速康解毒口服液對小白鼠的毒理試驗,畜牧獸醫(yī)論文

速康解毒口服液對小白鼠的毒理試驗,畜牧獸醫(yī)論文速康解毒口服液是由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所和西藏農(nóng)牧科學(xué)院聯(lián)合研制的針對動物瘋草中毒的專利產(chǎn)品,由酵母甘露聚糖、正磷酸鈉、硫酸鎂和L-鼠李糖按一定比例組成,其對-甘露糖苷酶的合成具有良好的誘導(dǎo)作用,可有效解除由瘋草中毒引起的動物慢性神經(jīng)機能障礙,有效保衛(wèi)動物的生長發(fā)育和畜種改進[1].本試驗旨在研究小白鼠急性毒性和亞急性毒性,為該制劑的安全性評價和臨床安全劑量的挑選提供根據(jù).1材料與方式方法1.1試驗材料1.1.1主要試劑及儀器SysmexF2820型全自動血常規(guī)分析儀(日本東亞公司產(chǎn)品),乙醇(AR).血糖(GLUC),貨號YZB262-40-2018;總蛋白(PROT),貨號A045-2;白蛋白(ALB),貨號A028-1;總膽固醇(CHOL),貨號YZB0397-2020;總膽紅素(TBIL),貨號C018;堿性磷酸酶(AKP),貨號A059-2;肌酐(Cr),貨號C011-1;尿素氮(BUN),貨號C013-2;谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),貨號C010-1.試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供.1.1.2試驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境SPF級生理狀況正常的Wista小白鼠由蘭州大學(xué)實驗動物中心提供,體質(zhì)量為(17.61.0)g.動物房及實驗室溫度為(24.01.0)℃,光照黑暗每12h更替.試驗小白鼠于試驗前在動物房適應(yīng)一周,塑料籠飼養(yǎng),每周更換墊料3次,自由攝食攝水.1.2試驗方式方法1.2.1預(yù)試驗預(yù)試驗前對小白鼠進行7d喂養(yǎng)觀察,觀察期內(nèi)小白鼠自由飲水、采食,每日空腹稱量體質(zhì)量,淘汰自然死亡小白鼠.預(yù)試驗期內(nèi)選取40只小白鼠,隨機分為5組,每組8只,雌雄各半,按200、400、800、1600mg/kg劑量1次性灌胃給藥,確定正式試驗的劑量范圍.1.2.2急性毒性正式試驗另取20只小白鼠,隨機分為2組.給藥組以最大質(zhì)量濃度(1.0g/mL)、最大容積(0.8mL)1次性灌胃受試藥物,對照組用等體積生理鹽水,給藥后連續(xù)觀察7d,測定最大給藥量.正式試驗時,將小白鼠隨機分為4組(對照組和3個給藥組,給藥組藥劑量分別為3200、1600和800mg/kg),每組10只,雌雄各半,共40只.灌胃前后6h禁食(自由飲水),試驗組均按每只小白鼠的體質(zhì)量計算給藥量,金屬灌胃器一次性灌胃給藥.對照組小白鼠保持自由采食和飲水.給藥后天天觀察小白鼠的采食、飲水、死亡、精神、被毛和自主活動等,連續(xù)觀察7d.及時解剖死亡小白鼠,記錄病變情況,并在第8天稱量所有小白鼠體質(zhì)量并解剖,觀察腹腔內(nèi)液體情況和本質(zhì)性器官的病理變化[2-7].1.2.3亞慢性毒性試驗取小白鼠80只,隨機分為4組,每組20只,雌雄各半.分為高、中、低3個劑量組,灌胃劑量分別為3200、1600和800mg/kg;對照組每日定時灌胃等量9g/L生理鹽水.各組連續(xù)灌胃30d,停藥后再持續(xù)觀察14d.觀察給藥期間小白鼠的一般狀況,根據(jù)小白鼠一般健康體征外觀評價標準斷定小白鼠的健康狀況[8-9],若小白鼠兩眼有神,被毛光潔,對刺激敏感,對環(huán)境敏感,則斷定為Ⅰ級;被毛微亂,失去光澤,小白鼠仍然警惕活潑踴躍,斷定為Ⅱ級;被毛顯著混亂,部分成簇,小白鼠不再警惕活潑踴躍,對籠外環(huán)境敏感性差,當觸摸時出現(xiàn)強力呼吸體征,斷定為Ⅲ級;小白鼠彎腰拱背,困乏,對環(huán)境不敏感,被毛混亂成簇,斷定為Ⅳ級;小白鼠對刺激無反響,被毛呈瓶刷狀,站立不穩(wěn),小白鼠彎腰,倦怠,嗜睡,觸摸皮毛,爪反響麻木,斷定為Ⅴ級.每周測定小白鼠體質(zhì)量變化情況,死亡小白鼠及時剖檢.于停藥后第1天和第14天,各組隨機抽取10只采血,EDTA二鉀鹽抗凝,立即用SysmexF2820型全自動血常規(guī)分析儀測定紅細胞數(shù)、白細胞總數(shù)、淋巴細胞、血小板數(shù)和血紅蛋白含量.于停藥后第1天和第14天,每組隨機抽取10只采血,分離血清,用試劑盒測定谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、尿素氮、肌酐、總蛋白、白蛋白、血糖含量.于停藥后第1天每組隨機抽取3只,停藥后第14天剖檢剩余小白鼠,采集心、肝、脾、肺、腎,計算臟器系數(shù).對剖檢發(fā)現(xiàn)有病理變化的臟器,進行病理組織學(xué)觀察.2結(jié)果與分析2.1急性毒性試驗經(jīng)口1次灌服速康解毒口服液后,各試驗組小白鼠均未見死亡病例,按寇式改進法不能計算出該制劑的半數(shù)致死量(LD50).該結(jié)果表示清楚,速康解毒口服液的LD5016000mg/kg,按藥物毒性分級標準,可以為該藥物無毒.2.2最大給藥量的測定根據(jù)新獸藥申報資料規(guī)范,沒有能檢測出LD50的產(chǎn)品需開展最大給藥量試驗.根據(jù)最大給藥量的試驗方式方法,按40.0g/kg劑量單次灌服速康解毒口服液后,個別小白鼠蜷縮在角落,活動減少,次日所有小白鼠精神、活動、飲水和采食均轉(zhuǎn)為正常,7d后所有小白鼠均健康存活.同時,處死兩組試驗小白鼠,剖檢心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟,肉眼觀察均未見異常變化,結(jié)合觀察結(jié)果可知,小白鼠的最大給藥量(MTD)為40.0g/kg,相當于臨床用藥量(0.1g/kg)的400倍,講明合理劑量內(nèi)使用速康解毒口服液無毒性作用.2.3亞慢性毒性試驗2.3.1藥物對小白鼠一般異常感覺和狀態(tài)的影響根據(jù)3200、1600和800mg/kg的劑量給試驗小白鼠天天經(jīng)口灌胃給藥1次,連續(xù)30d,試驗期內(nèi)對照組和試驗組小白鼠均未觀察到明顯的異常反響和中毒異常感覺和狀態(tài),采食、飲水、排尿、排糞均正常,生長發(fā)育情況良好,根據(jù)標準斷定健康級別為Ⅰ級.2.3.2試驗藥物對小白鼠血液常規(guī)指標的影響由表1可知,連續(xù)給藥30d后,速康解毒口服液高、中、低劑量組的小白鼠血常規(guī)指標與對照組相比差異均不顯著(P0.05),表示清楚,速康解毒口服液對小白鼠血紅蛋白、白細胞、紅細胞、血小板等未產(chǎn)生顯著影響.2.3.3試驗藥物對小白鼠血液生化指標的影響由表2可知,連續(xù)給藥30d后,速康解毒口服液高、中、低劑量組的小白鼠血液中與代謝相關(guān)的生化指標與對照組相比差異均不顯著(P0.05).講明試驗藥物對小白鼠的肝臟、腎臟功能無不良影響.2.3.4試驗藥物對小白鼠的臟器系數(shù)的影響停藥后第1天和第14天的剖檢結(jié)果顯示,各組小白鼠心、肝、脾、肺、腎的形態(tài)、顏色、質(zhì)地均正常,無明顯肉眼可見病變,各組間小白鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺系數(shù)差異均不顯著(P0.05)(表3).講明,合理使用速康解毒口服液不會導(dǎo)致動物本質(zhì)臟器損傷或異常變化.3討論3.1速康解毒口服液的急性毒性評價急性毒性試驗是確定中毒作用方式、中毒反響,以及為亞急性和慢性毒性試驗觀察指標及劑量分組提供參考的重要根據(jù),也是新藥生物安全評價的重要指標[10].本試驗中,急性毒性試驗因受速康解毒口服液溶液質(zhì)量濃度和體積的影響,無法給予動物更大劑量的藥物,無法測出半數(shù)致死量LD50.根據(jù)藥物毒性分級標準,LD5016000mg/kg時,藥物可視為為無毒.根據(jù)中國新獸藥研發(fā)規(guī)范與申報指南,對無法測出LD50的藥物需分析其最大給藥量,一般檢測動物單次或24h內(nèi)2~3次服用最大劑量藥物后的反響[11].本試驗中,小白鼠單次經(jīng)口灌服劑量為40.0g/kg的速康解毒口服液后,一周內(nèi)體況良好,未見死亡病例,剖檢臟器均未見肉眼異常改變.表示清楚臨床合理使用藥物不會對靶動物造成不良毒性影響,速康解毒口服液最大給藥量可定為40.0g/kg.3.2速康解毒口服液的亞慢性毒性評本研究選用無瘋草中毒病的健康小白鼠作為試驗動物,以考察速康解毒口服液本身能否具有毒性作用及其毒性作用的強弱.小白鼠30d喂養(yǎng)試驗是評價藥物或毒物亞慢性危害的主要根據(jù),本試驗受藥物最大質(zhì)量濃度溶液制備的限制,選擇3200、1600和800mg/kg3個劑量組,分別是靶動物推薦劑量(0.4g/kg)的8、4和2倍,到達最低限量要求.試驗結(jié)果顯示,3個劑量組小白鼠的血液常規(guī)、血液生化指標、臟器系數(shù)與對照組間均無顯著差異(P0.05),各臟器亦無組織病理學(xué)異常變化.表示清楚在合理療程范圍內(nèi),藥物速康解毒口服液不會對受試動物產(chǎn)生慢性的毒性作用.4結(jié)論小白鼠急性毒性試驗和小白鼠亞慢性毒性試驗結(jié)果表示清楚,速康解毒口服液本身無毒性;按臨床推薦劑量使用速康解毒口服液藥治療動物瘋草中毒,安全可靠,對動物機體無毒副作用,可在獸醫(yī)臨床推廣應(yīng)用.Reference(以下為參考文獻):[1]YANGXianpeng(楊賢鵬),HAOBaocheng(郝寶成),LI-ANGJianping(梁劍平),etal.Researchadvancesinthede-toxificatingpreparationofswainsonineinLocoweedanditsapplicationtoanti-tumor[J].JournalofAnhuiAgriSci(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)),2020,40(5):2664-2665,2668(inChinesewithEnglishabstract).[2]XIANGMeng(相猛),SHIGuangliang(石廣亮),LUYangang(魯延剛),etal.AcutetoxicityoftotalalkaloidsofAmmopiptanthusmongolicaseedstomice[J].JournalofGansuAgriculturalUniversity(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報),2020,47(1):49-52(inChinesewithEnglishabstract).[3]LEIHongdong(雷宏東),LIANGJianping(梁劍平),GUOZhiting(郭志廷),etal.StudyontheacutetoxicityofDi-chroafebrifugaextractive[J].ChinaAnimalHusbandryVeterinaryMedicine(中國畜牧獸醫(yī)),2018,38(6):236-238(inChinese).[4CHENYi(陳燚),CHENChao(陳超).SubchronicoraltoxicitystudyofDaohuaxiangVigorLiquor(DVL)inwist-arrats[J].Liquor-MakingScienceTechnology(釀酒科技),2008(8):43-46(inChinesewithEnglishabstract).[5]SHIDongxia(石東霞),JIANGZhongrong(蔣忠榮),YINZhongqiong(殷中瓊),etal.Studiesonthesubchronicoraltoxicityofneemoilinmice[J].ChineseVeterinaryScience(中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