GB乳酸菌檢驗(yàn)演示文稿

GB乳酸菌檢驗(yàn)(Yan)演示文稿第一頁(yè)，共二十九頁(yè)。定(Ding)義

乳酸菌是指一群通過(guò)發(fā)酵糖類產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌通稱。乳桿菌屬雙歧桿菌屬鏈球菌屬的嗜熱鏈球菌第二頁(yè)，共二十九頁(yè)。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T4789.35-2008相比，主要變化如下：——修改了乳酸(Suan)菌總數(shù)、乳桿菌、雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌的計(jì)數(shù)方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：——GB4789.35-1996、GB/T4789.35-2003、GB/T4789.35-2008。第三頁(yè)，共二十九頁(yè)。GB/T4789.35－2003乳酸菌飲(Yin)料中乳酸菌檢驗(yàn)流程第四頁(yè)，共二十九頁(yè)。SN/T1941.1-2007:檢驗(yàn)方法(Fa)有三部分：第1部分：分離與計(jì)數(shù)方法；第2部分：PetrifilmTM測(cè)試片法；第3部分：乳桿菌的PCR法第五頁(yè)，共二十九頁(yè)。SN標(biāo)(Biao)準(zhǔn)第六頁(yè)，共二十九頁(yè)。GB/T4789.35－2008

乳酸菌飲(Yin)料中乳酸菌檢驗(yàn)修訂本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T4789.35－2003相比主要修改如下：——將選擇性分離培養(yǎng)基由改良TJA培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）改為MRS培養(yǎng)基；——增加API50CH診斷試劑條；——乳酸菌計(jì)數(shù)由傾注法改為涂布法。第七頁(yè)，共二十九頁(yè)。

2010版(Ban)第八頁(yè)，共二十九頁(yè)。樣品(Pin)制備7.1.3固體和半固體食品：以無(wú)菌操作稱取25g樣品，置于裝有225mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，制成1:10樣品勻液；或置于225mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min制成1:10的樣品勻液。7.1.4液體樣品：液體樣品應(yīng)先將其充分搖勻后以無(wú)菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10的樣品勻液。第九頁(yè)，共二十九頁(yè)。乳酸(Suan)菌計(jì)數(shù)乳酸菌總數(shù)根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個(gè)MRS瓊脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃±1℃，厭氧培養(yǎng)48h±2h后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板涂布要求在15min內(nèi)完成。第十頁(yè)，共二十九頁(yè)。乳酸菌(Jun)計(jì)數(shù)雙歧桿菌計(jì)數(shù)根據(jù)對(duì)待檢樣品雙歧桿菌含量的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL樣品勻液于莫匹羅星鋰鹽（Li-Mupirocin）改良MRS瓊脂平板，使用滅菌L形棒進(jìn)行表面涂布，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平板。36℃±1℃，厭氧培養(yǎng)48h±2h后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。第十一頁(yè)，共二十九頁(yè)。乳酸(Suan)菌計(jì)數(shù)嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個(gè)MC瓊脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃±1℃，需氧培養(yǎng)48h±2h后計(jì)數(shù)。嗜熱鏈球菌在MC瓊脂平板上的菌落特征為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑2mm±1mm，菌落背面為粉紅色。第十二頁(yè)，共二十九頁(yè)。乳酸菌計(jì)(Ji)數(shù)乳桿菌計(jì)數(shù)乳酸菌總數(shù)結(jié)果減去

雙歧桿菌與

嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)結(jié)果之和即得乳桿菌計(jì)數(shù)。第十三頁(yè)，共二十九頁(yè)。報(bào)(Bao)告（GB/T4789.35-2008）根據(jù)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果出具檢測(cè)報(bào)告。最終確定的乳酸菌菌落在30～300之間的平板計(jì)數(shù)，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，修約保留兩位有效數(shù)字，之后的數(shù)字，采用10的指數(shù)表示。參照GB/T4789.2規(guī)定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌數(shù)以CFU/g（mL）表示。

第十四頁(yè)，共二十九頁(yè)。報(bào)(Bao)告（GB4789.35-2010）7.3.1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。7.3.2其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。7.3.3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。第十五頁(yè)，共二十九頁(yè)。結(jié)果(Guo)的表述7.4.1若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）中菌落總數(shù)結(jié)果。7.4.2若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算：第十六頁(yè)，共二十九頁(yè)。第十七頁(yè)，共二十九頁(yè)。7.4.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.4.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.4.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。7.4.6若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部(Bu)分小于30CFU或大于300CFU時(shí)，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。第十八頁(yè)，共二十九頁(yè)。菌落(Luo)數(shù)的報(bào)告7.5.1菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。7.5.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。7.5.3稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。第十九頁(yè)，共二十九頁(yè)。第二十頁(yè)，共二十九頁(yè)。第二十一頁(yè)，共二十九頁(yè)。第二十二頁(yè)，共二十九頁(yè)。3Mpetrifilm第二十三頁(yè)，共二十九頁(yè)。乳酸菌(Jun)的鑒定純培養(yǎng)挑取3個(gè)或以上的可疑菌落，嗜熱鏈球菌接種于MC瓊脂平板，乳桿菌屬接種于MRS瓊脂平板，兼性厭氧，置36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h±2h。雙歧桿菌屬鑒定按照GB/T4789.34。第二十四頁(yè)，共二十九頁(yè)。涂片鏡(Jing)檢乳桿菌屬細(xì)胞形態(tài)多樣，從長(zhǎng)的桿狀和細(xì)長(zhǎng)桿狀到彎曲桿狀及短桿狀，一般形成鏈。通常不運(yùn)動(dòng)。無(wú)芽胞，革蘭氏染色陽(yáng)性。嗜熱鏈球菌形態(tài)為球形或球桿狀，直徑為0.5μm～2.0μm，細(xì)胞成對(duì)或成鏈排列，無(wú)芽