見的除去基質(zhì)干擾的方法第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)栓劑2020/12/1835滴丸的工藝及組成藥物油溶性水溶性常見的除去基質(zhì)干擾的方法第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)滴丸2020/12/1836半固體制劑預(yù)處理的特點(diǎn)

根據(jù)劑型特點(diǎn)和制備工藝，重點(diǎn)考慮黏稠度的干擾煎膏劑凝膠劑浸膏劑第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)2020/12/1837湯劑Step3

水

黏度大液液萃取或色譜分離第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)液體制劑預(yù)處理特點(diǎn)合劑口服液2020/12/1838酒劑Step3

前處理相對容易澄明度好蒸掉部分溶劑，注意被測成分的酸堿性第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)液體制劑預(yù)處理特點(diǎn)酊劑流浸膏劑2020/12/1839注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液含測相對簡單，薄層供試品制備比較難第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)液體制劑預(yù)處理特點(diǎn)2020/12/1840糖漿劑：黏度大，需分離、凈化萃取為主，考慮被測組分的酸堿性質(zhì)第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)液體制劑預(yù)處理特點(diǎn)2020/12/1841軟膏劑、膏藥，貼膏劑氣霧劑、噴霧劑第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)外用制劑預(yù)處理特點(diǎn)2020/12/1842第六節(jié)不同劑型中藥制劑供試品制備特點(diǎn)軟膏劑分析方法：濾除基質(zhì)法提取分離法灼燒法離心法2020/12/1843第一節(jié)定量測定樣品的處理樣品處理的作用充分釋放被測成分,并制成便于分析測定的穩(wěn)定試樣除雜純化，提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度富集濃縮或衍生化，以測定低含量被測成分。衍生化不僅可提高檢測器的靈敏度，還可以提高方法的選擇性。使樣品形式、溶劑符合測定要求2020/12/1844樣品處理的基本過程樣品提取樣品粉碎樣品分離凈化注意：整個過程要定量操作（保證所取樣品及測定成分全部轉(zhuǎn)移至最終的測定液中）如：未通過篩孔的顆粒決不能丟棄；殘留在容器壁上的無色成分需反復(fù)用溶劑洗脫轉(zhuǎn)移等。2020/12/1845一.

樣品的粉碎樣品粉碎的目的：保證所取樣品均勻且有代表性較快且完全地提取被測成分粉碎設(shè)備：

粉碎機(jī)、研缽、食品處理機(jī)高速勻漿機(jī)或玻璃勻漿器。2020/12/1846二.

樣品的提取2020/12/1847二.

樣品的提取冷浸法適用：熱不穩(wěn)定的樣品方法：稱取一定量樣品置于帶塞容器內(nèi)，加入適量溶劑（樣品量的10～50倍），稱重，浸泡提取，浸泡時間12～24小時。浸泡后再稱重，補(bǔ)足溶劑。測定：部分測定法（等量法）全部測定法（總量測定法）優(yōu)點(diǎn)：操作簡單缺點(diǎn)：費(fèi)時、費(fèi)溶劑、不易提取完全

2020/12/1848二.

樣品的提取回流提取法適用：熱穩(wěn)定性的成分方法：以單一溶劑或混合溶劑于水浴/電熱套加熱回流提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率比冷浸法高，提取時間短缺點(diǎn)：提取雜質(zhì)較多不宜用于熱不穩(wěn)定或揮發(fā)性的成分2020/12/1849二.

樣品的提取連續(xù)回流提取法（索氏提?。┻m用：熱穩(wěn)定性的成分方法：樣品置索氏提取器中，用遇熱可以揮發(fā)的溶劑進(jìn)行反復(fù)提取優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，所需溶劑少提取雜質(zhì)少，操作簡便缺點(diǎn)：受熱易分解的成分不宜使用

2020/12/1850二.

樣品的提取超聲提取法適用：熱穩(wěn)定性的成分方法：樣品置適當(dāng)容器中，加入提取溶劑，放入超聲振蕩器中提取。優(yōu)點(diǎn)：提取效率高，提取速度快，操作簡便注意：超聲頻率、提取時間、溫度需考察2020/12/1851超臨界流體提取法（SFE）以超臨界流體為提取溶劑的提取方法。超臨界流體（SF）是指高于臨界壓力（PC）和臨界溫度（Tc）時形成的單一相態(tài)，它既不是液體，也不是氣體，但兼具兩者的特征。臨界點(diǎn)2020/12/1852SF的特征-SF能使提取效率和提取速度大大提高SF的密度與液體相近，具有與液體相似的溶解作用；SF的黏度與氣體相近，具有與氣體相似的擴(kuò)散能力，具有良好的傳質(zhì)性能；SF的表面張力幾乎為零，易于滲透進(jìn)樣品基質(zhì)的空隙中，有利于與樣品的充分接觸2020/12/1853超臨界流體提取法（SFE）適用：主要用于熱不穩(wěn)定成分或揮發(fā)性成分，也可熱穩(wěn)定性成分,主要用于非極性、弱極性化合物，也可極性化合物——加入極性改性劑（甲醇、氯仿、苯），增加其溶解能力。方法：超臨界流體萃取儀優(yōu)點(diǎn)：萃取效率高、速度快、準(zhǔn)確度高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、易于自動化，可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑，并能與色譜和光譜等儀器聯(lián)用。2020/12/1854中藥制劑分析用樣品的分離、純化

萃取法溶劑直接萃取離子對萃取

色譜法沉淀法

應(yīng)用比較多需加入沉淀試劑

待測成分具有揮發(fā)性，

結(jié)構(gòu)比較明確

蒸餾法2020/12/1855中藥制劑分析用樣品的分離、純化

萃取法溶劑直接萃取離子對萃取

色譜法

應(yīng)用比較多沉淀法需加入沉淀試劑

待測成分具有揮發(fā)性，

結(jié)構(gòu)比較明確

蒸餾法2020/12/1856二.

樣品的分離凈化沉淀法：利用某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液的精制方法復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。2020/12/1857二.

樣品的分離凈化蒸餾法：利用某些被測成分具有揮發(fā)性，采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測定；或某些成分經(jīng)蒸餾分解成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測定。最常用：水蒸氣蒸餾法適用：揮發(fā)油，小分子生物堿優(yōu)化：蒸餾液中加入一定量無機(jī)鹽（鹽析作用），使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來2020/12/1858二.

樣品的分離凈化液一液萃取法⒈直接萃取法：利用被測成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。萃取次數(shù)：實驗考察（回收率符合,多數(shù)3-4次）溶劑的選擇：根據(jù)被測組分疏水性的相對強(qiáng)弱選擇極性適當(dāng)?shù)娜軇┧鄍H的控制：弱酸性成分pH≤PKa-2

弱堿性成分pH≥PKa+2鹽析作用：水相用NaCl飽和，提高提取率。2020/12/1859二.

樣品的分離凈化2.離子對萃取法適用：高度離解的有機(jī)酸、有機(jī)堿中藥制劑分析主要用于生物堿（B）離子對試劑：常為酸性染料（In-）如：溴百里酚藍(lán)（BTB）和溴甲酚綠（BCG）注意：水相pH值的控制離子對試劑的選擇有機(jī)溶劑的選擇2020/12/1860二.

樣品的分離凈化色譜法1.經(jīng)典微柱色譜（固相萃取、液—固萃?。┓椒ǎ孩俦粶y成分保留于柱上，洗去雜質(zhì)后，再洗脫被測成分進(jìn)行測定。②使雜質(zhì)強(qiáng)烈保留于柱上，直接洗脫被測成分進(jìn)行測定。適用于：總類成分的含量測定;進(jìn)展：商品LSE柱作為GC、HPLC的預(yù)處理柱2020/12/1861二.

樣品的分離凈化LSE常用填料：⒈硅膠、氧化鋁等：傳統(tǒng)吸附劑極性吸附作用為主。硅膠：酸性吸附劑，適用于中性或酸性成分的層析，強(qiáng)烈保留堿性化合物洗脫順序：極性小→大氧化鋁：弱堿性，分離一些堿性中草藥成分，不宜用于醛、酮、酸、內(nèi)酯等類型的化合物分離。中性氧化鋁、酸性氧化鋁：適用于中性、酸性成分的分離。2020/12/1862二.

樣品的分離凈化應(yīng)用實例三氧化二鋁可將黃酮類吸附在柱上，用于生物堿、苷類的測定。經(jīng)過柱色譜分離后①采用紫外法測定總生物堿含量。（戊己丸、香連丸、駐車丸）②HPLC法測定八寶坤順丸中芍藥苷（中性氧化鋁）2020/12/1863二.

樣品的分離凈化2.LSE常用填料--大孔樹脂：分為極性（丙烯酰胺聚合物）和非極性型（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物），D101最常用皂苷類和黃酮類

HPLC測定小兒熱速清口服液中黃芩苷注意：預(yù)處理；定量時回收率※使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)，有時還需用酸、堿清洗2020/12/1864二.

樣品的分離凈化3.

LSE常用填料--聚酰胺：

在極性溶劑中與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用，常用于含酚、酸、醌類和含ph－OH的黃酮類藥物樣品液的凈化分離。正相色譜2020/12/1865二.

樣品的分離凈化3.

LSE常用填料--聚酰胺：

在弱（非）極性溶劑中，通過聚酰胺中的烷基作用為非極性固定相。用于萜類、生物堿、甾體的凈化分離反相色譜2020/12/1866二.

樣品的分離凈化4.LSE常用填料--硅藻土、纖維素：親水型填料，分配作用流動相：與水不混溶的有機(jī)溶劑洗脫：親脂性的成分5.LSE常用填料--離子交換樹脂：萃取樣品液中可離解化合物（弱酸、弱堿藥物）除去樣品中的離子，防止組分分解2020/12/1867二.

樣品的分離凈化6.

LSE常用填料--凝膠：

適合于生物大分子的分離。2020/12/1868分子越大，越先排出2020/12/1869測定中藥制劑中的無機(jī)元素預(yù)處理

--------------消化法目的：破壞有機(jī)物，使無機(jī)物游離

常用的破壞方法：濕法消化，干法消化2020/12/1870⒈濕法消化硝酸—高氯酸法適用于血，尿、組織等生物樣品和動植物藥制劑的破壞有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機(jī)金屬離子一般呈高價態(tài)。本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞凱氏燒瓶用（硅玻璃）直火加熱2020/12/1871⒈濕法消化

硝酸—硫酸法適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子均為高價態(tài)不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞不適用于與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子凱氏燒瓶用（硼玻璃）直火加熱2020/12/1872⒈濕法消化

硫酸—硫酸鹽法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子多為低價態(tài)（三價砷或銻）。樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。聚四氟乙烯消化罐：烘箱加熱。2020/12/1873其它濕法硝酸—硫酸—高氯酸法硫酸—氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀）破壞后，金屬呈高價態(tài)2020/12/1874注意點(diǎn)：所用儀器一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏瓶所用試劑應(yīng)為優(yōu)級純水應(yīng)為去離子水或高純水按相同條件進(jìn)行空白試驗校正操作在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行2020/12/1875中藥制劑中朱砂含量測定的消化2020/12/1876⒉干法消化將有機(jī)物灼燒灰化達(dá)到分解目的方法：供試品

灰分

將適量樣品置于瓷坩鍋、鎳坩鍋或鉑坩堝中，常加無水Na2CO3或輕質(zhì)MgO以助灰化?；靹蚝?，先小火加熱，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。灼燒灰化(+NaCO3/MgO)2020/12/1877

適用：濕法不易破壞完全的有機(jī)物；某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。不適用：含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)藥物的破壞2020/12/1878注意事項：（1）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度在420℃以下，防止金屬化合物的揮發(fā)（2）一定要灰化完全（3）如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（1：3）或稀鹽酸-水（1：3）水浴上蒸干后，繼續(xù)小火灰化2020/12/1879思考題一、小劉欲鑒別芍藥苷片中的芍藥，其操作如下：取本品約2.5g,精密稱定，加甲醇20mL,超聲提取20min,濾過，濾液蒸干，殘渣加水5mL溶解并轉(zhuǎn)移至已預(yù)先凈化的D-101大孔樹脂住上（內(nèi)徑1.3cm,填充高度13cm）,控制流速0.5ml/min,待液面降至樹脂表面時，分別用50ml水、50ml10%乙醇，