DB32T 3683-2019豬鏈球菌9型PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

ICS11.220B41江DB32蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DBT3683—2019TechnicalregulationforPCRdetectingStreptococcussuisSerotype9江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前言GBT草。草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。處理和防止污染的措施等要求。范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GBT82分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范《病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范》(農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號(hào))定義文件。tococcussuisserotype鏈球菌9型是豬鏈球菌的一個(gè)血清型，不僅對(duì)豬致病性很強(qiáng)，而且可以感染特定的人群，是一種人獸共菌。儀器設(shè)備和主要試劑.1儀器設(shè)備.2主要試劑r5引物引物：5′-GGCTACATATAATGGAAGCCC-3′。引物：5′-CCGAAGTATCTGGGCTACTG-3′。步驟樣品處理病料樣品處理待檢培養(yǎng)物樣品處理DNA取APCR擴(kuò)增反應(yīng)條件按25μL體系進(jìn)行，2×PCRMix12.5μL，上游引物(10pmol/μL)1.0μL，下游引物(10pmol/μL)6.3.2電泳結(jié)果觀察結(jié)果判定檢測(cè)結(jié)果成立條件PCRbp出現(xiàn)一條特異性條帶，陰性對(duì)照PCR產(chǎn)物電泳后沒有A結(jié)果判定如果檢測(cè)樣品中PCR產(chǎn)物電泳后在389bp的位置上出現(xiàn)一條特異性條如果檢測(cè)樣品中PCR產(chǎn)物電泳后在389bp的位置上未出現(xiàn)一條特異性操作失誤，該檢測(cè)需要重復(fù)進(jìn)行。和防止污染的措施9型PCR產(chǎn)物電泳圖MM122000bp——bp——p——389bp——389bpM——DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)(DL2000Marker)；測(cè)過程中防止交叉污染的措施nmin，或?yàn)橐淮涡詼缇萜?。B.2檢測(cè)過程PCR循環(huán)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)作應(yīng)從“凈區(qū)”到“臟區(qū)”單方向進(jìn)B中，應(yīng)穿實(shí)驗(yàn)服和戴手套，手套要經(jīng)常更換。各區(qū)要有專用實(shí)驗(yàn)服，經(jīng)常清洗。B.2.4所有溶液、水、耗材和器具要121℃，15min~2