試驗考試復習內容細菌鑒定技術

細菌鑒定技術試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第1頁!常用細菌生化反應糖發(fā)酵試驗吲哚試驗（靛基質試驗）甲基紅試驗V-P（Voges-Proskauer）試驗枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗克氏雙糖鐵（KIA）復合試驗動力、吲哚及脲酶（MIU）復合試驗試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第2頁!1.糖發(fā)酵試驗【原理】：各種細菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，對糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解后僅產酸，有的分解后產酸產氣，故可用來鑒別細菌?！痉椒ā浚簩⒋竽c埃希菌和傷寒沙門菌分別接種葡萄糖、乳糖發(fā)酵管，35oC培養(yǎng)18-24h觀察結果。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第3頁!1.糖發(fā)酵試驗【結果】：首先確定細菌是否生長，細菌生長者培養(yǎng)基呈混濁狀：1）不分解糖，培養(yǎng)基顔色與接種前無變化，以“-”表示；2）分解糖產酸不產氣，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色，以“+”表示；3）分解糖產酸產氣，除培養(yǎng)基顔色變化外，倒管中還有氣泡，以“⊕”表示。大腸埃希菌分解葡萄糖和乳糖產酸產氣，傷寒沙門菌分解葡萄糖產酸不產氣，不分解乳糖。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第4頁!2.吲哚試驗（靛基質試驗）【原理】：有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產生吲哚，與吲哚試劑形成紅色化合物。【方法】：大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，35oC18-24h后，加入吲哚試劑數滴，靜置分層，觀察結果?！窘Y果】：在培養(yǎng)物液面上層呈玫瑰紅色為陽性，不變色者為陰性。大腸埃希菌為陽性，傷寒沙門菌為陰性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第5頁!3.甲基紅試驗【原理】：某些細菌分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸可進一步分解為甲酸、乙酸等酸性物質，故培養(yǎng)基pH在4.5以下，加入甲基紅指示劑后呈紅色（陽性）；有些細菌分解葡萄糖產生的酸進一步化為醇、酮等非酸性物質，使培養(yǎng)基pH在6.2以上，加入甲基紅指示劑后呈黃色（陰性）。【方法】：大腸埃希菌和產氣腸桿菌分別接種葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35oC18-24h，加入甲基紅指示劑2-3滴觀察結果。【結果】：紅色為陽性，黃色為陰性。大腸埃希菌為陽性，產氣腸桿菌為陰性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第6頁!4.V-P（Voges-Proskauer）試驗【原理】：某些細菌分解葡萄糖生成丙酮酸，進一步脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境下被氧化成二乙酰，后者與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色胍縮二乙酰，為VP試驗陽性。若培養(yǎng)基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酐，以加速其反應?！痉椒ā浚捍竽c埃希菌和產氣腸桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水中，35oC，24-48h，加入VP試劑甲液和乙液各1滴，充分搖動，觀察?！窘Y果】：紅色為陽性，若為陰性應再培養(yǎng)4h觀察，仍無紅色者為陰性。大腸埃希菌陰性，產氣腸桿菌陽性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第7頁!5.枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗【原理】：當細菌可以利用銨鹽作為唯一氮源，同時檸檬酸鹽為惟一碳源時，可在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解檸檬酸鹽為碳酸鹽，使培養(yǎng)基變堿，指示劑溴麝香草酚藍由綠色變?yōu)樯钏{色為陽性，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性?！痉椒ā浚捍竽c埃希菌和產氣腸桿菌分別接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基中，35oC，24-48h，觀察。【結果】：菌苔出現，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{色為陽性。細菌不能生長，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性。產氣腸肝菌為陽性，大腸埃希菌為陰性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第8頁!6.克氏雙糖鐵（KIA）復合試驗【原理】：該培養(yǎng)基用酚紅指示劑，在酸性時呈黃色，堿性時呈紅色。細菌如能發(fā)酵乳糖和葡萄糖而產酸產氣，則斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。如只發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接觸空氣而氧化揮發(fā)，從而使斜面部分保持原來的紅色；底層由于是在相對缺氧狀態(tài)下，細菌發(fā)酵葡萄糖所生成的酸類物質不被氧化揮發(fā)而保持黃色。如細菌分解蛋白產生硫化氫，則與硫化亞鐵作用生成黑色的硫化鐵，使培養(yǎng)基變黑。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第9頁!雙糖鐵培養(yǎng)基標準管痢疾桿菌KA－－斜面：K紅色底層：A黃色傷寒桿菌KA－＋大腸桿菌AA＋－沒產氣沒產H2S產H2S產氣試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第10頁!

大腸埃希菌MIU（＋＋－）普通變形桿菌MIU（＋＋＋）M：動力I：吲哚U：尿酶試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第11頁!大腸埃希菌IMViC試驗（＋＋－－）

右側為對照（－－＋＋）

I：吲哚，M：甲基紅，Vi：VP，C：枸櫞酸鹽試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第12頁!沙門菌IMViC試驗（－＋－－）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第13頁!志賀菌IMViC試驗（－＋－－）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第14頁!肺炎克雷伯菌IMViC試驗（－－＋＋）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第15頁!變形桿菌KIA（KA++）MIU（++/-+）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第16頁!【原理】氧化酶或稱細胞色素氧化酶，是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗時，此酶首先使細胞色素C氧化，然后氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產生顏色反應?！痉椒ā咳V紙一角，沾取菌落少許，加試劑一滴，陽性者立即粉紅色，并于5-10秒內呈現深紫色。氧化酶試驗銅綠假單胞菌：陽性大腸埃希菌：陰性試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第17頁!【原理】某些細菌能產生尿素酶分解尿素，產氨使培養(yǎng)基變堿。

【方法】將被檢菌接種尿素培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)18～24h觀察結果。陰性時應繼續(xù)觀察4d。

【結果】酚紅指示劑變紅為陽性，不變?yōu)殛幮?。變形桿菌陽性，大腸埃希菌陰性。

尿素酶試驗試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第18頁!涂片干燥固定染色水洗鏡檢簡單染色方法干燥試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第19頁!注意：水洗時，不要直接沖洗涂面，而應使水從載玻片的一端流下。水流不宜過急，過大，以免涂片薄膜脫落。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第20頁!操作過程取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸復紅加溫染色8~10分鐘后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止水洗后，用堿性美藍復染1分鐘→水洗，印干→鏡檢試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第21頁!細菌接種：固體平板培養(yǎng)基接種方法：分區(qū)劃線法固體斜面培養(yǎng)基接種方法：劃線法固體高層斜面培養(yǎng)基接種方法：穿刺劃線法半固體培養(yǎng)基接種方法：穿刺法液體培養(yǎng)基接種方法：液體接種法實驗內容復習使用器材接種環(huán)接種針/接種環(huán)接種針接種針接種環(huán)/接種針試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第22頁!試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第23頁!試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第24頁!－+試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第25頁!－+試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第26頁!試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第27頁!6.克氏雙糖鐵（KIA）復合試驗【方法】：將待檢菌接種于克氏雙糖鐵培養(yǎng)基（底層穿刺，上層斜面劃線），35oC，24h，觀察?！窘Y果】：發(fā)酵乳糖和葡萄糖產酸產氣，則上層和底層均呈黃色且有氣泡產生；只發(fā)酵葡萄糖而不發(fā)酵乳糖，則底層變黃，上層仍為紅色。如底層變黑，說明該菌產生硫化氫，生成黑色的硫化鐵沉淀。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第28頁!7.動力、吲哚及脲酶（MIU）復合試驗【原理】：培養(yǎng)基為含尿素、蛋白胨的半固體培養(yǎng)基，指示劑為酚紅。具色氨酸酶的細菌能分解色氨酸產生吲哚，加入吲哚試劑后，培養(yǎng)基上層的吲哚會變紅；具脲酶的細菌能分解尿素產氨，使整個培養(yǎng)基變堿呈紅色；有動力的細菌沿穿刺線擴散生長?！痉椒ā浚簩⒋竽c埃希菌和普通變形桿菌穿刺線接種于MIU培養(yǎng)基，35oC，18-24h，觀察動力和脲酶反應后，再滴加吲哚試劑?！窘Y果】：擴散生長為動力陽性；滴加吲哚試劑后呈玫瑰紅色為陽性；培養(yǎng)基變紅脲酶陽性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第29頁!請記住：大腸埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）上層變黃下層變黃產氣沒產H2S試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第30頁!傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第31頁!志賀菌KIA（KA－－）MIU（－－－）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第32頁!肺炎克雷伯菌KIA（AA＋＋）、MIU（－－＋）

試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第33頁!產氣腸桿菌IMViC試驗（－－＋＋）試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第34頁!血漿凝固酶試驗：1）原理：金黃色葡萄球菌能產生結合型血漿凝固酶（凝聚因子），可使血漿中可溶性的纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白，附著于細菌表面，在玻片上形成凝塊；游離型的血漿凝固酶則可使試管中的血漿發(fā)生凝固。金黃色葡萄球菌的凝固酶陽性，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的凝固酶陰性。試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第35頁!【原理】過氧化氫酶可使過氧化氫分解為分子態(tài)氧?！痉椒ā康渭?%過氧化氫溶液數滴于玻片上，挑取固體培養(yǎng)基上的菌落少許于過氧化氫溶液，觀察結果。【結果】30s內產生大量氣泡者為陽性。

過氧化氫酶（觸酶）試驗葡萄球菌：陽性鏈球菌：陰性試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第36頁!【原理】當細菌能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長分解枸櫞酸鈉，使培養(yǎng)基變堿?！痉椒ā吭阼蹤此猁}瓊脂斜面上濃密劃線，接種被檢菌，于35℃培養(yǎng)1～4d，逐日觀察結果。

【結果】枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細菌生長，培養(yǎng)基變藍為陽性；無細菌生長、顏色不變（綠色）為陰性。大腸埃希菌：陰性產氣腸桿菌：陽性

枸櫞酸鹽利用試驗試驗考試復習內容細菌鑒定技術共41頁，您現在瀏覽的是第37頁!⑴初染將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨結晶紫染色液(加量以蓋滿菌膜為度)，染色1min。傾去染色液，用自來水小心地沖洗。⑵媒染滴加(Lugol)碘液，染1min，水洗。⑶脫色滴加95%乙醇，脫色30s立即水洗，以終止脫色。⑷復染滴加蕃紅，染色30s，水洗。最后用吸水紙輕輕吸