實(shí)驗(yàn)五柱層析

實(shí)驗(yàn)五柱層析有機(jī)化學(xué)與藥物化學(xué)教研室

柱層析

將固定相裝于柱管內(nèi)構(gòu)成層析柱，層析過(guò)程在層析柱內(nèi)進(jìn)行。按層析柱的粗細(xì)差別，可分為填充柱層析法、毛細(xì)管柱層析法及微填充柱層析法等。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握柱層析的原理和基本操作。2.利用柱層析的方法分離和提純有機(jī)物。二、實(shí)驗(yàn)原理

柱色譜是利用混合物中各組分受吸附作用的不同以及各組分在溶劑中溶解度的差別，將各組分分離?？煞譃槲街鶎游龊头峙渲鶎游?。

吸附柱層析

預(yù)分離的混合物隨著流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，在固定相上反復(fù)發(fā)生吸附－洗脫－再吸附－再洗脫。由于各組分吸附能力不同，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，按對(duì)吸附劑親和力大小，形成不同色帶而分離。

影響吸附柱層析的因素吸附劑柱色譜常用的吸附劑是氧化鋁和硅膠。吸附劑應(yīng)進(jìn)行純化和活化處理，含水量越低，活性越高?；衔锏臉O性和吸附能力

化合物的吸附性與分子極性成正比。分子極性越強(qiáng)，吸附能力越大。洗脫劑先用極性小的溶劑洗脫，后改用極性強(qiáng)的溶劑洗脫。使化合物按極性與小到大順序出柱。三、儀器和藥品色譜柱、玻璃漏斗、滴液漏斗、100ml燒杯一個(gè)、150ml錐形瓶二個(gè)、滴定臺(tái)（或鐵架臺(tái)）、剪刀、玻棒

0.05%甲基橙和0.25%亞甲基藍(lán)混合乙醇溶液[1]、100～200目中性色譜用氧化鋁、無(wú)水乙醇、0.1mol/L鹽酸溶液、蒸餾水、脫脂棉、濾紙

（[1]稱取110mg甲基橙和550mg亞甲基藍(lán)于250ml95%乙醇中溶解。）

四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、裝柱取清潔干燥的色譜柱，管底墊少許棉花，防止氧化鋁漏下。傾入無(wú)水乙醇20ml，稱取15g柱用氧化鋁，經(jīng)漏斗緩慢倒入管中，同時(shí)輕輕拍打色譜柱，用無(wú)水乙醇清洗沾在管內(nèi)壁上的氧化鋁。打開(kāi)活塞，氧化鋁隨著溶劑流動(dòng)繼續(xù)下沉，直至沉降停止。在氧化鋁表面平整緊貼地覆蓋一張略小于色譜柱內(nèi)徑的濾紙，打開(kāi)活塞使氧化鋁表面僅留一薄層約1mm的溶劑。

2、加樣

在色譜柱表面小心加入亞甲基蘭和甲基橙的混合溶液5-8滴（注意勿使樣品沾在色譜柱的內(nèi)壁上）。

3、洗脫

打開(kāi)活塞，使樣品液全部進(jìn)入吸附劑（勿使流干）。加入無(wú)水乙醇，打開(kāi)活塞使藍(lán)色譜帶完全進(jìn)入吸附劑，關(guān)閉活塞；重復(fù)二次，藍(lán)色譜帶逐漸下移。繼續(xù)加無(wú)水乙醇，使亞甲基藍(lán)完全洗脫，收集于第1個(gè)三角錐瓶。改用蒸餾水作洗脫劑（操作步驟與以無(wú)水乙醇作洗脫劑相同），使甲基橙完全洗脫，收集于第2個(gè)三角錐瓶。滴加鹽酸溶液可發(fā)現(xiàn)變紅。注意事項(xiàng)

1.加入氧化鋁時(shí)動(dòng)作要緩慢，使之均勻加入，以防在柱中間流下氣泡。