植物生物技術(shù)導(dǎo)論復(fù)習(xí)思考題精編

《植物生物技術(shù)導(dǎo)論》復(fù)習(xí)思考題名詞解釋名詞解釋答案植物生物技術(shù)（廣義概念）提高和改良農(nóng)作物產(chǎn)量、品質(zhì)的所有技術(shù)。（狹義概念）利用植物器官、組織、細(xì)胞和通過分子水平的操作、促進(jìn)植物繁殖、有用物質(zhì)生產(chǎn)和植物品種遺傳改良的技術(shù)。離體授粉植物的離體授粉也叫離體受精或試管受精，就是在人工控制條件下使離體的胚珠或子房完成授粉、受精形成種子的過程。植物的離體授粉技術(shù)一般包括“胚珠試管受精”、“離體子房授粉”和“雌蕊離體授粉”3個(gè)方面。T-DNA轉(zhuǎn)移-DNA區(qū)。長(zhǎng)度大約在15?30kb,是根癌農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)從Ti質(zhì)粒上切割下來(lái)轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組的一段DNA。植物細(xì)胞組織培養(yǎng)在離體條件下利用人工配制的培養(yǎng)基對(duì)植物器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等進(jìn)行培養(yǎng)，在適宜的培養(yǎng)條件下，長(zhǎng)成完整植株的過程。同工酶是功能相同的酶的多重分子形態(tài)，它們是特異的基因產(chǎn)物。體細(xì)胞胚在愈傷組織表面或內(nèi)部形成類似于合子胚的結(jié)構(gòu)，稱其為體細(xì)胞胚，或不定胚，或胚狀體。

植物細(xì)胞全能性一個(gè)完整的植物細(xì)胞擁有形成一個(gè)完整植株所必需的全部遺傳信息。在適宜的條件下能夠形成完整植株的能力。細(xì)胞培養(yǎng)是指將植物單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)直接在培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方式。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指將游離的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)按照一定的細(xì)胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。脫分化脫分化是在植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)中，一個(gè)成熟細(xì)胞或分化細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為分生狀態(tài)的過程，即形成愈傷組織的過程。愈傷組織在植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)中，愈傷組織則指在人工培養(yǎng)基上，由外植體形成的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)、無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞?；ǚ叟囵B(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,將從花藥中游離出來(lái)的花粉，單獨(dú)進(jìn)行培養(yǎng),獲得完整植株。不定器官在愈傷組織的不同部位分別獨(dú)立形成不定根和不定芽。誘發(fā)融合原生質(zhì)體融合過程中，需要使用適當(dāng)?shù)娜诤蟿┗驒C(jī)械方法，將不同的原生質(zhì)體聚集到一起，使其粘連，融合，形成異核體。人工種子指通過植物組織培養(yǎng)的方法獲得具有正常發(fā)育能力的材料，外面包被有特定物質(zhì)，在適宜條件下可以發(fā)芽成苗的植物幼體。

外植體在植物組織培養(yǎng)中，從活體植物上提取下來(lái)的，接種在培養(yǎng)基上培養(yǎng)的無(wú)菌細(xì)胞、組織、器官等統(tǒng)稱為外植體。低溫保存又稱最小生長(zhǎng)法，是將外植體所再生的試管苗在低溫條件下，結(jié)合某些特定的培養(yǎng)基如增加蔗糖濃度、添加甘露醇、山梨醇、脫落酸（ABA）等生長(zhǎng)延緩因子，輔以培養(yǎng)環(huán)境的調(diào)控，從而抑制或延緩生長(zhǎng)，延長(zhǎng)壽命，達(dá)到保存種質(zhì)的目的。報(bào)告基因能快速報(bào)告細(xì)胞是否被轉(zhuǎn)化的基因，大多是一些水解酶基因如：B-葡萄糖醛酸苷酶基因9枝）、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因（。@1）、8-半乳糖苷酶基因（必。2）、熒光素酶基因（1k）等；農(nóng)桿堿合成酶基因、綠色熒光蛋白基因（gep）等。體細(xì)胞雜交指將植物不同種、屬，甚至科間的離體細(xì)胞通過一定誘導(dǎo)技術(shù)使質(zhì)膜接觸而融合在一起隨后導(dǎo)致兩個(gè)細(xì)胞核物質(zhì)融合，通過離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術(shù)。又稱原生質(zhì)體融合。超低溫保存將植物的離體材料包括莖尖（芽）、分生組織、胚胎、花粉、愈傷組織、懸浮細(xì)胞、原生質(zhì)體等，經(jīng)過一定的方法處理后在超低溫（-196℃）條件下進(jìn)行保存的方法。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指將游離的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)按照一定的細(xì)胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。

基因槍法又名微粒轟擊法，通過高速飛行的金屬顆粒將包被其外的目的基因直接導(dǎo)入到受體細(xì)胞內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化的一種方法。二、填空題填空題答案植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的主要組分有 、 、 、 等。水、無(wú)機(jī)成分、有機(jī)成分、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)脫分化的細(xì)胞再分化出完整植株有兩種途徑： 或 。不定器官形成、器官形成植物組織培養(yǎng)中的發(fā)展簡(jiǎn)史三階段是 、 、 。探索、 奠基、迅速發(fā)展植物細(xì)胞培養(yǎng)中，震蕩的主要作用有 、 、 等。使愈傷組織破碎成小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞、使細(xì)胞團(tuán)和單細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)基中、促進(jìn)氣體交換培養(yǎng)細(xì)胞活力的測(cè)定方法主要有： 、 、等。四唑鹽還原法(TTC)、熒光素二乙酸法(FDA)、噻唑藍(lán)法(MTT法)

花粉（小抱子）培養(yǎng)的方法主要有： 、、 等。液體淺層培養(yǎng)、平板培養(yǎng)法、微室懸滴培養(yǎng)法植物細(xì)胞組織培養(yǎng)的基本設(shè)備有 、 、等。準(zhǔn)備室、無(wú)菌操作室、培養(yǎng)室植物組織培養(yǎng)中，外植體的種類有 、 、 、 、 等。根、莖、葉、花、果實(shí)植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)主要有 、 、等。脫分化、再分化、試管苗的馴化影響植物組織培養(yǎng)的因素主要有 、、 、 等。光照、溫度、濕度、氣體植物基因克隆的方法有 、 、、 等?；瘜W(xué)法合成、從基因文庫(kù)中釣取、PCR擴(kuò)增、圖位克隆方法愈傷組織形成經(jīng)歷三個(gè)階段: 、 和 。誘導(dǎo)、細(xì)胞分裂、細(xì)胞分化植物生物技術(shù)常用的滅菌方法有 、、 等。高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌或表面消毒滅菌、過濾滅菌植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法有 、 等?？醋o(hù)培養(yǎng)、懸浮

培養(yǎng)外源基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有 、、 、 等?；驑尫?、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、聚乙二醇法、電擊法由花粉培養(yǎng)獲得的再生植株是 。單倍體植株DNA分子標(biāo)記主要有 、 、 等。RFLP、ALFP、SSR人工種子包括： 、 、 等部分。人造種皮、人造胚孚L、發(fā)芽材料體細(xì)胞雜種的鑒定方法有 、 、 、等。形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、同工酶、分子生物學(xué)離體授粉的類型主要有： 、 、 等。離體雌蕊授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉無(wú)性系是 。用植物體細(xì)胞繁殖所獲得的后代植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法主要有 、 、 、 等?；驑尫ā⑥r(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通道法、電擊法植物細(xì)胞增殖的測(cè)定指標(biāo)主要有 、細(xì)胞鮮重、細(xì)胞干

、 、 等。重、細(xì)胞密實(shí)體積、細(xì)胞植板率等。（其他答案：細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞有絲分裂指數(shù)）脫去植物病毒常用的方法有： 、 、 等。熱處理脫毒、莖尖培養(yǎng)脫毒、微體嫁接脫毒（其他供選擇的答案有：熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒、抗病毒藥劑脫毒等）植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織誘導(dǎo)的三個(gè)階段是 、 、 。啟動(dòng)期、分裂期、分化期植物種質(zhì)資源離體保存的方法主要有：—、 、等超低溫保存、低溫保存、干燥脫水法保存（備選答案有：包埋脫水法保存、玻璃化法保存、常溫保存等）植物小抱子在離體培養(yǎng)條件下的發(fā)育途徑主要有： 、 、 等。營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑、生殖細(xì)胞發(fā)育途徑、營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和

生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑（還可以填花粉均等分裂途徑）植物組織培養(yǎng)中，脫毒苗的檢測(cè)方法有 、 、 等。指示植物法、顯微鏡鑒定法、抗血清鑒定法三、簡(jiǎn)答題簡(jiǎn)答題答案簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)過程中的影響因素?？蓮模?）培養(yǎng)基的成分；（2）外植體；（3）培養(yǎng)條件三個(gè)方面分析。簡(jiǎn)述離體培養(yǎng)條件下小抱子的發(fā)育?？蓮模?）營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育途徑；（2）生殖細(xì)胞發(fā)育途徑；（3）營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞并進(jìn)發(fā)育途徑；（4）細(xì)胞均等分裂途徑等方面闡述。簡(jiǎn)述被微生物污染后的玻璃器皿應(yīng)該如何清洗。被真菌等微生物污染的玻璃器皿，必須在121?C高壓蒸汽滅菌30min后，倒去殘?jiān)?，用毛刷刷去瓶壁上的培養(yǎng)液和菌斑后，用水沖液干凈后，浸泡在洗滌液中，洗刷后，再用自來(lái)水沖液，蒸餾水沖淋一遍后，晾干備用。非PCR依賴的分子標(biāo)記主主要有限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記（AFLP）和染色體原位雜交兩種?？烧归_闡述。

要有幾種?簡(jiǎn)述體細(xì)胞體細(xì)胞雜交（somatichybridization），在植物中亦即原生雜交的意義。質(zhì)體融合（protoplastfusion），利用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法，可以將任何兩種原生質(zhì)體融合在一起；利用適宜的培養(yǎng)方法，可以由融合原生質(zhì)體再生出雜種植株即體細(xì)胞雜種?？朔参镉行噪s交不親和性、打破物種之間的生殖隔離、擴(kuò)大遺傳變異等（適當(dāng)展開論述）。植物組織培滅菌方法主要有蒸汽火菌、高溫空氣滅菌、過濾滅菌、灼養(yǎng)中，滅菌方燒火菌、輻照滅菌等。可簡(jiǎn)要將每種方法闡述。法主要有哪些？簡(jiǎn)述原生質(zhì)從植物材料的選擇一分離原生質(zhì)體一原生質(zhì)體純化一原生體分離培養(yǎng)質(zhì)體培養(yǎng)這幾個(gè)環(huán)節(jié)加以簡(jiǎn)述的主要過程。影響細(xì)胞懸可從（1）培養(yǎng)基的成分；浮培養(yǎng)的因（2）外植體的選擇；素。（3）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)；（4）培養(yǎng)條件等方面進(jìn)行闡述。簡(jiǎn)述花藥培（1）花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)；花藥培養(yǎng)為器官培養(yǎng)。養(yǎng)和花粉培（2）花粉培養(yǎng)排除了藥壁、藥隔和花絲的干擾，從小抱

養(yǎng)的異同。子中獲得的材料是純合的；花藥培養(yǎng)存在藥壁等二倍體細(xì)胞對(duì)小抱子發(fā)育的的干擾，獲得的材料可能是雜合的。（3）花粉培養(yǎng)中小胞子能均勻地接觸化學(xué)和物理誘變因素，是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料；花藥培養(yǎng)中小抱子接觸的誘變因素不均勻。（4）花粉培養(yǎng)可觀察到雄核發(fā)育的全過程，是研究遺傳和發(fā)育的很好材料體系；花藥培養(yǎng)對(duì)雄核發(fā)育的全過程難于觀察。（5）花粉培養(yǎng)可以從每個(gè)花藥中獲得更多的單倍體；花藥培養(yǎng)獲得的單倍體少。簡(jiǎn)述花粉管可從（1）花粉管通道法概念（又名子房注射法，花蘗通道法導(dǎo)入注射法，柱頭涂抹法，蘸花法。它是利用開花植物授粉后外源基因的形成的花粉管通道，直接將外源目的基因?qū)肷胁痪邆湔?。常?xì)胞壁的卵、合子或早期胚細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)目的基因遺傳轉(zhuǎn)化的一種方法）；（2）花粉管通道法導(dǎo)入外源基因的步驟進(jìn)行闡述。簡(jiǎn)述RAPD的從以下方面敘述：基本實(shí)驗(yàn)步?DNA的提取驟。?模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測(cè)?PCR擴(kuò)增?電泳檢測(cè)：PCR結(jié)束后每個(gè)樣品加4ul凝膠上樣緩沖液，每個(gè)泳道點(diǎn)樣20ul。?將凝膠浸于1ug/ml的EB中30min?60min，用水清

洗約10min,觀察、拍照。?統(tǒng)計(jì)分析：記錄條帶清晰的RAPD條帶，計(jì)算帶紋相似率；計(jì)算帶頻率、群內(nèi)遺傳純度；DNA片段大小。簡(jiǎn)述幾種轉(zhuǎn)基因植物材料的檢測(cè)方法。對(duì)轉(zhuǎn)基因植物材料中目的基因的表達(dá)主要采用分子生物學(xué)方法和生物化學(xué)方法檢測(cè)。主要有：報(bào)告基因檢測(cè)法、Southern雜交法、Northern雜交法、Western雜交法、PCR方法、生物學(xué)鑒定等。（1）報(bào)告基因檢測(cè)法：利用報(bào)告基因能快速報(bào)告細(xì)胞是否被轉(zhuǎn)化的特點(diǎn)，來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物材料的方法。（2）Southern雜交法：主要是利用兩條單鏈DNA互補(bǔ)性，來(lái)檢測(cè)外源DNA的轉(zhuǎn)化結(jié)果，該方法Southern于1975年發(fā)明的。該方法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測(cè)植株中，但不能得到基因是否表達(dá)的信息。（3）Northern雜交法：用于檢測(cè)外源基因轉(zhuǎn)錄出來(lái)的mRNA，i^法是Alwine于1977年發(fā)明的。該方法能檢測(cè)轉(zhuǎn)化基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,在轉(zhuǎn)錄水平上基因的表達(dá)和調(diào)控。（4）Western雜交法：是將外源基因轉(zhuǎn)錄并翻譯的蛋白質(zhì)從SDS聚丙烯酰胺凝膠性移到固相支持體上，然后對(duì)固定化蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定。該方法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在在蛋白質(zhì)水平上的正常表達(dá)。（5）PCR方法：在一種耐高溫的DNA聚合酶作用下，通過引物和模板DNA進(jìn)行多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）來(lái)擴(kuò)增DNA°i^法只能驗(yàn)證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測(cè)植株中，但不能得到基因是否表達(dá)的信息。該方法比Southern雜交法簡(jiǎn)單。（6）生物學(xué)鑒定：對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察，鑒定基因的功能和表型，是否穩(wěn)定地遺傳給后代。該方法能驗(yàn)證基因是否能正常地表達(dá)，是否穩(wěn)定遺傳給后代。四、論述題論述題答案簡(jiǎn)述DNA分子標(biāo)記在植物研究中的應(yīng)用。（1）比較生物的遺傳變異性，從而研究親緣、進(jìn)化關(guān)系。

（2）構(gòu)建遺傳連鎖圖，進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇。（3）構(gòu)建遺傳圖譜，進(jìn)行基因定位、克隆。例如：RFLP-（restrictionfragmentlengthpolymorphism）限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記。特定生物類型的基因組DNA經(jīng)某一種限制性內(nèi)切酶完全酶解后，會(huì)產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段，或稱限制性等位片段，通過電泳的方法分離和檢測(cè)這些片段。凡是可以引起酶解位點(diǎn)變異的突變，如點(diǎn)突變（新產(chǎn)生和去除酶切位點(diǎn)）和一段DNA的重新組織（如插入和缺失造成酶切位點(diǎn)間的長(zhǎng)度發(fā)生變化）等均可導(dǎo)致限制性等位片段的變化，從而產(chǎn)生RFLP。植物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用可從（1）篩選突變體；有哪些？（2）生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物；（3）其他應(yīng)用（克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性，用于植物代謝生理學(xué)、生物化學(xué)等的研究）等方面展開闡述。在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)材料被污染，可能的原因培養(yǎng)材料被污染，試分主要如下：（需要展開討論，根據(jù)情況加分或扣分）析原因。（1）植物材料本身內(nèi)生菌的生長(zhǎng)；（2）培養(yǎng)基滅菌不徹底；（3）培養(yǎng)基火菌后，微生物從器皿的封口處進(jìn)入；

（4）培養(yǎng)材料表面消毒不徹底；（5）無(wú)菌接種操作不規(guī)范；（6）接種室或超凈工作臺(tái)空氣不潔凈；（7）培養(yǎng)室空氣不潔凈或濕度較大。夏季，在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)可從外植體、培養(yǎng)基、無(wú)菌操作、培養(yǎng)環(huán)境等方大量培養(yǎng)物進(jìn)菌，試分面進(jìn)行闡述。（要詳細(xì)展開）析可能的原因。將一個(gè)抗病基因?qū)耄?）對(duì)導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行DNA水平分了改良的目的植物（如析（PCR或雜交分析）（3分）水稻或玉米），如何分（2）對(duì)導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行RNA水平分析基因的功能？析（RT-PCR）（3分）（3）對(duì)導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行蛋白質(zhì)水平分析（雜交分析）（3分）（4）對(duì)導(dǎo)入抗病基因的目的植物進(jìn)行抗病性鑒定。（6分）每一點(diǎn)要做適當(dāng)展開論述。種質(zhì)離體保存的意義?？蓮模?）種質(zhì)離體