常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)

常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)第1頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作概述第2頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒－－－病種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)第3頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫50-60年代經(jīng)典性病80-90年代監(jiān)測(cè)性病目前傳染法報(bào)告病例監(jiān)測(cè)性病梅毒淋病沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣我國(guó)目前重點(diǎn)防治性傳播疾?。ㄐ圆。┥逞垡略w:30%～50%生殖支原體:10%～40%其它:20%～30%梅毒淋病HIV/AIDS第4頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四1995-2010全國(guó)淋病流行狀況全國(guó)性病流行狀況1995-2010全國(guó)梅毒流行狀況第5頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四衛(wèi)生部于2010年6月3日下發(fā)了關(guān)于《中國(guó)預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（2010-2020年）》衛(wèi)生部2011年2月12日下發(fā)《預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實(shí)施方案》性病防治管理辦法（修訂征求意見稿）即將下發(fā)近期衛(wèi)生部相關(guān)政策/規(guī)劃文件6第6頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四預(yù)防與控制措施廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識(shí)開展綜合防治，阻斷梅毒傳播提高監(jiān)測(cè)檢測(cè)質(zhì)量，開展主動(dòng)檢測(cè)，

梅毒早期發(fā)現(xiàn)提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務(wù)預(yù)防和控制先天梅毒加強(qiáng)國(guó)際合作和應(yīng)用性研究中國(guó)預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃7第7頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四性病防治管理辦法(各級(jí)機(jī)構(gòu)職責(zé))第十一條

國(guó)家級(jí)性病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)：（三）組織制定和完善性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等技術(shù)規(guī)范，開展性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量控制，定期開展性病診斷試劑臨床應(yīng)用質(zhì)量評(píng)價(jià)。第十二條

省級(jí)及以下性病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)（四）組織開展本行政區(qū)域性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量控制第十三條

性病診療業(yè)務(wù)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)：

開展實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量控制8第8頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四性病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)與發(fā)展規(guī)劃(2011-2015)（上報(bào)稿）第9頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四工作目標(biāo)及原則加強(qiáng)各級(jí)性病實(shí)驗(yàn)室的能力建設(shè)（1）國(guó)家性病參比實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備。。。（2）省級(jí)中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備開展常見重要性病病原體的檢測(cè)、藥物敏感性檢測(cè)以及質(zhì)量評(píng)價(jià)的能力。（3）縣（區(qū)）級(jí)以上醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)具備開展梅毒血清學(xué)初篩和確證試驗(yàn)、淋球菌培養(yǎng)以及生殖道沙眼衣原體抗原或核酸檢測(cè)的能力；縣（區(qū)）級(jí)以下的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)至少應(yīng)具備開展梅毒快速血清學(xué)檢測(cè)的能力。10第10頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四建設(shè)任務(wù)和標(biāo)準(zhǔn)1）95%的省級(jí)以上醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)能夠開展梅毒血清學(xué)初篩和確證試驗(yàn)、淋球菌鏡檢和培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)或核酸檢測(cè)。60%的省級(jí)以上醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)能夠開展淋球菌藥物敏感性檢測(cè)。2）90%的地市級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)能夠開展梅毒血清學(xué)初篩和確證試驗(yàn)、淋球菌鏡檢和培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)或核酸檢測(cè)。3）85%的縣區(qū)級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)能夠開展梅毒血清學(xué)初篩和確證試驗(yàn)、淋球菌鏡檢和培養(yǎng)、衣原體抗原檢測(cè)。4）85%的縣區(qū)級(jí)以下醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)至少能夠開展梅毒快速血清學(xué)檢測(cè)。11第11頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)介紹梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹及其他第12頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四

一、梅毒第13頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒概述（一）性接觸是主要的傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性隨著病期的延長(zhǎng)，傳染性越來越小到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母嬰傳播在妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒,病期越長(zhǎng)，傳染性越小;

第14頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒概述（二）一期梅毒硬下疳和(或)腹股溝淋巴結(jié)腫大二期梅毒可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒隱性（潛伏）梅毒早期：病期在2年以內(nèi)；晚期：病期在2年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征胎傳（先天）梅毒早期：在2歲前發(fā)生；晚期：在2歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn)

第15頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒概述（三）疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對(duì)診斷有決定性意義第16頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法病原學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)第17頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒病原體小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長(zhǎng)5～20μm，粗細(xì)<0.2μm有6～12個(gè)規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動(dòng)緩慢而有規(guī)律

-圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)中前后移動(dòng)

-伸縮其圈間之距離而移動(dòng)

-全身彎曲如蛇行第18頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測(cè)。方法：病原學(xué)檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法第19頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對(duì)于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第20頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法21第21頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒血清學(xué)檢測(cè)分類(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)

（特異性梅毒抗體）兩類方法。問題1：為什么梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷需要兩類血清學(xué)檢測(cè)方法？第22頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對(duì)螺旋體表面的脂質(zhì)作出免應(yīng)答，在3周-4周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（反應(yīng)素）。抗體主要是IgM和IgG混合抗體。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長(zhǎng)期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。問題2：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么有定性和定量?jī)煞N檢測(cè)方法

第23頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的抗原基本成分都是一樣方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第24頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理VDRL試驗(yàn)→USR→RPR/TRUSTVDRL試驗(yàn)抗原組成：0.03%心磷脂0.21%卵磷脂0.90%膽固醇抗原需新鮮配制不能保存待檢血清需滅活目前主要用于腦脊液檢查顯微鏡觀測(cè)結(jié)果USR試驗(yàn)是VDRL試驗(yàn)的改良抗原組成：同VDRL，另含（1）乙二胺四醋酸(EDTA)使抗原可長(zhǎng)期保存，能維持一年；（2）含有氯化膽堿對(duì)血清能起到化學(xué)滅活的作用不必加熱滅活（3）制成試劑盒使用方便第25頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四RPR試驗(yàn)在USR試劑成分的基礎(chǔ)上加入黑色碳顆粒作為沉淀的指示物用白色的硬紙片替代玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測(cè)結(jié)果可作定量試驗(yàn)有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡(jiǎn)單價(jià)格便宜非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理TRUST其原理和成分與RPR試驗(yàn)相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點(diǎn)均與RPR相同第26頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖第27頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。下同定性試驗(yàn)。第28頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷滴度：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)。第29頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個(gè)月，VDRL試驗(yàn)抗體滴度下降2個(gè)稀釋度，6個(gè)月下降4個(gè)稀釋度。一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。第30頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。第31頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)非梅毒患者的梅毒血清反應(yīng)呈陽性，此現(xiàn)象稱為梅毒血清反應(yīng)假陽性。①技術(shù)性假陽性反應(yīng)由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。②生物學(xué)假陽性反應(yīng)是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性

第32頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)梅毒假陽性反應(yīng)的處理技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可除外。對(duì)急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗(yàn)進(jìn)行排除。第33頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。第34頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。第35頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)第36頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測(cè)梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。問題3：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的定量試驗(yàn)在梅毒診療中有意義嗎？第37頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(cè)(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）第38頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四TPPA/TPHATPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同。TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中致敏羊紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO認(rèn)可的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑評(píng)價(jià)的參照標(biāo)準(zhǔn)。第39頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四+SheepredcellT.pallidum+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA(TPHA)試驗(yàn)原理示意圖第40頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四FTA-ABS試驗(yàn)

FTA-ABS試驗(yàn)原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。FTA-ABS試驗(yàn)是檢測(cè)梅毒的經(jīng)典“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。但由于操作比較步驟比較繁瑣，所以不適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。第41頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四FTA-ABS試驗(yàn)示意圖及結(jié)果第42頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四TP—ELISA試驗(yàn)原理

TP—ELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測(cè)儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測(cè)。第43頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒免疫層析快速檢測(cè)方法第44頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義一般情況下，一旦梅毒患者梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)呈陽性，即使經(jīng)過正規(guī)有效治療治，仍將終身陽性。問題4：梅毒實(shí)驗(yàn)室確證試驗(yàn)的意義是什么？第45頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義特異性較高，但報(bào)道亦有1%的生物學(xué)假陽性發(fā)生。如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清可使FTA—ABS試驗(yàn)呈假陽性反應(yīng)，但大多數(shù)病例中螺旋體呈串株?duì)顭晒狻魅拘詥魏思?xì)胞增多癥，可能由于嗜異性抗體所致，可使TPHA呈假陽性。麻風(fēng)患者也可使特異試驗(yàn)呈陽性。第46頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。TPPA等試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。第47頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期晚期一期二期早期潛伏晚期潛伏三期

治療前治療后

陽性陰性第48頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果解釋示意圖早期一期二期早期潛伏晚期晚期潛伏三期

治療前治療后陽性陰性第49頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯RPRTPPA

TRUSTTP-ELISA臨床意義VDRLTP-RT

_

_

排除梅毒

（一期梅毒的早期）

+

+

現(xiàn)癥梅毒

(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)

+ -生物學(xué)假陽性

-+

早期梅毒經(jīng)治療后

（早早期梅毒）第50頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四先天梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷方法依據(jù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)診斷查到螺旋體其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個(gè)稀釋滴度）檢測(cè)抗梅毒的IgM特異性抗體陽性隨訪18個(gè)月觀察抗體的變化第51頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷檢測(cè)策略新進(jìn)展

-全國(guó)梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范簡(jiǎn)介第52頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四背景介紹近年來我國(guó)嚴(yán)峻的梅毒流行形勢(shì)今年衛(wèi)生部出臺(tái)梅毒10年控制規(guī)劃全國(guó)梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（討論稿）梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)不規(guī)范現(xiàn)狀梅毒血清學(xué)檢測(cè)新方法、新技術(shù)的應(yīng)用性評(píng)估第53頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四2010年梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果

（以TPPA作為參照標(biāo)準(zhǔn)）方法試劑簡(jiǎn)稱

特異性(%)敏感性（%）ELISA廈門英科100.098.2珠海麗珠100.096.5北京萬泰100.096.5濰坊三維100.096.5北京科衛(wèi)100.095.6北京華大99.599.1上海科華99.598.5北京金豪99.197.4化學(xué)發(fā)光北京科美100.097.3快速試劑廈門英科99.493.9杭州艾康94.796.5北京萬泰94.793.9北京藍(lán)十字93.481.6第54頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四2010年非梅毒梅毒螺旋體抗原

血清學(xué)檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果

試劑簡(jiǎn)稱

敏感性(%)特異性(%)

北京萬泰TRUST97.888.0上海榮盛TRUST96.797.7上?？迫ARPR96.790.3鄭州安圖TRUST92.497.2北京金豪TRUST92.492.6英科新創(chuàng)TRUST91.398.6北京科衛(wèi)RPR89.187.0表3非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)用試劑評(píng)估結(jié)果第55頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四

梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略思考56非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)排除試驗(yàn)假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染？RPR：初篩試驗(yàn)TPPA：確證試驗(yàn)第56頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略選擇根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。其中梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法選用原則：

臨床檢測(cè)：推薦選用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，如TPPA等

血液篩查：可選用快速、簡(jiǎn)便的方法，

如免疫層析快速檢測(cè)、ELISA等

流行病調(diào)查：可選用大通量的檢測(cè)方法，如ELISA等可采用任何一類敏感性高的梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法作為篩查試驗(yàn)臨床上采用兩種方法同時(shí)檢測(cè)，可以快速診斷梅毒，使病人能夠得到及時(shí)治療。策略一采用任何一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行初篩策略二采用任何一種梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行初篩策略三？同時(shí)采用任何一種梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和任何一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)第57頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四二、淋病第58頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四1995-2010年全國(guó)淋病疫情趨勢(shì)男女性別比：3.86︰1第59頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四概況-病原學(xué)淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,簡(jiǎn)稱淋球菌)引起的各種化膿性感染，是一種經(jīng)典的常見的性傳播疾病.淋球菌為革蘭陰性雙球菌，大小約0.6~0.8μm。通常成對(duì)生長(zhǎng)，兩菌接觸面平坦。淋球菌與奈瑟屬的另一種致病菌腦膜炎球菌及其他共棲奈瑟菌在生物學(xué)上有許多相似性，可通過生化特性加以鑒別。發(fā)性感染部位主要為男性尿道或女性宮頸管內(nèi)膜第60頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四標(biāo)本的采集

取材部位依據(jù)年齡性別性接觸方式臨床表現(xiàn)取材拭子種類藻酸鈣拭子普通棉拭子滌綸拭子第61頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四取材部位男性異性戀者:采集尿道標(biāo)本，有口淫史者加取咽部標(biāo)本；同性戀者:采集尿道、直腸及咽部標(biāo)本.女性

采集宮頸標(biāo)本，必要時(shí)從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材.幼女幼女和/或處女膜未破的感染者標(biāo)本：采集陰道分泌物新生兒眼炎患者

采集眼結(jié)膜分泌物

第62頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四取材方法尿道男性患者用手指從陰莖根部向尿道口方向擠壓，有癥狀患者可擠出膿液，用取樣拭子蘸取膿液作涂片或培養(yǎng)。對(duì)擠壓后無明顯分泌物時(shí)，采用男用取材拭子插入尿道2～3cm，稍用力轉(zhuǎn)動(dòng)，保留數(shù)秒鐘再取出，以采集到粘膜上皮細(xì)胞。女性患者

可抵著恥骨聯(lián)合輕輕按摩尿道口，擠壓出分泌物。如果無明顯分泌物，可用同男性相似的上述方法取材。第63頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四取材方法宮頸避免使用防腐劑和潤(rùn)滑劑，因?yàn)檫@些物質(zhì)對(duì)淋球菌有抑制作用。仔細(xì)檢查陰道壁和宮頸，如果宮頸口外面的分泌物較多，先用無菌棉拭清除過多的宮頸粘液。將一取樣拭子插入宮頸管內(nèi)1～2cm，稍用力轉(zhuǎn)動(dòng)，保留10～30秒后取出。眼部用男性采樣拭子在眼結(jié)膜處蘸取分泌物或輕繞眼結(jié)膜。直腸將取樣拭子插入肛門2～3cm，從緊靠肛環(huán)邊的隱窩中取材。避免接觸糞便。陰道青春期前女孩可采集陰道標(biāo)本。將取樣拭子置于陰道后穹窿10～15秒，采集陰道分泌物。咽部從咽后壁或扁桃體隱窩取材第64頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四常用淋病檢測(cè)方法直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌第65頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四直接顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細(xì)胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。第66頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四直接顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本

敏感性及特異性可高達(dá)95%～99%，具診斷價(jià)值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時(shí)敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細(xì)胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進(jìn)行確證。第67頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四淋球菌培養(yǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點(diǎn)：敏感性81~100%。特異性100%

第68頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)條件：35℃～36℃，含5%～10%CO2，濕潤(rùn)（70%濕度）的環(huán)境。CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時(shí)，應(yīng)使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時(shí)間：24~48小時(shí)第69頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗(yàn)革蘭染色第70頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四淋球菌的鑒定試驗(yàn)菌落形態(tài)淋球菌樣革蘭染色革蘭陰性雙球菌氧化酶試驗(yàn)陽性糖發(fā)酵試驗(yàn)G+L-M-S-第71頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)檢測(cè)奈瑟球菌分解特定糖類(葡萄糖、麥芽糖、乳糖及蔗糖)產(chǎn)酸的能力。根據(jù)淋球菌僅分解葡萄糖，腦膜炎球菌分解葡萄糖和麥芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖或不分解這些糖類，可將淋球菌與可能在淋球菌選擇性培養(yǎng)基上分離出的其他奈瑟球菌加以鑒別。第72頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四糖發(fā)酵試驗(yàn)-奈瑟球菌屬的糖發(fā)酵特征細(xì)菌葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖淋球菌+---腦膜炎球菌++--乳酰胺奈瑟菌+++-灰色奈瑟球菌----布蘭漢卡他球菌----第73頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四淋球菌培養(yǎng)的臨床意義培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗(yàn)。第74頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四

生殖道沙眼衣原體感染第75頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染簡(jiǎn)介50年代80年代梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS沙眼衣原體:30%～50%生殖支原體:10%～40%其它:20%～30%第76頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染簡(jiǎn)介50年代80年代梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS2007年后梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS第77頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染－病例定義確診病例

同時(shí)符合1（流行病學(xué)史）（可缺）和2（臨床表現(xiàn)）和3（實(shí)驗(yàn)室檢查）病原攜帶者

符合3（實(shí)驗(yàn)室檢查）且無癥狀78第78頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn)高流行無癥狀感染嚴(yán)重并發(fā)癥依賴實(shí)驗(yàn)室診斷病原體檢測(cè):鏡檢,培養(yǎng)抗原檢測(cè):快速,EIA核酸檢測(cè):PCR79第79頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn)新發(fā)感染每年以10％的速度遞增新發(fā)病例300萬/年，治療費(fèi)20億美元/年中國(guó)至今無確切病例報(bào)告數(shù)：

部分地區(qū)調(diào)查：MSM：28%FSW:58%全國(guó)105哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)：2008：27112 2009：24821 上升9.23%80第80頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn)感染后：約70％女性和50％男性為無癥狀86％的女性和55％的男性感染者持續(xù)感染時(shí)間為1年以上。不尋求治療…….81第81頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四生殖道沙眼衣原體感染特點(diǎn)近年來研究：

引起活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎，與動(dòng)脈硬化、冠心病有關(guān)與HIV感染的促進(jìn)作用沙眼衣原體感染已成為全世界范圍的公共衛(wèi)生問題!82第82頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四常用生殖道衣原體感染檢測(cè)方法抗原檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫層析快速檢測(cè)核酸檢測(cè)第83頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)1、原理：于衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復(fù)合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測(cè)衣原體抗原。2、方法特點(diǎn)敏感性：79－97％特異性:97－99％試驗(yàn)結(jié)果陰性時(shí)，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標(biāo)本采集不當(dāng)?shù)木壒实?4頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四結(jié)果判讀客觀性強(qiáng)，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測(cè)。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應(yīng)用時(shí)，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)臨床意義第85頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四抗原快速檢測(cè)1、原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測(cè)標(biāo)本中的沙眼衣原體抗原。2、方法特點(diǎn)簡(jiǎn)易，方便，快速，尤其適用于基層單位標(biāo)本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果第86頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四抗原快速檢測(cè)臨床意義該方法主要適用于女性患者宮頸標(biāo)本的檢測(cè)，敏感性較低。該法快速、簡(jiǎn)便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實(shí)驗(yàn)室開展。第87頁，共100頁，2023年，2月20日，星期四核酸擴(kuò)增檢測(cè)1、原理：核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA