高純度質(zhì)粒小提試劑盒使用說(shuō)明書

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高純度質(zhì)粒小提試劑盒PureMiniPlasmidKit

(目錄號(hào)：HS0103)

產(chǎn)品包裝

試劑盒成分BufferP1BufferP2BufferP3BufferPDRNaseA(10mg/ml)

BufferPWBufferEBSpinColumnsPACollectionTubes(2ml)

50preps15ml15ml20ml30ml150ul60ml10ml50個(gè)50個(gè)

（注意：使用前將全部RNaseA溶液加到BufferP1中混合均勻，2~8℃保存）

保存條件

本試劑盒在室溫(15~25℃)枯燥條件下，可保存12個(gè)月；更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2~8℃。若溶液產(chǎn)生沉淀，應(yīng)在使用前置于37℃下溶解沉淀。單獨(dú)包裝的RNaseA在室溫可穩(wěn)定保存12個(gè)月。參與RNaseA后的BufferP1應(yīng)置于2~8℃保存，可穩(wěn)定保存6個(gè)月。產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本試劑盒用于高純度質(zhì)粒DNA的小量制備與純化。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽、低pH處理，質(zhì)粒可從菌體中釋放出來(lái)，并特異、高效地被離心柱硅膠膜（SpinColumnsPA）吸附。通過(guò)去蛋白液（BufferPD）和漂洗液（BufferPW）的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，在低鹽、高pH條件下洗脫，最終得到高純度的質(zhì)粒DNA。

使用本試劑盒可從1~5ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液中純化得到高達(dá)20ug的高純度質(zhì)粒DNA，可在30min之內(nèi)完成提取任務(wù)。所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?、轉(zhuǎn)化、PCR、測(cè)序、低敏感細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染等各種常規(guī)分子生物學(xué)操作。產(chǎn)品特點(diǎn)

1.快速：步驟少，操作簡(jiǎn)便，儉約時(shí)間。

2.簡(jiǎn)便：離心吸附柱不需要預(yù)平衡，漂洗液BufferPW和去蛋白液BufferPD不需要另加乙醇，即開(kāi)即用。

3.純度高：所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?、轉(zhuǎn)化、PCR、測(cè)序、低敏感細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染等各種常規(guī)分子生物學(xué)操作。操作步驟

1.取1~5ml過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，室溫12,000rpm離心1min，盡量將上清去除清白。

（注意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，濃度高時(shí)取1ml菌液離心即可，濃度低時(shí)可多收集一次）

2.參與250ulBufferP1，用槍頭充分吹打使菌體重懸均勻。

（注意：是否將RNaseA溶液加到BufferP1中并混合均勻；菌體沉淀是否懸浮充分，如有未完全懸浮的菌塊會(huì)影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）

3.參與250ulBufferP2，溫柔顛倒混勻6~8次，直到溶液變得清亮粘稠。

（注意：不可猛烈震蕩，以免造成基因組DNA片段的污染，所用時(shí)間不要超過(guò)5min，以免質(zhì)粒受到破壞，如未完全變得清亮，可能是菌體太多，可增加BufferP2的用量，在后續(xù)的操作中BufferP3的用量也要相應(yīng)增加）

4.參與350ulBufferP3，馬上溫柔顛倒混勻6~8次，可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生，室溫靜置2min，然后12,000rpm離心3~5min。

（注意：BufferP3參與后應(yīng)馬上混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，假使上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清）

5.防備將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱SpinColumnsPA中，靜置2min，讓質(zhì)粒DNA與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合。12,000rpm離心0.5~1min，棄收集管中的廢液。6.向吸附柱中參與500ul去蛋白液，12,000rpm離心1min，棄收集管中廢液。

（注意：假使宿主菌是endA-，如DH5α若TOP10，此步驟可省略。假使宿主菌是endA+，如TG1、BL21、HB101、JM101等，此步驟不可省略，因這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質(zhì)粒。假使提取低拷貝質(zhì)粒

也推薦采用此步驟）

7.參與500ul的BufferPW，室溫12,000rpm離心0.5~1min，棄收集管中廢液。

（注意：漂洗液BufferPW中有酒精，用后應(yīng)馬上蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）

8.重復(fù)步驟7一次。

9.室溫12,000rpm離心2min，甩干殘留液體。

（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響質(zhì)粒的后續(xù)使用）

10.將離心吸附柱SpinColumnsPA置于一個(gè)新的1.5ml塑料離心管（自備）中，參與50~100ul的BufferEB，室溫放置2min。12,000rpm離心1min，離心管底溶液即質(zhì)粒DNA。

（注意：為增加洗脫效率，可將BufferEB在50~60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調(diào)整其pH值在7.0~8.5之間，為了增加質(zhì)?；厥章剩蓪⒌玫降娜芤褐匦聟⑴c到離心管中，室溫放置2min，再次離心收集）

低拷貝或大質(zhì)粒（>10kb）提取

假使所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?0kb的