幾種重要病毒的簡(jiǎn)介

幾種重要病毒的簡(jiǎn)介第1頁(yè)/共272頁(yè)本章重點(diǎn)1.腺病毒復(fù)制的特點(diǎn)以及逃避宿主免疫監(jiān)控的機(jī)制2.何為自主型和缺陷型細(xì)小病毒3.輪狀病毒基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、編碼蛋白的功能及逃避宿主免疫監(jiān)控的機(jī)制4.流感病毒的變異特點(diǎn)5.SARS的起源流6.艾滋病毒的致病特點(diǎn)7.乙肝病毒復(fù)制的特點(diǎn)第2頁(yè)/共272頁(yè)第一節(jié)Ⅰ類病毒—腺病毒

腺病毒（Adenovirus）最初于1953年從人的增殖腺分離出來(lái)，它是一群分布十分廣泛的DNA病毒。能引起人類呼吸道、胃腸道、泌尿系統(tǒng)及眼的疾病，少數(shù)對(duì)動(dòng)物有致癌作用。腺病毒科（Adenoviridae）病毒分四個(gè)屬：哺乳動(dòng)物腺病毒屬（Mastadenovirus）禽腺病毒屬（Aviadenovirus）富AT腺病毒屬（Atadenovirus）唾液酸酶病毒屬（Siadenovirus）第3頁(yè)/共272頁(yè)一、生物學(xué)性狀

腺病毒無(wú)囊膜，直徑80~110nm，呈二十面體對(duì)稱，線狀的雙股DNA與核心蛋白形成直徑60~65nm的髓芯，被包裹于衣殼內(nèi)。衣殼由252個(gè)直徑8~10nm的殼粒組成，殼粒排列在三角形的面上，每邊6個(gè)，其中240個(gè)為六鄰體(Hexon)，另12個(gè)為五鄰體基底(Penton，頂點(diǎn)殼粒)。每個(gè)五鄰體基底上結(jié)合著1根(哺乳動(dòng)物腺病毒)或2根(禽腺病毒)長(zhǎng)9~77.5nm的纖維突起，這些纖維以五鄰體蛋白為基底由衣殼面伸出，纖維頂端形成頭節(jié)區(qū)。第4頁(yè)/共272頁(yè)第5頁(yè)/共272頁(yè)第6頁(yè)/共272頁(yè)第7頁(yè)/共272頁(yè)衣殼蛋白解離后，具有三種抗原。其中組成六鄰體的衣殼蛋白具有組特異性α抗原；組成五鄰體的基底具有同組共有的β抗原；而組成五鄰體的纖維是型特異性γ抗原所在。自上個(gè)世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)并成功分離腺病毒以來(lái)，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了100余個(gè)血清型，其中人腺病毒有47種，分為A、B、C、D、E和F六個(gè)亞群。

第8頁(yè)/共272頁(yè)腺病毒耐酸，故能通過(guò)胃腸道而繼續(xù)保持活性，這為口服腺病毒載體的研制提供了方便，許多腺病毒就是從人和動(dòng)物的糞便中獲得的。無(wú)囊膜，對(duì)有機(jī)溶劑不敏感，但在丙酮中不穩(wěn)定。腺病毒在-20℃時(shí)可長(zhǎng)期存活，56℃加熱可滅活。適宜pH為5~6，pH值在2以下或10以上均不穩(wěn)定。第9頁(yè)/共272頁(yè)二、病毒的復(fù)制1、基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：①反向末端重復(fù)序列（invertedterminalrepeat,ITR）：每股核酸末端都有長(zhǎng)約100bp的反向末端重復(fù)序列，是復(fù)制的起始位點(diǎn)。②末端蛋白（TP）：每股DNA的5’端通過(guò)脫氧胞苷共價(jià)結(jié)合一個(gè)小蛋白質(zhì)（55ku）即末端蛋白（TP）。對(duì)DNA復(fù)制的起始非常重要。③蛋白VII和一種稱為mu的小蛋白緊密地環(huán)繞在DNA周圍，起到類組蛋白樣的作用。另一種蛋白V將這種DNA-蛋白復(fù)合物連接起來(lái)，并通過(guò)蛋白VI與病毒衣殼連接在一起。④在左端ITR的3’側(cè)有一段長(zhǎng)約300bp的包裝信號(hào)（ψ）介導(dǎo)腺病毒基因組包裝入病毒衣殼。第10頁(yè)/共272頁(yè)ITRITR

ψE1AE1BL1L2L3L4E3L5E2BE2AE4第11頁(yè)/共272頁(yè)2、病毒的復(fù)制⑴粘附和進(jìn)入細(xì)胞腺病毒感染細(xì)胞的過(guò)程是從腺病毒纖毛的頭節(jié)區(qū)粘附到細(xì)胞表面的特異性受體開(kāi)始的。因?yàn)槿讼俨《局饕c柯薩奇B病毒共用一種受體，因此這種受體被稱為柯薩奇/腺病毒受體即CAR（coxsackie/adenovirusreceptor）。第12頁(yè)/共272頁(yè)⑵轉(zhuǎn)錄與復(fù)制腺病毒基因早期產(chǎn)物的主要功能：①E1區(qū)基因表達(dá)產(chǎn)物（調(diào)控宿主細(xì)胞，與病毒致癌相關(guān)）

E1區(qū)基因進(jìn)一步分為E1A和E1B：E1A蛋白的主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝，將感染細(xì)胞帶入DNA復(fù)制周期，細(xì)胞開(kāi)始儲(chǔ)存病毒DNA復(fù)制所需的原料。E1A蛋白還可以激活其他早期基因（E1B、E2A、E2B、E3和E4）的啟動(dòng)子，也可以拮抗干擾素的作用。

第13頁(yè)/共272頁(yè)E1B蛋白的主要功能是防止細(xì)胞凋亡，調(diào)控晚期基因的表達(dá)。19K與細(xì)胞Bcl-2基因（抑制細(xì)胞凋亡）的表達(dá)產(chǎn)物同源，可以通過(guò)滅活和清除Bax家族成員來(lái)防止細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死。E1B55K基因產(chǎn)物可以下調(diào)p53基因（刺激細(xì)胞凋亡）的轉(zhuǎn)錄水平，當(dāng)然這種調(diào)節(jié)功能不是絕對(duì)的，其他一些腺病毒基因（如E4orf6）也參與了這一過(guò)程。另外，E1B55K基因產(chǎn)物干擾細(xì)胞mRNA從細(xì)胞核釋放。第14頁(yè)/共272頁(yè)②E2區(qū)基因表達(dá)產(chǎn)物（復(fù)制相關(guān)蛋白）可分為E2A和E2B。其中E2A即單鏈DNA結(jié)合蛋白（ssDBP,single-strandedDNAbindingproteins）；E2B主要產(chǎn)物有兩種，分別是末端蛋白前體（pTP,precursorterminalprotein）和病毒DNA聚合酶（pol）。三種蛋白與至少三種細(xì)胞內(nèi)的因子相互作用，啟動(dòng)腺病毒DNA復(fù)制以及病毒晚期基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程。第15頁(yè)/共272頁(yè)③E3區(qū)基因表達(dá)產(chǎn)物（逃避免疫攻擊）

主要功能是破壞宿主的免疫防御機(jī)制，而與病毒基因組的復(fù)制無(wú)關(guān)。E3基因的產(chǎn)物之一11.6Kd，由于可以在病毒感染的晚期裂解細(xì)胞并釋放病毒顆粒而被稱為腺病毒死亡蛋白（ADP，adenovirusdeathprotein）。gp19K蛋白可以在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上與MHC-I類分子的重鏈結(jié)合阻止其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面，并且可以延緩MHC-I的表達(dá)。RID（receptorinternalizationanddegradation）α&β以及14.7Kd蛋白可以抑制由TNF（腫瘤壞死因子）誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，促進(jìn)Fas（凋亡通道中的一種死亡受體）降解，下調(diào)TNF受體水平。第16頁(yè)/共272頁(yè)④E4區(qū)基因表達(dá)產(chǎn)物

E4區(qū)的基因產(chǎn)物通常被稱為orf1~6/7，主要與病毒信使RNA的代謝有關(guān)，還有促進(jìn)病毒DNA復(fù)制以及關(guān)閉宿主蛋白合成的功能。研究發(fā)現(xiàn)，一些E4產(chǎn)物可以誘導(dǎo)一些蛋白酶活性，降解宿主的某些DNA修飾酶，防止病毒DNA發(fā)生串聯(lián)。E4orf3VARNA是一些由腺病毒轉(zhuǎn)錄的非翻譯RNA，為“誘捕”RNA分子，結(jié)合PKR（宿主蛋白激酶），使該蛋白失活，關(guān)閉干擾素的產(chǎn)生。第17頁(yè)/共272頁(yè)

一般而言，DNA的復(fù)制是由RNA啟動(dòng)的，而在腺病毒卻是所謂的蛋白啟動(dòng)。不存在岡崎片段，其DNA復(fù)制可以從任何一端開(kāi)始，甚至兩端同時(shí)進(jìn)行。第18頁(yè)/共272頁(yè)復(fù)制過(guò)程中形成ssDNA的中間形式。5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’3’5’第19頁(yè)/共272頁(yè)⑶裝配與釋放病毒基因組復(fù)制通常在感染后數(shù)小時(shí)開(kāi)始表達(dá)。同時(shí)早期基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯被關(guān)閉，晚期基因開(kāi)始表達(dá)。大部分的晚期基因的轉(zhuǎn)錄是以一個(gè)共同的主要晚期啟動(dòng)子（MLP,MajorLatePromoter）調(diào)控的。實(shí)際上MLP的活性與病毒基因組復(fù)制密切相關(guān)，有研究表明一旦腺病毒基因組開(kāi)始復(fù)制，MLP的活性將明顯增強(qiáng)。晚期基因主要編碼腺病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。病毒結(jié)構(gòu)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)聚集形成病毒衣殼，病毒的基因組被包裝進(jìn)去，形成有感染能力的病毒顆粒。

病毒水解細(xì)胞骨架蛋白K18，使之不能聚合形成中間絲結(jié)構(gòu)，并最終裂解宿主細(xì)胞被釋放出去，完成腺病毒的生活周期。第20頁(yè)/共272頁(yè)三、對(duì)宿主的防衛(wèi)逃逸從病毒入侵到釋放出新病毒需要2天，較慢，容易受到宿主免疫攻擊。腺病毒1/4基因用于對(duì)付宿主免疫系統(tǒng)。1、防止細(xì)胞凋亡：E1B19K與細(xì)胞Bcl-2基因（抑制細(xì)胞凋亡）的表達(dá)產(chǎn)物同源，可以通過(guò)滅活和清除Bax家族成員來(lái)防止細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死。E1B55K基因產(chǎn)物可以下調(diào)p53基因（刺激細(xì)胞凋亡）的轉(zhuǎn)錄水平。2、加速病毒釋放：E3基因的產(chǎn)物之一11.6Kd，由于可以在病毒感染的晚期裂解細(xì)胞并釋放病毒顆粒而被稱為腺病毒死亡蛋白（ADP，adenovirusdeathprotein）。第21頁(yè)/共272頁(yè)3、破壞干擾素系統(tǒng)：沒(méi)有囊膜，不刺激干擾素產(chǎn)生；E4orf3VARNA是一些由腺病毒轉(zhuǎn)錄的非翻譯RNA，為“誘捕”RNA分子，結(jié)合PKR（宿主蛋白激酶），使該蛋白失活，關(guān)閉干擾素的產(chǎn)生。（病毒利用DNA基因組的雙鏈進(jìn)行mRNA轉(zhuǎn)錄，會(huì)出現(xiàn)dsRNA）4、躲避殺傷性T細(xì)胞：E3-19K蛋白可以在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上與MHC-I類分子的重鏈結(jié)合阻止其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面，并且可以延緩MHC-I的表達(dá)。第22頁(yè)/共272頁(yè)5、躲避天然殺傷細(xì)胞：E3基因編碼的RID蛋白結(jié)合腺病毒感染細(xì)胞的死亡受體（Fas），將其從細(xì)胞表面移走，并監(jiān)督其被破壞。作為彌補(bǔ)，E3-14.7K蛋白可以干擾來(lái)自死亡受體的信號(hào)—以防RID蛋白出現(xiàn)遺漏。天然殺傷細(xì)胞和殺傷性T細(xì)胞都有兩種方式殺傷細(xì)胞：⑴通過(guò)其表面的蛋白插入靶細(xì)胞表面的死亡受體，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，殺死靶細(xì)胞；

⑵將顆粒酶注入靶細(xì)胞（還沒(méi)有任何病毒進(jìn)化出對(duì)付顆粒酶的方法）6、利用自己的DNA聚合酶，腺病毒可以產(chǎn)生抗原漂變。第23頁(yè)/共272頁(yè)四、致病性與免疫性

人腺病毒經(jīng)呼吸道和糞口途徑傳播，也可通過(guò)呼吸道或污染物品傳播。病毒在咽、結(jié)膜尤其是小腸上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，偶爾波及其他臟器，隱性感染常見(jiàn)。疾病一般為自限性，感染后可獲得長(zhǎng)期持續(xù)的型特異性免疫力，中和抗體損傷作用重要。第24頁(yè)/共272頁(yè)在病毒性疾病中，有些為自限性感染，即感染后病程較短，隨體內(nèi)病毒被迅速清除而痊愈。如甲型肝炎、戊型肝炎、流行性感冒、流行性腮腺炎、病毒性胃腸炎等等。有些則為慢性感染，感染后病程長(zhǎng)，病毒能在體內(nèi)較長(zhǎng)期存在，病情呈慢性進(jìn)行性發(fā)展，如慢性乙型肝炎，艾滋病等。

病毒性疾病的病癥與病毒的侵入途徑密切相關(guān)；而與病毒有無(wú)包膜及病毒結(jié)構(gòu)無(wú)明顯關(guān)系。

由口咽途徑侵入的病毒無(wú)論屬RNA或DNA還是有無(wú)包膜，大多為自限性疾?。唤?jīng)體液和血液傳播的人類病毒性疾病，易形成持續(xù)感染。即使同種病毒由于侵入途徑不同，其病毒感染狀態(tài)也不相同。第25頁(yè)/共272頁(yè)五、微生物學(xué)檢查1、病毒分離自急性期病人咽、直腸、結(jié)膜等處采取標(biāo)本，迅速接種敏感細(xì)胞，根據(jù)特征性細(xì)胞突變及抗原性鑒定病毒。2、血清學(xué)檢查取急性期和恢復(fù)期血清進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，抗體升高4倍或以上，可判斷為近期感染。六、防治原則因存在許多健康帶毒者，隔離病人對(duì)防止腺病毒傳播幾乎無(wú)效。疫苗要保證無(wú)致癌危險(xiǎn)。因此，研制高純度的亞單位疫苗是今后的主要任務(wù)。第26頁(yè)/共272頁(yè)第二節(jié)Ⅱ類病毒—細(xì)小病毒細(xì)小病毒科(Parvoviridae)是迄今所知道的最小的一類動(dòng)物病毒，只發(fā)現(xiàn)其中少數(shù)病毒能導(dǎo)致有明顯臨床癥狀的傳染病，而大多數(shù)呈潛伏或持續(xù)感染狀態(tài)。該科含有兩個(gè)亞科：細(xì)小病毒亞科（Parvovirinae）和濃病毒亞科（Densovirinae）。其中濃病毒亞科的寄主僅限于無(wú)脊椎動(dòng)物。第27頁(yè)/共272頁(yè)一、生物學(xué)性狀細(xì)小病毒粒子為立體對(duì)稱的二十面體，有三種衣殼蛋白，無(wú)包膜，直徑18-25nm。其線狀ssDNA約占整個(gè)病毒粒子重量的25％～34％，分子量為1.4×106～1.7×106，沉淀系數(shù)為23～27s。細(xì)小病毒對(duì)外界理化因素的抵抗力非常強(qiáng)，在pH3和pH9、56℃處理60min仍保持穩(wěn)定，卻能被甲醛、羥胺和一些氧化劑所鈍化。細(xì)小病毒幾乎都有凝集紅細(xì)胞的特性，血凝和血凝抑制試驗(yàn)是鑒定本病毒和診斷本病的方法。

第28頁(yè)/共272頁(yè)這類病毒的核酸由于在病毒包裝時(shí)包裝了雙鏈中的一條，因此，不同病毒粒子中的ssDNA極性可能不同?？偟膩?lái)說(shuō)，自主型的病毒中，其核酸傾向于一種類型，即與mRNA互補(bǔ)的一類；而依賴型的病毒中，兩種極性的核酸各占一定的比例。

第29頁(yè)/共272頁(yè)二、病毒的復(fù)制這類病毒的核酸分子小，信息量極少，復(fù)制時(shí)不得不依賴于細(xì)胞或“輔助病毒”的幫助。據(jù)此可將細(xì)小病毒分為兩類：

自主型（autonomous）缺陷型（defective）

第30頁(yè)/共272頁(yè)自主型：這類病毒只有當(dāng)寄主細(xì)胞處于核酸合成期（S期）才能復(fù)制，因?yàn)榇藭r(shí)細(xì)胞內(nèi)存在有許多細(xì)胞分裂所需的酶可被病毒利用，病毒本身僅僅提供一個(gè)模板核酸。這類病毒獨(dú)立地侵入寄主細(xì)胞，不需要輔助病毒，僅憑寄主細(xì)胞的酶即可以復(fù)制，故稱之為自主型。第31頁(yè)/共272頁(yè)缺陷型：依賴性病毒屬屬于此類。這類病毒侵入寄主細(xì)胞后，即使寄主細(xì)胞處于S期也不能復(fù)制，因?yàn)樗鼈內(nèi)鄙倌撤N特異的酶，必須依靠另一種病毒，即輔助病毒（如腺病毒）來(lái)提供，因而成為缺陷型。第32頁(yè)/共272頁(yè)

現(xiàn)以小鼠細(xì)小病毒（Miceminutevirus,MMV）代表自主型，腺聯(lián)病毒2型（Adeno-associatedvirustype2,AAV2）代表缺陷型分述其復(fù)制過(guò)程。1、基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)MMV核酸為5084bp，AAV2核酸為4679bp，在所有細(xì)小病毒ssDNA的3’端或5’端都有多余100bp甚至300bp的核酸回文序列（palindromic），這些片段可以回折，與自身互補(bǔ)序列形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。MMV的5’端和3’端序列差異較大，而AAV2的5’端和3’端序列相互反向重復(fù)，可形成鍋柄樣結(jié)構(gòu)。MMV與AAV2都有兩個(gè)較大的閱讀框（ORF），每個(gè)ORF約占基因組的一半。左側(cè)ORF涉及調(diào)節(jié)功能，右側(cè)ORF涉及編碼結(jié)構(gòu)蛋白。第33頁(yè)/共272頁(yè)2、病毒的復(fù)制MMV基因組都含有兩個(gè)大的ORF:第一個(gè)從mp6-mp42（基因圖譜位置，mapposition,mp），為repORF，編碼兩個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2。第二個(gè)從mp45-mp90，為capORF，編碼外殼蛋白。MMV兩個(gè)ORF各有一個(gè)啟動(dòng)子，分別位于mp4和mp38，均含有TATA盒。在末端mp95-mp96位置為聚腺苷酸信號(hào)（AATAAA）。mp46-mp48是小的內(nèi)含子，mp8-mp38為大的內(nèi)含子。第34頁(yè)/共272頁(yè)ITR20406080ITR

repcapNS14.8kbNS23.3kbcap3.0kbP4P38圖8-7MMV基因組轉(zhuǎn)錄模式細(xì)線中的突出部分代表內(nèi)含子第35頁(yè)/共272頁(yè)

由P4啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄體分別編碼NS1和NS2，第三個(gè)轉(zhuǎn)錄體由P38啟動(dòng)編碼外殼蛋白。其中NS1和NS2首先合成，它們調(diào)控其他基因的表達(dá)。這兩種蛋白都是磷酸化的，NS1作為反式激活蛋白可激活P4和P38，其功能基團(tuán)位于C端的129為氨基酸殘基。有效的DNA復(fù)制和mRNA翻譯都需要NS2的參與。capORF編碼外殼蛋白Vp1和Vp2，蛋白酶降解Vp2產(chǎn)生主要外殼蛋白Vp3。第36頁(yè)/共272頁(yè)

AAV2基因組也含有兩個(gè)大的閱讀框，有三個(gè)啟動(dòng)子，分別位于mp5、mp19和mp40。轉(zhuǎn)錄出3個(gè)轉(zhuǎn)錄體，進(jìn)一步剪切，編碼4種非結(jié)構(gòu)蛋白和三種外殼蛋白。其中rep78和rep68為位點(diǎn)特異的核酸內(nèi)切酶，參與病毒基因組的復(fù)制及病毒基因組插入寄主細(xì)胞基因組的過(guò)程。rep52和rep40并非病毒基因組復(fù)制所必須，它們主要介導(dǎo)病毒顆粒的組裝。第37頁(yè)/共272頁(yè)

圖8-8AAV2基因組轉(zhuǎn)錄模式細(xì)線中的突出部分代表內(nèi)含子ITR20406080ITRrepcaprep78KD4.2kbrep68KD3.9kbcap3.6kbP5P40P19rep52KD3.3kbrep40KD2.3kb第38頁(yè)/共272頁(yè)

AAV2在寄主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制需要一些不相關(guān)的輔助病毒，如腺病毒、皰疹病毒等。以腺病毒為例，發(fā)現(xiàn)起輔助作用的腺病毒的早期功能蛋白。腺病毒蛋白E1A對(duì)AAV2基因表達(dá)起反式活化作用；35KDa的E4協(xié)同55KDa的E1B參與調(diào)控AAV2轉(zhuǎn)錄體的運(yùn)輸，E1B在AAV2DNA復(fù)制時(shí)也起重要作用；72KDa的E2A是ssDNA結(jié)合蛋白，可刺激AAV2啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄本向細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。第39頁(yè)/共272頁(yè)

MMV和AAV2均在寄主細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，并在細(xì)胞核內(nèi)組裝成病毒粒子。兩者復(fù)制過(guò)程基本類似，DNA復(fù)制時(shí)均不需要RNA引物，也不環(huán)化，由于3’端形成的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生了對(duì)DNA多聚酶作用必須的引物—OH。由于病毒基因組是單鏈，復(fù)制過(guò)程中存在RF。AAV2復(fù)制過(guò)程如下：其3’端ITR形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)為DNA的復(fù)制提供起始引物，復(fù)制沿著親本鏈一直延伸到5’端，完全復(fù)制親本鏈需要產(chǎn)生一個(gè)新的3’—OH，此時(shí)病毒編碼的點(diǎn)位點(diǎn)特異的核酸內(nèi)切酶Rep78和Rep68在箭頭所示處，即末端分解位（terminalresolutionsite）切開(kāi)親本鏈，由此處繼續(xù)延伸，合成復(fù)制中間體。此時(shí)親本鏈的3’端為新合成的鏈，這樣親本鏈的ITR與開(kāi)始不同，但互補(bǔ)。新合成的3’端又可以形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)引導(dǎo)新一輪的DNA復(fù)制，這樣可以產(chǎn)生一個(gè)新的基因組DNA和一個(gè)沒(méi)有復(fù)制完的含雙鏈信息的DNA，再經(jīng)過(guò)位點(diǎn)特異的核酸內(nèi)切酶作用，可繼續(xù)復(fù)制。第40頁(yè)/共272頁(yè)

三、AAV的潛伏感染

在沒(méi)有輔助病毒共同侵染的條件下，AAVDNA可以整合到寄主細(xì)胞染色體中，建立潛伏感染，以后又可被輔助病毒的侵染所活化，進(jìn)入復(fù)制循環(huán)。AAV的潛伏感染相當(dāng)普遍，在20%的非洲綠猴腎和1%-2%的人胚胎細(xì)胞中可檢測(cè)到。AAV2的ssDNA進(jìn)入寄主細(xì)胞后，必須復(fù)制成雙鏈形式才可以整合至染色體。這需要P5啟動(dòng)子啟動(dòng)少量的基因轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生rep78和rep68，它們一方面參與基因整合，另一方面也抑制了AAV2三個(gè)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。盡管整合沒(méi)有嚴(yán)格的特異性，但70%-100%的整合都發(fā)生在人染色體19q13.3-qter，且一般是幾個(gè)病毒基因組首尾相連。第41頁(yè)/共272頁(yè)第三節(jié)Ⅲ類病毒—呼腸孤病毒

呼腸孤病毒科，Reoviridae的命名，是由respiratoryentericorphanvirus各取其第一個(gè)字母而來(lái)。20世紀(jì)60年代初，曾從人和動(dòng)物的呼吸道或腸道中分離出這類病毒，當(dāng)時(shí)對(duì)它的致病作用不清楚，所以稱它為呼吸道(R)、腸道(E)，孤兒(O)病毒，簡(jiǎn)稱呼腸孤病毒。現(xiàn)在這一命名已失去其本來(lái)涵義，因?yàn)楹髞?lái)發(fā)現(xiàn)有些病毒雖與它有共同的基本特點(diǎn)，但與呼吸道或腸道無(wú)關(guān)。本科病毒分布極廣，包括能感染人、脊椎動(dòng)物、昆蟲(chóng)、植物、真菌的12個(gè)屬。其中能使人、畜致病的主要成員有：輪狀病毒、雞傳染性法氏囊病病毒、羊藍(lán)舌病病毒、非洲馬瘟病病毒等。第42頁(yè)/共272頁(yè)

一、生物學(xué)性狀本科病毒的病毒粒呈球形，大小在60～80nm之間，根據(jù)形態(tài)學(xué)分析它是一個(gè)二十面體的結(jié)構(gòu)，有多層衣殼，如人輪狀病毒有三層，都沒(méi)有囊膜。氯化銫中浮力密度為1.31～1.38g/mL；具有線性分節(jié)段的雙鏈RNA基因組，可分為10條、11條和12條，因?qū)俣?。dsRNA的正鏈5’端有“帽子”結(jié)構(gòu)，負(fù)鏈5’端為磷酸化結(jié)構(gòu)，其3’均沒(méi)有polyA結(jié)構(gòu)。病毒中含有依賴于RNA的多聚酶。第43頁(yè)/共272頁(yè)

利用血清學(xué)方法，輪狀病毒被分為7個(gè)不同的組A-G（Vp6），A、B、C三組常見(jiàn)于人和動(dòng)物，引起嬰幼兒腹瀉的為A組，感染青壯年的為B組，散發(fā)病例為C組，其中B組僅在中國(guó)引起爆發(fā)流行。D、E、F、G目前僅見(jiàn)于動(dòng)物。每組內(nèi)又有不同的血清型，針對(duì)外殼蛋白Vp7已鑒定出至少14種Vp7血清型。在同一組中，可發(fā)生基因重配，不同組之間不可能發(fā)生。輪狀病毒對(duì)理化因子的作用有較強(qiáng)的抵抗力。病毒經(jīng)乙醚、氯仿、反復(fù)凍融、超聲、37℃1小時(shí)或室溫（25℃）24小時(shí)等處理，仍具有感染性。該病毒耐酸、堿、在pH3.5～10.0之間都具有感染性。95%的乙醇是最有效的病毒滅活劑，56℃加熱30分鐘也可滅活病毒。第44頁(yè)/共272頁(yè)

1、病毒顆粒電鏡下可見(jiàn)到三種類型的輪狀病毒顆粒結(jié)構(gòu)。第一類為有感染性，具三層衣殼的病毒顆粒，含衣殼蛋白Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp6和Vp7；第二類為沒(méi)有外殼的雙層顆粒，直徑70nm，無(wú)感染性，表面粗糙，不含Vp4和Vp7；第三類僅有內(nèi)殼，直徑50-50.5nm，無(wú)感染性，含有Vp1、Vp2和Vp3。完整的病毒顆粒直徑約75nm，具有輻條狀結(jié)構(gòu)和一個(gè)非常清晰的平滑周邊，酷似車輪，輪狀病毒因此而得名。

Vp7是三聚體，構(gòu)成毒粒的外衣殼。Vp4是二聚體，形成長(zhǎng)20nm、末端為叉狀嘴唇形的突起，從中衣殼通過(guò)外衣殼的孔洞伸出粒子表面。Vp6三聚體構(gòu)成中衣殼，又與構(gòu)成內(nèi)衣殼的Vp2相互作用。第45頁(yè)/共272頁(yè)

核心中含有11條dsRNA，按分子量從大到小進(jìn)行排列，分別編碼12種蛋白質(zhì)，6種結(jié)構(gòu)蛋白和6種非結(jié)構(gòu)蛋白。去除蛋白質(zhì)的dsRNA無(wú)侵染性，在5’端和3’端都有一段非翻譯區(qū)，兩端都有呼腸孤病毒科病毒特有的保守序列。第46頁(yè)/共272頁(yè)第47頁(yè)/共272頁(yè)2、病毒編碼蛋白質(zhì)的特性及其功能基因片段蛋白產(chǎn)物分子量KDa顆粒中的位置修飾加工顆粒中的分子數(shù)功能1Vp1125內(nèi)衣殼RNA聚合酶2Vp294-102內(nèi)衣殼裂解120與RNA結(jié)合3Vp388內(nèi)衣殼鳥(niǎo)苷轉(zhuǎn)移酶4Vp4Vp5Vp8886028外衣殼Vp4裂解120（二聚體）血凝素、中和抗原、細(xì)胞附著、毒力、蛋白質(zhì)分解可強(qiáng)化侵染性、強(qiáng)化穿入細(xì)胞5NSP1(NS53)53非結(jié)構(gòu)蛋

白鋅指結(jié)構(gòu)、微堿性、結(jié)合RNA6Vp641中衣殼780（260殼粒）疏水性、三聚體、組抗原7NSP2(NS34)34非結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合RNA、微酸8NSP3(NS35)35非結(jié)構(gòu)蛋白堿性、與RNA結(jié)合9Vp738外衣殼有裂解信號(hào)序列、高甘露糖、糖基化780（260殼粒）三聚體、插入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、中和抗原、N端有兩個(gè)疏水區(qū)10NSP4(NS28)28-29非結(jié)構(gòu)蛋白無(wú)裂解信號(hào)序列、高甘露糖、糖基化插入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、N端有三個(gè)疏水區(qū)、病毒顆粒裝配中起作用11NSP5(NS26)26非結(jié)構(gòu)蛋白磷酸化O-連接糖基化微堿性、富含絲氨酸和蘇氨酸、結(jié)合RNA第48頁(yè)/共272頁(yè)

Vp4--第四條dsRNA編碼，組成外衣殼蛋白，非糖基化。其主要功能有：

①有凝集素活性；

②與寄主細(xì)胞受體結(jié)合；

③可裂解為分子量分別為60KDa的Vp5和28KDa的Vp8，強(qiáng)化病毒的侵染力；

④可誘導(dǎo)體內(nèi)中和抗體；

⑤在小鼠和小豬體內(nèi)，Vp4是病毒毒力的決定簇。動(dòng)物輪狀病毒的Vp4有776個(gè)氨基酸組成，而人類的為775個(gè)。建立了依賴Vp4的病毒血清型（P血清型），其型特異性位點(diǎn)位于第84-180位氨基酸之間。第49頁(yè)/共272頁(yè)

Vp6—主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，組成中衣殼，占病毒顆粒的51%，由第六條dsRNA編碼?？赏瑫r(shí)與外衣殼的Vp7、Vp4和內(nèi)衣殼的Vp2相互作用，因此，對(duì)維持顆粒形態(tài)起重要作用。Vp6為三聚體，非常穩(wěn)定，且大多數(shù)的輪狀病毒株系的Vp6有保守的抗原決定簇，是檢測(cè)的主要靶抗原。Vp6與病毒內(nèi)依賴RNA的聚合酶活性相關(guān)，但本身并不具備酶活性，除去Vp6則聚合酶失活。Vp6為疏水蛋白，有高度的免疫原性，但并不知道它是否象Vp4那樣可誘導(dǎo)體內(nèi)的保護(hù)免疫反應(yīng)。Vp6含有一個(gè)共同的（交叉反應(yīng)性的）表位，稱為組抗原（A-G），定位于第48-75位氨基酸之間。第50頁(yè)/共272頁(yè)

Vp7—外衣殼的主要構(gòu)成蛋白，占病毒顆粒的30%，富含N-連接甘露寡糖的糖蛋白，由第九條dsRNA編碼。Vp7有326個(gè)氨基酸，N端有可裂解的信號(hào)序列。正是這個(gè)信號(hào)序列引導(dǎo)Vp7插入細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。裂解點(diǎn)在N端第51位的Gln(谷氨酸)。插入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜靠?jī)蓚€(gè)疏水序列，分別位于51-61和61-110的氨基酸。Vp7一旦插入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，既被保護(hù)不受內(nèi)切酶降解，Vp7(glycoprotein)也是重要的中和作用抗原，并依此決定病毒的血清型（G1-G14血清型）。第51頁(yè)/共272頁(yè)

NSP4—成熟的、帶寡糖的糖基化的NSP4分子量為28KDa，N-連接甘露寡糖，第十條dsRNA編碼。在N端有三個(gè)疏水功能域，可以穿過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，N端保留在膜內(nèi)，而親水的C端伸到細(xì)胞質(zhì)中，是與亞病毒顆粒（Vp6）結(jié)合的受體，從而使亞病毒顆粒在裝配過(guò)程中能通過(guò)芽生進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，NSP4的受體結(jié)合位點(diǎn)在161-175位氨基酸之間。NSP4蛋白是一個(gè)十分保守的蛋白，比較不同來(lái)源輪狀病毒毒株的NSP4，發(fā)現(xiàn)它們的同源性在87.3%-96.6%。第52頁(yè)/共272頁(yè)

二、病毒的復(fù)制有關(guān)輪狀病毒復(fù)制的研究主要在猴腎傳代細(xì)胞中進(jìn)行，病毒的復(fù)制過(guò)程全部在包漿內(nèi)進(jìn)行。

病毒通過(guò)與細(xì)胞表面特異的受體結(jié)合（可能存在兩種不同的受體），再以胞飲或直接的方式進(jìn)入細(xì)胞，在溶酶體內(nèi)完成外衣殼的降解，形成亞病毒顆粒，具有中層和內(nèi)層，此時(shí)既開(kāi)始轉(zhuǎn)錄。

第53頁(yè)/共272頁(yè)在細(xì)胞質(zhì)液體中解開(kāi)dsRNA很困難，而亞病毒顆粒內(nèi)并非液體，dsRNA很容易解開(kāi)，轉(zhuǎn)錄的mRNA通過(guò)雙層衣殼上的小孔進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。第54頁(yè)/共272頁(yè)

病毒轉(zhuǎn)錄子的合成是在一種病毒攜帶的依賴RNA的RNA多聚酶催化下進(jìn)行，轉(zhuǎn)錄為非對(duì)稱，所有的轉(zhuǎn)錄子都是從負(fù)鏈脫下的全長(zhǎng)正鏈RNA。該正鏈RNA一方面作為蛋白翻譯的模板，另一方面也是合成子代負(fù)鏈RNA的模板。負(fù)鏈RNA的合成也是在亞病毒顆粒中進(jìn)行，細(xì)胞中沒(méi)有游離的病毒dsRNA存在。這些亞病毒顆粒在細(xì)胞內(nèi)或無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)中均是雙鏈RNA的合成產(chǎn)所，是由Vp1和Vp2、以及少量的Vp6、大量的非結(jié)構(gòu)蛋白NSP3和較小量的NSP1和NSP2等蛋白質(zhì)組成的復(fù)制酶的復(fù)合物。第55頁(yè)/共272頁(yè)第56頁(yè)/共272頁(yè)

大部分的輪狀病毒蛋白是在游離的核糖體上合成，而Vp7

和Vp4是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體合成，合成后嵌入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。輪狀病毒形態(tài)發(fā)生過(guò)程中最顯著的特征是在細(xì)胞漿病毒質(zhì)中裝配的亞病毒顆粒（含兩層衣殼）向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜芽生，在成熟過(guò)程中，病毒顆粒獲得一過(guò)性的包膜。當(dāng)病毒向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)部移動(dòng)時(shí)，輪狀病毒失去這種一過(guò)性獲得的包膜，取而代之的是一層薄的蛋白層，這層蛋白層最后組裝成病毒顆粒的外衣殼，含Vp7

和Vp4。第57頁(yè)/共272頁(yè)三、對(duì)宿主防衛(wèi)的逃逸1、這種“躲在衣殼中復(fù)制”的方法幫組輪狀病毒逃避宿主細(xì)胞的干擾素防疫系統(tǒng)，為病毒的繁殖和傳播贏得時(shí)間。2、輪狀病毒復(fù)制快，“打了就跑”，在獲得性免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用前，大量病毒已通過(guò)糞便排除。3、輪狀病毒感染后通常不會(huì)對(duì)后續(xù)感染產(chǎn)生完全的免疫力，免疫系統(tǒng)僅僅對(duì)輪狀病毒“掃了一眼”。即便有記憶力，輪狀病毒可通過(guò)無(wú)癥狀患者糞便排除，擴(kuò)大感染。第58頁(yè)/共272頁(yè)四、致病性與免疫性人類輪狀病毒感染常見(jiàn)于6個(gè)月～2歲的嬰幼兒，主要在冬季流行，一般通過(guò)糞-口途徑傳播。病毒侵犯小腸細(xì)胞的絨毛，潛伏期2～4天。病毒在胞漿內(nèi)增殖，受損細(xì)胞可脫落至腸腔而釋放大量病毒，并隨糞便排出。病人最主要的癥狀是腹瀉，其原因可能是病毒增殖影響了細(xì)胞的搬運(yùn)功能，妨礙鈉和葡萄糖的吸收，也可以是刺激了小腸內(nèi)的腸道神經(jīng)系統(tǒng)受體。嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致脫水和電解質(zhì)平衡紊亂，如不及時(shí)治療，可能危及生命。感染后血液中很快出現(xiàn)特異性lgM、lgG抗體，腸道局部出現(xiàn)分泌型lgA，可中和病毒，對(duì)同型病毒感染有作用。一般病例病程3～5天，可完全恢復(fù)。隱性感染產(chǎn)生特異性抗體。第59頁(yè)/共272頁(yè)

五、微生物學(xué)診斷傳統(tǒng)的方法是對(duì)腹瀉糞便液直接作電鏡或免疫電鏡檢查，但耗時(shí)較長(zhǎng)，且由于設(shè)備上的限制，較難普遍應(yīng)用。世界衛(wèi)生組織已將ELISA雙抗體夾心法（檢測(cè)病毒抗）列為診斷輪狀病毒感染的標(biāo)準(zhǔn)方法，目前國(guó)內(nèi)外均有相應(yīng)試劑盒出售。此外核酸電泳和核酸雜交已漸成常規(guī)技術(shù)，在診斷、鑒別診斷及分子流行病學(xué)研究中發(fā)揮重要作用。第60頁(yè)/共272頁(yè)

六、防治原則重視飲用水衛(wèi)生，并注意防止醫(yī)源性傳播，醫(yī)院內(nèi)應(yīng)嚴(yán)格做好嬰兒病區(qū)及產(chǎn)房的嬰兒室消毒工作。目前尚無(wú)特異有效治療藥物，主要是補(bǔ)液，維持機(jī)體電解質(zhì)平衡。國(guó)外曾有報(bào)道輪狀病毒活疫苗可使兒童獲得保護(hù)，國(guó)內(nèi)活疫苗正在研制之中。第61頁(yè)/共272頁(yè)第四節(jié)Ⅳ類病毒—冠狀病毒

冠狀病毒科（Coronaviridae）包括：冠狀病毒屬（Coronavirus）和環(huán)形病毒屬（Torovirus）。

冠狀病毒屬依據(jù)其基因組和抗原性的特點(diǎn)，分為三組：第1組和第2組為哺乳動(dòng)物的病毒，第3組為鳥(niǎo)的病毒。冠狀病毒科成員具有囊膜，大多數(shù)病毒的宿主范圍較窄，只能感染一種或幾種親緣關(guān)系較近的動(dòng)物細(xì)胞，冠狀病毒的宿主范圍與病毒特異的細(xì)胞受體有關(guān)。第62頁(yè)/共272頁(yè)

SARS（SevereAcuteRespiratorySyndrome，SARS）又稱嚴(yán)重急性呼吸綜合癥，是一種新的威脅人類健康的呼吸系統(tǒng)烈性傳染病，2002年11月在中國(guó)廣東發(fā)現(xiàn)首例SARS病人，此后疫情蔓延30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，有8000多人感染，800多人死亡，引起全球關(guān)注。世界衛(wèi)生組織(WHO)確認(rèn)引起該病的是嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus，SARSCoV，SCoV)，冠狀病毒屬的一個(gè)新成員，是第一個(gè)可以引起人類嚴(yán)重疾病的冠狀病毒。第63頁(yè)/共272頁(yè)一、生物學(xué)性狀

成熟的冠狀病毒顆粒直徑60-220nm不等，其形態(tài)學(xué)上最顯著的特征是病毒被膜處有明顯的棒狀膜外粒子，酷似中世紀(jì)歐洲帝王的王冠。病毒粒子中不包含RNA聚合酶，但存在少量蛋白激酶，這種蛋白激酶究竟是由病毒還是宿主編碼，目前尚不清楚。第64頁(yè)/共272頁(yè)

病毒有囊膜，膜上有三種結(jié)構(gòu)糖蛋白：刺突蛋白S（spikeglycoprotein）；膜蛋白M（membraneglyprotein）；小分子外膜蛋白E（smallenvelopeglycoprotein）。在部分病毒囊膜上還能找到血凝素酯酶HE（hemagglutininacetylesteraseglycoprotein）。

第65頁(yè)/共272頁(yè)

核酸為無(wú)節(jié)段（+）ssRNA，長(zhǎng)約27～31kb，在所有的RNA病毒中，冠狀病毒的基因組最大。為多順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)，其基因組5’端有帽子結(jié)構(gòu)，3’端有poly(A)尾，可以作為翻譯模板，具傳染性。緊接帽子結(jié)構(gòu)之后是60-80個(gè)堿基的先導(dǎo)RNA序列和200-500個(gè)堿基的非編碼區(qū)。病毒基因組包含6-12個(gè)ORFs，在各個(gè)ORF之間有基因重疊區(qū)或基因間隔序列(intergenicsequence)。

冠狀病毒的復(fù)制酶（依賴RNA的RNA聚合酶，解旋酶，蛋白酶）由基因組5’端的占2/3-3/4的兩個(gè)大閱讀框（ORF1a和1b）（即基因1）編碼。通過(guò)核糖體翻譯移框的機(jī)制，產(chǎn)生兩個(gè)多肽前體：pp1ab和pp1a。其它結(jié)構(gòu)蛋白主要位于基因組3’端。第66頁(yè)/共272頁(yè)

在所有冠狀病毒基因組中，聚合酶基因和3種結(jié)構(gòu)蛋白基因的排列次序均相同，即5’-Pol-S-M-N-3’，其他非結(jié)構(gòu)蛋白的排列次序依不同的冠狀病毒種類而有明顯的差異。第67頁(yè)/共272頁(yè)

冠狀病毒轉(zhuǎn)錄的亞基因組mRNA間具有套式（nested）的結(jié)構(gòu)特征和一段共同的3’端列。除最小的亞基因組mRNA外，其余mRNA均含有兩部分內(nèi)容，即自身基因和3’下游其它蛋白基因，但僅翻譯自身蛋白基因。這些亞基因組mRNA的5’端均帶有一段來(lái)自于基因組5’最前端的保守引導(dǎo)序列，該引導(dǎo)序列對(duì)病毒基因的表達(dá)有很強(qiáng)的順式作用。在SARS-CoV中，每個(gè)基因之間均有一段轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（TRS）：5’-UCUAAAC-3’。通過(guò)該段序列與轉(zhuǎn)錄酶和細(xì)胞因子的相互作用，將一段72nt的基因組5’最前端的保守引導(dǎo)序列與每個(gè)ORF相連。第68頁(yè)/共272頁(yè)第69頁(yè)/共272頁(yè)

結(jié)構(gòu)蛋白中，S蛋白為伸出被膜外的棒球形糖蛋白，在病毒表面以三聚體形式存在。其主要功能為：

①結(jié)合細(xì)胞受體；

②觸發(fā)病毒被膜與細(xì)胞質(zhì)膜或內(nèi)吞體膜融合；

③可誘導(dǎo)細(xì)胞間的融合；

④誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。

第70頁(yè)/共272頁(yè)M蛋白主要負(fù)責(zé)病毒顆粒的組裝，功能為：

①?zèng)Q定病毒的形態(tài)發(fā)生；

②病毒裝配時(shí)選擇S蛋白；

③結(jié)合N（核衣殼磷蛋白）蛋白；

④病毒裝配時(shí)專一地選擇病毒基因組RNA。

第71頁(yè)/共272頁(yè)

E蛋白也是病毒表面的一種糖蛋白，數(shù)量相對(duì)較少，它與M蛋白相互作用，決定病毒粒子的出芽位點(diǎn)。

HE僅存在與少數(shù)冠狀病毒表面，以二硫鍵連接的同源二聚體形式存在，可能與病毒引起的病理相關(guān)。

N蛋白（核衣殼磷蛋白）位于囊膜內(nèi)，與RNA結(jié)合形成核衣殼，其功能為：

①包裹基因組RNA形成螺旋對(duì)稱的核衣殼；

②在裝配過(guò)程中結(jié)合M蛋白；

③病毒mRNA翻譯的增強(qiáng)子。第72頁(yè)/共272頁(yè)

三種非結(jié)構(gòu)蛋白為病毒復(fù)制所必需：1、依賴RNA的RNA聚合酶（RDRP）功能為：

①轉(zhuǎn)錄病毒負(fù)鏈基因組RNA；②轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)蛋白mRNA；③復(fù)制病毒基因組RNA。2、解旋酶打開(kāi)RNA的雙螺旋。3、3CLpro蛋白酶負(fù)責(zé)上述兩種酶的加工成熟。第73頁(yè)/共272頁(yè)

SARS冠狀病毒基因組全長(zhǎng)29.7kb，有14個(gè)開(kāi)放閱讀框架，缺乏HE蛋白。其基因組的2/3區(qū)域編碼病毒復(fù)制相關(guān)酶（5’端），1/3區(qū)域依次編碼S蛋白、E蛋白、M蛋白和N蛋白等4個(gè)病毒結(jié)構(gòu)蛋白（3’端），及包含5-9個(gè)在已有蛋白數(shù)據(jù)序列庫(kù)中找不到任何同源序列的未知蛋白的ORF。第74頁(yè)/共272頁(yè)

SARS-CoV比其他冠狀病毒更穩(wěn)定。在室溫下，可在糞便和尿液中穩(wěn)定存在1-2天，在腹瀉病人的大便中（pH較高）可存活4天以上。然而，56℃加熱90min或75℃加熱30min就能滅活SARS-CoV，應(yīng)用含氯消毒劑和過(guò)氧乙酸，按衛(wèi)生部推薦的濃度，在幾分鐘內(nèi)完全可以殺滅糞便和尿液中的SARS-CoV，紫外線也可以殺滅SARS-CoV。第75頁(yè)/共272頁(yè)二、病毒的復(fù)制

冠狀病毒的整個(gè)復(fù)制周期在寄主細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行。①入侵：首先病毒表面的S蛋白與寄主細(xì)胞表面專一的受體結(jié)合，然后通過(guò)兩種途徑進(jìn)入細(xì)胞，一種是受體介導(dǎo)的內(nèi)吞，另一種為病毒與寄主細(xì)胞的質(zhì)膜融合。SARSCoV的受體有兩種，ACE2蛋白與血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶（angiotensin-convertingenzyme，ACE）同源，為SARS冠狀病毒的受體。氨基肽酶N(aminopeptidaseN,APN)也是SARSCoV的受體之一。第76頁(yè)/共272頁(yè)②冠狀病毒成熟的顆粒中并不存在RNA病毒復(fù)制所必須的RNA聚合酶，因此，它進(jìn)入寄主細(xì)胞以后，首先以病毒基因組RNA為模板，利用寄主細(xì)胞的蛋白質(zhì)翻譯系統(tǒng)，表達(dá)病毒RNA聚合酶。然后利用該酶，完成負(fù)鏈基因組RNA的轉(zhuǎn)錄合成、各級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白mRNA的合成、以及病毒基因組RNA的復(fù)制。

③冠狀病毒各個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的成熟mRNA的合成，不存在轉(zhuǎn)錄后的修飾剪切過(guò)程，而是直接通過(guò)RNA聚合酶和一些轉(zhuǎn)錄因子，以一種“不連續(xù)轉(zhuǎn)錄”（discontinuoustranscription）的機(jī)制，通過(guò)識(shí)別特定的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（transcriptionregulatingsequences,TRS），有選擇性的從負(fù)義鏈RNA上，一次性轉(zhuǎn)錄得到構(gòu)成一個(gè)成熟mRNA的全部組成部分。第77頁(yè)/共272頁(yè)

④冠狀病毒的顆粒組裝發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的區(qū)域。組裝時(shí)，N蛋白包裹基因組RNA形成螺旋型的核衣殼，然后M蛋白通過(guò)與N蛋白的結(jié)合并識(shí)別基因組上的包裝信號(hào)序列啟動(dòng)病毒囊膜的組裝，E蛋白和S蛋白則通過(guò)與M蛋白的相互作用整合入病毒顆粒。在高爾基體內(nèi)加工形成包內(nèi)體樣結(jié)構(gòu)，以胞吐方式釋放到細(xì)胞外，感染新的寄主。第78頁(yè)/共272頁(yè)

冠狀病毒的復(fù)制和成熟第79頁(yè)/共272頁(yè)三、SARS-CoV致病性與免疫性

SARS-CoV可感染多個(gè)組織器官，包括：肺、脾、腸道、氣管、淋巴結(jié)、腎等，特別是肺部，并造成損傷。引發(fā)肺部損傷機(jī)制為過(guò)強(qiáng)的自身免疫反應(yīng)，大規(guī)模免疫細(xì)胞的激活，會(huì)破壞正常的細(xì)胞和組織。SARS患者出現(xiàn)發(fā)燒、咳嗽及快速進(jìn)展的呼吸系統(tǒng)衰竭，同時(shí)伴隨寒顫、肌肉疼痛、淋巴細(xì)胞減少等癥狀，嚴(yán)重時(shí)，患者死亡。同時(shí)，患者體內(nèi)產(chǎn)生SARS-CoV專一性的抗體，一般7天后出現(xiàn)IgM，10天達(dá)到高峰，15天左右下降；IgG在10天后產(chǎn)生，20天左右達(dá)到高峰。SARS-CoV的潛伏期平均為6.4天。SARS-CoV主要以近距離飛沫傳播為主，同時(shí)可通過(guò)手接觸呼吸道分泌物經(jīng)口、鼻、眼傳播。也可能存在糞—口傳播等其它傳播途徑的可能性。該病毒對(duì)溫度很敏感，在33℃時(shí)生長(zhǎng)良好，但35℃就使之受到抑制。由于這個(gè)特性，冬季和早春是該病毒疾病的流行季節(jié)。第80頁(yè)/共272頁(yè)四、微生物學(xué)診斷

目前SARS-CoV的診斷方法主要有4類：臨床表現(xiàn)及排除性診斷、影像學(xué)診斷、血清學(xué)抗體診斷和病毒學(xué)診斷。ELISA診斷中，主要應(yīng)用針對(duì)SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的特異性多抗或單抗，特別是針對(duì)S蛋白的特異性抗體，在發(fā)病早期進(jìn)行診斷。通過(guò)電鏡觀察和RT-PCR技術(shù)也能對(duì)病毒進(jìn)行鑒定。第81頁(yè)/共272頁(yè)五、防治原則病毒對(duì)熱敏感，紫外線、來(lái)蘇水及0.1%過(guò)氧乙酸等都可在短時(shí)間內(nèi)將病毒殺死。目前，冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。冠狀病毒可以發(fā)生重復(fù)感染，表明其存在有多種血清型（至少有4種已知）并有抗原的變異，其免疫較困難，目前尚無(wú)特異的預(yù)防和治療藥物。可以通過(guò)非特異性預(yù)防措施（即預(yù)防春季呼吸道傳染疾病的措施，如保暖、洗手、通風(fēng)、勿過(guò)度疲勞及勿接觸病人，少去人多的公共場(chǎng)所，及時(shí)隔離病人等）進(jìn)行預(yù)防。第82頁(yè)/共272頁(yè)

六、細(xì)胞培養(yǎng)及動(dòng)物模型病毒分離是診斷病毒感染的重要方法?？梢酝ㄟ^(guò)細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)來(lái)自SARS病例樣本(如呼吸道分泌物、血液或糞便)中的病毒進(jìn)行分離。與其它冠狀病毒相比，SARS-CoV的分離相對(duì)容易。目前發(fā)現(xiàn)，SARS-CoV可在非洲綠猴腎傳代細(xì)胞(VeroE6)、人宮頸癌傳代細(xì)胞(Hela)、狗腎傳代細(xì)胞(MDCK)、腫瘤橫紋肌傳代細(xì)胞(RD)、人胚肺傳代細(xì)胞(2BS)、人胚腎傳代細(xì)胞(HEK293)等多種組織細(xì)胞中增殖并引起細(xì)胞病變，但以VeroE6細(xì)胞最為敏感。細(xì)胞培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果是人體內(nèi)存在SARS-CoV的可靠證據(jù)，說(shuō)明患者現(xiàn)在或最近受到SARS-CoV的感染。第83頁(yè)/共272頁(yè)

目前SARS的研究主要集中在致病機(jī)制、抗SARS疫苗和藥物的制備方面，這些研究的基礎(chǔ)有賴于SARS動(dòng)物模型的發(fā)展，SARS動(dòng)物模型應(yīng)該符合以下標(biāo)準(zhǔn)：被SARS-CoV感染的動(dòng)物表現(xiàn)出類似SARS患者的癥狀和體征;從實(shí)驗(yàn)感染的動(dòng)物體內(nèi)可分離到病毒；動(dòng)物體內(nèi)存在針對(duì)病毒感染的特異的免疫反應(yīng)；活檢和尸檢顯示出動(dòng)物具有SARS患者一樣的病理特征。至今，SARS動(dòng)物模型包括非人靈長(zhǎng)類、雪貂、貓、鼠等，然而這些動(dòng)物很少能夠模擬出可靠的SARS患者的呼吸癥狀。他們大多數(shù)只符合上述一部分條件。第84頁(yè)/共272頁(yè)七、SARS-CoV的疫苗研制1、正在研制的疫苗：⑴治療性疫苗（抗體）⑵滅活病毒疫苗⑶病毒樣顆粒（VLP）疫苗⑷核酸疫苗（基于S蛋白和N蛋白）⑸多表位疫苗2、存在問(wèn)題：⑴RNA病毒多變對(duì)疫苗研發(fā)的挑戰(zhàn)⑵動(dòng)物模型問(wèn)題第85頁(yè)/共272頁(yè)⑶抗體依賴性感染增強(qiáng)（antibody-dependentenhancement,ADE）的問(wèn)題一般來(lái)說(shuō)，機(jī)體產(chǎn)生的病毒抗體或者對(duì)病毒有中和或抵抗作用，或者是一些無(wú)中和作用的抗體，但近年來(lái)相繼在人免疫缺陷病毒（HIV）、流感病毒（IV）、貓感染性腹膜炎病毒（FIPV）、登革病毒（DV）等病毒中發(fā)現(xiàn)了一種現(xiàn)象，這些病毒的抗體滴度在低水平或高水平時(shí)對(duì)病毒存在中和作用，而在中度水平或亞中和滴度水平時(shí)（稱為感染增強(qiáng)抗體）與病毒形成病毒-抗體復(fù)合物，能明顯增強(qiáng)Fc受體（FcR）或補(bǔ)體受體（CR）陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)該種病毒感染，從而引起疾病，這種現(xiàn)象稱為抗體依賴的病毒感染增強(qiáng)作用（ADE）。其中貓感染性腹膜炎病毒（FIPV）為貓冠狀病毒，推測(cè)SARS-CoV疫苗可能存在ADE現(xiàn)象，所以在未闡明SARS致病機(jī)制特別是SARS-CoV是否存在ADE作用的情況下，研究者應(yīng)重視ADE現(xiàn)象。第86頁(yè)/共272頁(yè)八、SARS-CoV的來(lái)源

1、SARS-CoV的進(jìn)化地位第87頁(yè)/共272頁(yè)

可以看出，SARS病毒明顯不同于同其他三個(gè)冠狀病毒群，可能歸屬于新的冠狀病毒群。和其他人類及動(dòng)物冠狀病毒相比，核酸序列相似性分?jǐn)?shù)是0.56-0.63，氨基酸序列的相似性分?jǐn)?shù)是0.57-0.74。但是，根據(jù)最新的國(guó)際病毒分類委員會(huì)（ICTV）第8次報(bào)告，SARS病毒仍歸屬于以牛冠狀病毒為代表的第二組。第88頁(yè)/共272頁(yè)

2、SARS-CoV的自然宿主

SARS病原是一個(gè)新型冠狀病毒，即SARS冠狀病毒(SARS-CoV)，來(lái)源于野生動(dòng)物，經(jīng)進(jìn)化和變異實(shí)現(xiàn)跨種傳播，導(dǎo)致人類SARS的暴發(fā)和流行。因此，是一新型人獸共患病毒。是繼亨德拉病毒、尼帕病毒之后十年內(nèi)人類出現(xiàn)的第三種以前從未認(rèn)識(shí)的全新病毒。1994年，澳大利亞的賽馬發(fā)生亨德拉病毒感染，推測(cè)是由于馬采食了帶毒蝙蝠污染的牧草或是采食了蝙蝠吃剩的果實(shí)而感染發(fā)病。1998年馬來(lái)西亞爆發(fā)尼帕病毒，也估計(jì)是由于豬吃食了帶毒蝙蝠污染的果實(shí)，并通過(guò)豬傳染給人類。第89頁(yè)/共272頁(yè)

多個(gè)研究小組分別從基因檢測(cè)、血清學(xué)和核酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析等不同方面證實(shí)不同地域、不同的蝙蝠群落廣泛攜帶有SARS樣冠狀病毒。證實(shí)人源、果子貍源和蝙蝠源SARS-CoV共同屬于SARS族冠狀病毒，雖然尚未從蝙蝠分離獲得病毒并進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)證明其致病性，但是現(xiàn)有研究均表明蝙蝠極有可能是SARS冠狀病毒的自然宿主。第90頁(yè)/共272頁(yè)

3、關(guān)于SARS-CoV傳播的中間宿主SARS起源的“市場(chǎng)傳播來(lái)源”假設(shè)，推測(cè)果子貍可能是在市場(chǎng)或運(yùn)輸過(guò)程中從真正的自然感染宿主、帶毒動(dòng)物或污染的環(huán)境感染了SARS-CoV，SARS-CoV在果子貍體內(nèi)繁殖放大后散播到外界環(huán)境或在與人密切接觸時(shí)將足夠量的病毒傳播到人，引起人的發(fā)病。果子貍在SARS-CoV的傳播中扮演了中間放大宿主的重要角色。第91頁(yè)/共272頁(yè)

4、SARS-CoV實(shí)現(xiàn)動(dòng)物到人跨種傳播的分子進(jìn)化基礎(chǔ)SARS病毒S蛋白與宿主細(xì)胞的功能受體ACE2(An-giotensin-convertingenzyme2)結(jié)合、進(jìn)而與細(xì)胞膜融合進(jìn)入細(xì)胞實(shí)現(xiàn)對(duì)宿主細(xì)胞的感染。分子進(jìn)化分析顯示SARS-CoV從果子貍到人的傳播過(guò)程中，S基因始終經(jīng)歷著強(qiáng)陽(yáng)性選擇，并不斷提高對(duì)新宿主的適應(yīng)能力。因此SARS病毒S蛋白發(fā)生進(jìn)化和變異以適應(yīng)新的宿主細(xì)胞是實(shí)現(xiàn)其跨種傳播以及人與人之間傳播的首要物質(zhì)基礎(chǔ)。第92頁(yè)/共272頁(yè)迄今為止，雖然已證實(shí)蝙蝠是SARS-CoV的自然宿主和果子貍在SARS傳播中的中間宿主作用，但仍未發(fā)現(xiàn)蝙蝠傳播SARS-CoV的直接證據(jù)。SARS-CoV由蝙蝠到果子貍是直接傳播還是間接傳播，還需要進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。另外，在SARS-CoV的起源和發(fā)生過(guò)程中是否存在果子貍以外的其它中間宿主動(dòng)物尚待進(jìn)一步研究。第93頁(yè)/共272頁(yè)九、非典后遺癥與國(guó)家賠償

據(jù)衛(wèi)生部公布的數(shù)據(jù)，中國(guó)共有5327人被感染上非典病毒。2003年，中央財(cái)政支出了13億多元的SARS防治基金，各地累計(jì)投人100億元。非典給中國(guó)造成了一次重大損失。其中有一個(gè)后果是，不少人雖然經(jīng)過(guò)治療，但是出現(xiàn)了后遺癥。早在2003年10月，廣州、北京等地非典治愈者就發(fā)現(xiàn)患有非典后遺癥，典型的表現(xiàn)在生理上表現(xiàn)為股骨頭壞死，也有踝、膝等關(guān)節(jié)壞死。2005年5月，北京、香港SARS康復(fù)者陸續(xù)出現(xiàn)骨壞死后遺癥。第94頁(yè)/共272頁(yè)

2004年《南方周末》刊登了《關(guān)注:SARS六護(hù)士的苦難生存現(xiàn)狀》，其中提到了張麗娟、李敏、宋冰、張春陽(yáng)、于立萍、劉波這六位長(zhǎng)春醫(yī)護(hù)人員因后遺癥生存的心里和生理痛苦。對(duì)此，有些病人，尤其是為了治療SARS而得病甚至死亡的醫(yī)護(hù)人員提出了通過(guò)“國(guó)家賠償”加以彌補(bǔ)的措施。比如我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)就有一例：

2003年間SARS肆虐，臺(tái)灣和平醫(yī)院醫(yī)師林重威為救治病患，感染SARS不治，他的父母訴請(qǐng)“國(guó)家賠償”。臺(tái)“最高法院”18日判決臺(tái)北市立聯(lián)合醫(yī)院應(yīng)負(fù)賠償責(zé)任，應(yīng)給付林重威的父母共748萬(wàn)1621元(新臺(tái)幣，150萬(wàn)人民幣)，并自2003年12月21日起至清償之日止，按年息5%計(jì)算遲延利息認(rèn)定。本案是因SARS死亡獲“國(guó)賠”的首宗案例?！钡?5頁(yè)/共272頁(yè)第96頁(yè)/共272頁(yè)

中國(guó)工程院院士鐘南山是第一個(gè)提出在搶救SARS病人時(shí)采用皮質(zhì)激素治療的權(quán)威專家，此治療方案成功救治了很多SARS病人。他們對(duì)38例使用皮質(zhì)激素的SARS病人進(jìn)行了回顧性調(diào)查，發(fā)現(xiàn)有效的比例達(dá)53%。而這38例如果當(dāng)時(shí)不采用激素療法會(huì)全部死亡。其實(shí)目前學(xué)術(shù)界對(duì)到底是大劑量使用皮質(zhì)激素造成骨壞死，還是SARS病毒造成骨壞死目前尚存在爭(zhēng)論。所以醫(yī)師使用激素造成骨壞死并沒(méi)有確定的依據(jù)，在這一點(diǎn)上，醫(yī)生不存在任何診療責(zé)任。第97頁(yè)/共272頁(yè)

皮質(zhì)激素雖然具有肯定的解熱鎮(zhèn)痛療效，但它又有過(guò)多的嚴(yán)重不良反應(yīng)：類皮質(zhì)功能亢進(jìn)；類固醇性糖尿?。患∥s和骨質(zhì)疏松；誘發(fā)和加重感染；誘發(fā)和加重潰瘍；誘發(fā)精神癥狀；并發(fā)眼??；致畸胎；不恰當(dāng)?shù)赝Ｋ庍€可能出現(xiàn)皮質(zhì)功能不足、激素停藥綜合證和癥狀反跳等弊病。第98頁(yè)/共272頁(yè)

對(duì)于一般患者進(jìn)行激素療法，造成后遺癥，患者是無(wú)從根據(jù)提出任何賠償?shù)?，包括民事賠償。

對(duì)于誤診病人？？？？對(duì)于受醫(yī)院指派而去救助SARS病人自己也被感染上而產(chǎn)生后遺癥的。那么可對(duì)其進(jìn)行的措施有:

如果操作規(guī)程正確，那么屬于勞動(dòng)工傷事故。看《工傷保險(xiǎn)條例》中有關(guān)工傷的認(rèn)定，可知到這屬于工傷，依照法律可享受醫(yī)院工傷保險(xiǎn)。第99頁(yè)/共272頁(yè)如果操作規(guī)程不正確，那么依照勞動(dòng)法:

第七十三條勞動(dòng)者在下列情形下，依法享受社會(huì)保險(xiǎn)待遇：退休；患病、負(fù)傷；因工傷殘或者患職業(yè)?。皇I(yè)；生育。勞動(dòng)者死亡后，其遺屬依法享受遺屬津貼。勞動(dòng)者享受社會(huì)保險(xiǎn)待遇的條件和標(biāo)準(zhǔn)由法律、法規(guī)規(guī)定。勞動(dòng)者享受的社會(huì)保險(xiǎn)金必須按時(shí)足額支付。第五十六條勞動(dòng)者在勞動(dòng)過(guò)程中必須嚴(yán)格遵守安全操作規(guī)程。勞動(dòng)者對(duì)用人單位管理人員違章指揮、強(qiáng)令冒險(xiǎn)作業(yè)，有權(quán)拒絕執(zhí)行；對(duì)危害生命安全和身體健康的行為，有權(quán)提出批評(píng)、檢舉和控告。所以工傷賠償主要是工傷保險(xiǎn)賠償。如果單位存在侵權(quán)行為，那么還可以用民事侵權(quán)法來(lái)處理。第100頁(yè)/共272頁(yè)

《北京市關(guān)于非典出院人員社區(qū)健康管理工作實(shí)施方案》

本市從2004年6月開(kāi)始至2008年，用5年時(shí)間了解全市非典出院人員生存質(zhì)量、社會(huì)功能和心理問(wèn)題，初步掌握他們的社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)需求，為他們提供連續(xù)性、個(gè)體化的醫(yī)療服務(wù)。具體工作將分兩個(gè)階段實(shí)施：第一階段，2004年6－7月，先行在西城區(qū)、海淀區(qū)開(kāi)展試點(diǎn)；第二階段從2004年7月－2008年6月，在全市實(shí)施非典出院人員社區(qū)健康管理。今后每年6－7月，為全市非典出院人員進(jìn)行社區(qū)健康狀況調(diào)查。

第101頁(yè)/共272頁(yè)感染原因：搶救華北第一例輸入性非典患者時(shí)感染，已是74歲高齡的他，是中國(guó)抗非第一線年齡最大的醫(yī)生；而后冒著生命危險(xiǎn)用自己的身體進(jìn)行血清治療SARS試驗(yàn)，成功康復(fù)?，F(xiàn)狀：無(wú)任何后遺癥?，F(xiàn)已退休在家。第102頁(yè)/共272頁(yè)

血清試驗(yàn)成功，引起了海內(nèi)外的關(guān)注。許多醫(yī)學(xué)專家都認(rèn)為這是目前人類抗擊“非典”過(guò)程中的一個(gè)有效方法?？墒?，讓姜素椿遺憾的是，血清療法并沒(méi)有在國(guó)內(nèi)推廣，“后來(lái)衛(wèi)生部開(kāi)會(huì)，我第一個(gè)發(fā)言，毫不客氣‘怕什么呢？不就是輸血嗎？外科手術(shù)要不要輸血？艾滋病什么的可以查呀！’”最后得到多數(shù)與會(huì)討論專家的認(rèn)可。不久，香港開(kāi)始了這種治療試驗(yàn)。2003年5月7日，香港媒體披露，香港中文大學(xué)醫(yī)學(xué)院推出血清療法，40例兩組對(duì)照，經(jīng)過(guò)一個(gè)月臨床實(shí)踐，輸入血清的20例不僅實(shí)現(xiàn)了零死亡，病程還縮短一半。第103頁(yè)/共272頁(yè)第五節(jié)Ⅴ類病毒—流感病毒

流感病毒(influenzavirus)屬正黏病毒科(Orthomyxoviridae)，該科分為甲型流感病毒屬（InfluenzavirusA）、乙型流感病毒屬（InfluenzavirusB）、丙型流感病毒屬（InfluenzavirusC）、托高土病毒屬（Thogotovirus）和鮭傳貧病毒屬（Isavirus）等。正黏病毒科和副黏病毒科的病毒有許多相似的特征：均含有神經(jīng)氨酸酶(NA)和血凝素（HA），可凝集某些動(dòng)物的紅細(xì)胞，對(duì)消化道、呼吸道系統(tǒng)具有致病性等，對(duì)黏多糖和糖蛋白具有特殊的親和力，尤其是對(duì)細(xì)胞表面含唾液酸的受體有更強(qiáng)的親和力。第104頁(yè)/共272頁(yè)

按照病毒核蛋白(nucleocapsideprotein，NP)和基質(zhì)蛋白(matrixprotein，M)的特征，流感病毒分為甲(A)、乙(B)和丙(C)型。1933年，Smith等人用雪貂分離出甲型流感病毒，確定了流感的病毒病因。隨后，F(xiàn)rances等人于1940年分離出乙型流感病毒。丙型流感病毒于1949年分離成功。

根據(jù)病毒顆粒表面血凝素(hemagglutinin，HA)和神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase，NA)蛋白抗原性的差別，甲型流感病毒又可進(jìn)一步分為不同的亞型。迄今所發(fā)現(xiàn)甲型流感病毒有

15個(gè)

HA亞型(H1～H15)，9個(gè)

NA亞型(N1～N9)，乙、丙型未見(jiàn)亞型。第105頁(yè)/共272頁(yè)

世界衛(wèi)生組織(WHO)1980年規(guī)定的流感病毒命名規(guī)則為：型別／宿主名稱／分離地區(qū)／編號(hào)／分離年份(HA和NA亞型)，若宿主是人則可省略。

如

A／Beijing／353／89(H3NZ)，即甲型流感病毒，宿主是人，從北京分離，分離時(shí)間是1989年，編號(hào)

353，為

H3N2亞型。

又如A／Duck／Pennsylvania／10218／84(H5N2)，即甲型流感病毒，宿主是鴨，從美國(guó)賓西法尼亞州分離，分離時(shí)間是1984年，毒株編號(hào)為10218，H5N2亞型。第106頁(yè)/共272頁(yè)一、病毒的生物學(xué)特性

流感病毒為有囊膜、分節(jié)段的-ssRNA病毒，屬正黏病毒科。分甲型流感病毒屬（8段）、乙型流感病毒屬（8段）和丙型流感病毒屬（7段，缺少編碼神經(jīng)氨酸酶的第6條鏈）。其中甲型流感病毒感染人、禽、馬、豬、海豹、鯨等；乙型流感病毒僅感染人；丙型流感病毒感染人與豬。以甲型的流行規(guī)模最大，乙型次之，丙型極少引起流行。第107頁(yè)/共272頁(yè)

流感病毒粒子為球形、橢圓形或絲狀。由雞胚或細(xì)胞傳代的病毒多為球形，直徑為80-120nm，從人或動(dòng)物新分離的病毒形態(tài)變異較大，可見(jiàn)80-120nm直徑的絲狀形態(tài)。第108頁(yè)/共272頁(yè)流感病毒的電鏡照片第109頁(yè)/共272頁(yè)RNA片段無(wú)5’帽子結(jié)構(gòu)和3’聚A尾結(jié)構(gòu)，但均有一段保守序列。5’端有13個(gè)核苷酸各節(jié)段高度保守：-GGAACAAAGAUGAppp5’3’端有12個(gè)核苷酸各節(jié)段高度保守：3’HO-CCGUUUUCGUCC-這些序列具有啟動(dòng)子活性。就A型流感病毒而言，8段vRNA共編碼10種病毒蛋白，即PA、PB1、PB2、NP、HA、NA、M1、M2、NS1、NS2。第110頁(yè)/共272頁(yè)12435678PB2PB1RNPRNAM2M1NAHA分節(jié)段的（-）SSRNAPA

RNA多聚酶核糖核蛋白（RNP）第111頁(yè)/共272頁(yè)病毒囊膜來(lái)自宿主細(xì)胞的雙層類脂膜，膜上鑲嵌著3種膜蛋白，分別為HA、NA和M1蛋白。丙型流感病毒只有HA和NA兩種膜蛋白。另外，A型流感病毒囊膜中還有少量離子通道蛋白，即M2。

第112頁(yè)/共272頁(yè)

內(nèi)部的核衣殼呈螺旋絲狀，直徑大約為

10nm，長(zhǎng)度在

50～60nm之間。核衣殼是由

NP和

RNA聚合酶復(fù)合體(PB1、PB2及

PA)與病毒的

8個(gè)

RNA片段結(jié)合而成。由于帶有自己的RNA聚合酶復(fù)合體，流感病毒可以有效地感染不增值的人類細(xì)胞。NP基因與NP蛋白：NP是核衣殼的主要蛋白，富含精氨酸，為磷酸化蛋白。NP可與vRNA和cRNA結(jié)合，但不與mRNA結(jié)合。為型特異性性抗原，可區(qū)分A、B、C三型流感病毒。NP也是寄主針對(duì)所有流感病毒亞型產(chǎn)生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的主要靶標(biāo)。第113頁(yè)/共272頁(yè)

HA基因和HA蛋白：RNA4是第一個(gè)被測(cè)序的A型流感病毒基因，其長(zhǎng)度約1742-1778bp，編碼562-566個(gè)氨基酸殘基的血凝素（HA蛋白）。A型流感病毒根據(jù)HA抗原性的變異分為15個(gè)亞型。

病毒表面的HA為同源三聚體，三聚體通過(guò)大球形頂部與敏感細(xì)胞表面的唾液酸糖蛋白受體結(jié)合，其結(jié)構(gòu)分為大球體、小球體和桿狀纖維三部分。HA可斷裂成HA1和HA2，HA1纏繞盤旋生成大球體；HA2形成桿狀纖維和小球體，與病毒囊膜的跨膜區(qū)相連。第114頁(yè)/共272頁(yè)

流感病毒的HA是因其能特異性地