細(xì)胞基因組的提取演示文稿

細(xì)胞基因組的提取演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有22頁\編輯于星期日（優(yōu)選）細(xì)胞基因組的提取現(xiàn)在是2頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸制備時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng):①盡量簡化操作步驟，縮短提取過程。②減少化學(xué)因素對(duì)核酸的降解。③減少物理因素對(duì)核酸的降解：機(jī)械剪切力和高溫④防止核酸的生物降解。

3、核酸制備的一般原則一、實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)在是3頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸制備的步驟：破碎細(xì)胞提取純化I.材料準(zhǔn)備II.破碎細(xì)胞或包膜－內(nèi)容物釋放III.核酸分離、純化IV.沉淀或吸附核酸，并去除雜質(zhì)

V.核酸溶解在適量緩沖液或水中現(xiàn)在是4頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸酶的抑制和抑制劑降低溫度，改變pH及鹽的濃度，都利于對(duì)核酸酶活性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制劑更有利，當(dāng)然，幾個(gè)條件并用更好。對(duì)于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止機(jī)械張力拉斷則更重要。對(duì)于RNA，因分子較小，不易被機(jī)械張力拉斷，但抑制RNase活力較難，故在RNA提取中設(shè)法抑制RNase更重要。4、核酸制備的一般方法和原理一、實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)在是5頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸酶的抑制和抑制劑DNase抑制

①加入少量金屬離子螯合劑，如0.01mol/LEDTA或檸檬酸鈉，DNase基本可以全部失活。②去垢劑、蛋白變性劑及DNase抑制劑也可使DNase失活。現(xiàn)在是6頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸酶的抑制和抑制劑RNase抑制①操作要帶手套。②所有器皿要嚴(yán)格消毒，③試劑處理④低溫操作⑤在分離過程中要加入一定的RNase抑制劑。

現(xiàn)在是7頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸制備中常用的去垢劑核酸本身帶負(fù)電荷，結(jié)合帶正電荷的蛋白質(zhì)。用于核酸提取的去垢劑，一般都是陰離子去垢劑，去垢劑的作用：1．溶解膜蛋白及脂肪，使細(xì)胞膜破裂；2．溶解核糖體上面的蛋白質(zhì)，使其解聚，將核酸釋放出來；3．對(duì)RNase、DNase有一定的抑制作用。如：SDS、脫氧膽酸鈉、4-氨基水楊酸鈉、萘-1.5-二磺酸鈉、三異丙基萘磺酸鈉現(xiàn)在是8頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸制備中常用的蛋白質(zhì)變性劑

蛋白質(zhì)變性劑的作用：1.使蛋白質(zhì)變性、沉淀，從核酸提取液中分離除去，以防造成蛋白污染。2.使蛋白質(zhì)變性，故可使核糖體解聚釋放出核酸。3.某些蛋白質(zhì)變性劑也有抑制RNase活性和破裂細(xì)胞的作用。

如：苯酚、氯仿、鹽酸胍、DEPC現(xiàn)在是9頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸制備中常用的酶

DNaseRNase蛋白酶K溶菌酶

現(xiàn)在是10頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸提取的一般過程1）破碎細(xì)胞（防止核酸酶的作用）

微生物：溶菌酶、SDS裂解。

高等植物：搗碎器破碎、液氮研磨。酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶，冰凍法：反復(fù)凍融或液氮凍后組織搗碎。

動(dòng)物：液氮處理后用勻漿器破碎。

細(xì)胞器DNA：首先純化細(xì)胞器。

以上處理時(shí)均要同時(shí)加入核酸酶抑制劑現(xiàn)在是11頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸提取的一般過程2）破碎抽提核酸除去雜質(zhì)1．首先使脫氧核糖核蛋白、核糖體、病毒的核蛋白與其它成分分離2．使核酸與蛋白質(zhì)分離3．除去脂類4．多糖的除去現(xiàn)在是12頁\一共有22頁\編輯于星期日核酸提取的一般過程3）核酸的純化根據(jù)所需核酸的性質(zhì)和特點(diǎn)除去其它核酸污染,并除去提取過程中的系列試劑(鹽、有機(jī)溶劑等）雜質(zhì)，最后得到均一的核酸樣品。

現(xiàn)在是13頁\一共有22頁\編輯于星期日4）核酸樣品的保存核酸保存的主要條件是溫度和介質(zhì)

溫度：4℃（5℃）最佳和最簡單-70℃是長期保存的良好溫度，為一次性保存-20℃保存

保存介質(zhì)：TE緩沖溶液(最常用)10mmol/LTris-ClpH8.01mmol/LEDTApH8.0現(xiàn)在是14頁\一共有22頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)?zāi)康默F(xiàn)在是15頁\一共有22頁\編輯于星期日材料與試劑現(xiàn)在是16頁\一共有22頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)操作與注意事項(xiàng),1000rpm,5min離心現(xiàn)在是17頁\一共有22頁\編輯于星期日現(xiàn)在是18頁\一共有22頁\編輯于星期日現(xiàn)在是19頁\一共有22頁\編輯于星期日四、注意事項(xiàng)——材料準(zhǔn)備最好使用新鮮材料，低溫保存的樣品材料不要反復(fù)凍融提取血液基因組DNA時(shí)，要選擇有核細(xì)胞（白細(xì)胞）組培細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不能過長，否則會(huì)造成DNA降解含病毒的液體材料DNA含量較少，提取前先富集現(xiàn)在是20頁\一共有22頁\編輯于星期日四、注意事項(xiàng)——細(xì)胞裂解材料應(yīng)適量，過多會(huì)影響裂解，導(dǎo)致DNA量少，純度低針對(duì)不同材料，選擇適當(dāng)?shù)牧呀忸A(yù)處理方式：植物材料－－液氮研磨動(dòng)物組織－－勻漿或液氮研磨組培細(xì)胞－－蛋白酶K細(xì)菌－－溶菌酶破壁酵母－－破壁酶或玻璃珠高溫溫浴時(shí)，定時(shí)輕柔振蕩現(xiàn)在是21頁\一共有22頁\編輯于星期日