春生理生化實(shí)驗(yàn)生理部分

春生理生化實(shí)驗(yàn)生理部分1第1頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)室規(guī)則：1、認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)。明確目的，掌握原理，列出步驟，提出問題。2、認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察，從實(shí)記錄。3、正確操作儀器，不亂開儀器。4、注意安全和清潔衛(wèi)生（包括值日）。5、正確處理廢物。2第2頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求：實(shí)驗(yàn)原理：簡明扼要。材料：用什么？方法：實(shí)際操作過程。數(shù)據(jù)計(jì)算：原始數(shù)據(jù)，計(jì)算公式，結(jié)果。討論和分析：針對自己的結(jié)果進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)報(bào)告在下一次實(shí)驗(yàn)時(shí)上交，但實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)須經(jīng)指導(dǎo)老師審核后才可離開。3第3頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)評分標(biāo)準(zhǔn)：（一）課上：50分1、預(yù)習(xí)報(bào)告；10分2、認(rèn)真實(shí)驗(yàn)，操作規(guī)范，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合要求；30分3、不遲到，不早退，積極參與衛(wèi)生清掃。10分4第4頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)評分標(biāo)準(zhǔn)：（二）課下：實(shí)驗(yàn)報(bào)告評分標(biāo)準(zhǔn)50分

1、卷面清潔，字跡工整；5分2、語句通暢，簡明扼要，邏輯性強(qiáng)，表達(dá)準(zhǔn)確無概念錯(cuò)誤；5分3、預(yù)習(xí)報(bào)告、實(shí)驗(yàn)原始記錄、實(shí)驗(yàn)報(bào)告齊全；10分4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式規(guī)范，重點(diǎn)突出；10分5、實(shí)驗(yàn)原始記錄要如實(shí)認(rèn)真記錄實(shí)際操作、觀察及測定結(jié)果；10分6、對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論要充分有據(jù)，論點(diǎn)要正確，與該實(shí)驗(yàn)無關(guān)的內(nèi)容不要寫入報(bào)告中；10分7、抄襲別人報(bào)告者。0分5第5頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)一植物組織水勢的測定實(shí)驗(yàn)二葉綠素a、b含量的測定實(shí)驗(yàn)三植物呼吸強(qiáng)度的測定實(shí)驗(yàn)四生長素對根芽生長的不同影響實(shí)驗(yàn)五種子生活力的快速測定實(shí)驗(yàn)六植物抗逆性的鑒定6第6頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)一植物組織水勢的測定—小液流法7第7頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锝M織水勢的測定方法；了解滲透系統(tǒng)中水勢大小是水分移動方向的決定因素。8第8頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理植物生活細(xì)胞是一個(gè)滲透系統(tǒng)，當(dāng)將植物細(xì)胞或組織放入外界溶液中時(shí)，水分將以水勢差為動力在兩者間流動，最終達(dá)到動態(tài)平衡。如果植物組織的水勢小于外界溶液的水勢，植物細(xì)胞吸水，使外界溶液濃度增大；反之，植物細(xì)胞失水，使外液濃度變小。若植物組織與外界溶液水勢相同，將不改變外部溶液的濃度，此時(shí)外液的滲透勢就等于植物組織的水勢。可以利用外界溶液的濃度不同其比重也不同的原理來確定與植物組織水勢相同的外液，根據(jù)公式計(jì)算植物組織的水勢。9第9頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1．植物材料玉米或菠菜葉片2．實(shí)驗(yàn)器材吸水紙、容量管（或10ml量筒）、試管、橡皮塞或軟木塞、帶蓋青霉素小瓶、膠頭細(xì)玻璃彎管（長滴管）、移液管、剪刀或打孔器、試管架、溫度計(jì)和鑷子。3．實(shí)驗(yàn)試劑

lmol/L的蔗糖溶液、甲烯藍(lán)粉末。10第10頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟1.外界溶液的配制與滲透作用①配制0．1～0．8mol/L8個(gè)梯度的蔗糖溶液各10ml，注入8只試管中，并分別加上塞子后編號，作為對照組。②將8只青霉素小瓶編號，分別從對照組中相同編號的試管中取蔗糖溶液4ml注人各瓶，加上塞子作為實(shí)驗(yàn)組。③用剪刀或打孔器將玉米等植物的葉片剪成大小相同（約0．5cm）的小塊，每瓶中投入40小塊（約占1/4溶液體積），塞好塞子，放置30min。在此期間搖動小瓶數(shù)次。④用針尖挑取少許甲烯藍(lán)粉末加入上述各青霉素瓶中，搖勻，此時(shí)溶液為淺藍(lán)色。11第11頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟2．等滲溶液確定①用膠頭細(xì)玻璃彎管從各小瓶中依次吸取少量的淺藍(lán)色溶液，并用吸水紙吸掉管外壁上的溶液，然后將彎管伸入相同編號的對照組試管液體中部，緩慢放出溶液一滴，觀察藍(lán)色液滴的移動方向（見圖）。②若有色液滴向上移動，表明組織失水，使蔗糖溶液濃度降低、比重減?。蝗粲猩旱蜗蛳乱苿?，表明組織吸水，使蔗糖溶液濃度升高、比重增大；如果有色液滴靜止不動，則表明蔗糖溶液與植物組織水勢相等，記錄該蔗糖溶液的濃度。12第12頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算計(jì)算公式：фW=-RTiC式中：фW為植物組織水勢，以bar表示；

i為解離系數(shù)，蔗糖是1；

R為氣體常數(shù)，0.083L?bar/mol?K；

T為絕對溫度，K（即273℃＋t，t為實(shí)驗(yàn)溫度）；

C為等滲溶液濃度，mol/L，可換算為質(zhì)量摩爾濃度（mol/kg）。13第13頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1．葉片投入小瓶要快，小瓶及時(shí)加蓋，防止葉內(nèi)或小瓶中水分蒸發(fā)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2．加入實(shí)驗(yàn)組的甲烯藍(lán)粉末量不宜過多，以免影響溶液的比重。3．膠頭細(xì)玻璃彎管要各溶液專用，如用一只彎管則應(yīng)從低濃度到高濃度依次吸取溶液。4．釋放藍(lán)色液滴時(shí)要緩慢，防止過急擠壓沖力影響液滴移動。5．觀察液滴移動狀況最好放在一個(gè)白色的背景下進(jìn)行。14第14頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（七）思考題1、測定同一植物上部及下部葉片的水勢有何差別？2、用小液流法測定植物組織水勢與用質(zhì)壁分離法測定植物細(xì)胞滲透勢都是以外界溶液的濃度算出的溶質(zhì)勢為根據(jù)，它們之間的區(qū)別何在？15第15頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)二葉綠素a、b含量的測定—分光光度法16第16頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆赵谖唇?jīng)分離的葉綠體色素溶液中測定葉綠素a和b的方法及其計(jì)算方法。17第17頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。在測定葉綠素a、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。

18第18頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五19第19頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1、材料：新鮮（或烘干）的植物葉片2、儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、電子頂載天平（感量0.01g）、研缽、25ml棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦鏡紙、滴管。3、試劑：96％乙醇（或80％丙酮）、石英砂、碳酸鈣粉。20第20頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟1.取新鮮植物（菠菜）葉片（或其它綠色組織）或干材料，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。2.稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2-3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3-5min。21第21頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟3.取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后用乙醇定容至25ml，搖勻。4.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。22第22頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算將測定得到的吸光值代入下面的式子：

Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665Ct=Ca+Cb=18.08A649+6.63A665

（Ca、Cb：mg/L）葉綠素的含量（mg/g）=[葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）23第23頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五24第24頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、若用丙酮提取，由于植物葉子中含有水分，可先用純丙酮，以使色素提取液中丙酮的最終濃度近似80%。葉綠素a、b的80％丙酮提取液在紅光區(qū)的最大吸收峰分別為663nm、645nm。可列出以下關(guān)系式：

Ca=12.75A663－2.59A645Cb=22.88A645－4.67A663Ct=20.29A645+8.05A663另外，由于葉綠素a、b在652nm的吸收峰相交，兩者有相同的比吸收系數(shù)34.5，故也有以下公式：

Ct=（A652×1000）÷34.52、由于葉綠素a、葉綠素b的吸收峰很陡，儀器波長稍有偏差，就會使結(jié)果產(chǎn)生很大的誤差。25第25頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（七）思考題1、試比較陰生植物與陽生植物的葉綠素a與葉綠素b的比值有何不同？2、分光光度法和比色法有何不同？3、葉綠素a與葉綠素b在紅光區(qū)和藍(lán)光區(qū)都有最大吸收峰，能否用藍(lán)光區(qū)的最大吸收峰波長進(jìn)行葉綠素a與葉綠素b的定量分析，為什么？26第26頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)三植物呼吸強(qiáng)度的測定—紅外線CO2氣體分析儀法27第27頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解植物呼吸強(qiáng)度測定的一般原理；２、了解紅外線CO2氣體分析儀；３、熟習(xí)紅外線CO2氣體分析儀具體操作。28第28頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理植物在生命活動過程中，常伴有CO2的釋放與吸收。CO2量的變化能標(biāo)志植物生理生化活性的強(qiáng)弱。紅外線CO2氣體分析儀（IRGA）工作原理：許多由異原子組成的氣體分子對紅外線都有特異的吸收帶。CO2的紅外吸收帶有4處，其吸收峰分別在2.69μm、2.77μm、4.26μm、14.99μm處，其中只有4.26μm的吸收帶不與H2O的吸收帶重疊，紅外儀內(nèi)設(shè)置僅讓4.26μm紅外光通過的濾光片，當(dāng)該波長的紅外光經(jīng)過含有CO2的氣體時(shí)，能量就因CO2的吸收而降低，降低的多少與CO2的濃度有關(guān)，并服從朗伯-比爾定律。29第29頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五

（二）實(shí)驗(yàn)原理分別供給紅外儀含與不含CO2的氣體，紅外儀的檢測器便可通過檢測紅外光能量的變化而輸出反映CO2濃度的電訊號。30第30頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理萌發(fā)的種子呼吸作用增強(qiáng)，在密閉容器中，CO2濃度可用紅外線CO2分析儀測定，從而算出呼吸強(qiáng)度。31第31頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1、材料：萌發(fā)種子2、器材：紅外線分析儀、天平、電爐、500ml呼吸瓶（帶孔塞）、吸水紙32第32頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五1、稱蒸發(fā)種子10g2份1份煮死，作為對照，吸干表面水1份不煮懸掛于呼吸瓶中2、20分鐘后，用紅外線CO2分析儀測定二瓶中CO2濃度（四）實(shí)驗(yàn)步驟33第33頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算呼吸強(qiáng)度=μlCO2/g鮮重（或干重）/h34第34頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、紅外線的濾光效果并不十分理想，水蒸氣是干擾測定的主要因素，因此，取樣器干燥管內(nèi)的CaCl2要經(jīng)常更換，避免吸水溶解進(jìn)入紅外儀，污染分析氣室，以保證測量精度，延長儀器壽命。2、用開放系統(tǒng)測定時(shí)要注意維持外源CO2濃度的穩(wěn)定。注：空氣中CO2濃度約為300ppm。35第35頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)四生長素對根芽生長的不同影響36第36頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锛に睾蜕L調(diào)節(jié)劑對植物生長發(fā)育的調(diào)節(jié)作用。了解不同濃度的生長素在種子萌發(fā)過程中對植物不同器官生長的影響。37第37頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理生長素及人工合成的類似物質(zhì)如萘乙酸等對植物生長有很大的調(diào)節(jié)作用，在不同濃度下對植物生長的效應(yīng)也不同。一般來說，低濃度的生長素促進(jìn)生長，高濃度時(shí)則抑制生長。不同的植物器官對生長素的反應(yīng)也不同，通常根比芽、莖對生長素更敏感。38第38頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1、材料：水稻種子2、儀器設(shè)備：溫箱；6套培養(yǎng)皿；試管；移液管；量筒；鑷子；尺子；濾紙；標(biāo)簽紙。3、試劑：

10ppmNAA溶液39第39頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：1、水稻種子的萌發(fā)：在30℃下浸種2－3天，然后在30℃以下保濕催芽至露白點(diǎn)（約1－2天）。

2、1000ppm母液的配制：在分析天平上稱萘乙酸0.1克用95％酒精少許將其溶解后，倒入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度。

3、10ppm萘乙酸溶液的配制：用移液管吸取母液1ml，加蒸餾水定容于100ml容量瓶中。40第40頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)操作步驟：1、在培養(yǎng)皿貼上標(biāo)簽，并相應(yīng)加入不同濃度的NAA溶液9ml。具體步驟：a.將6套培養(yǎng)皿和試管洗凈，干燥，編號。編號123456NAA濃度ppm

0

10-3

10-2

10-1

1

10

41第41頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)操作步驟：b.取10ppmNAA溶液

10ml→6號試管

1ml→5號試管+9ml蒸餾水

1ml→4號試管+9ml蒸餾水

1ml→3號試管+9ml蒸餾水

1ml→2號試管+9ml蒸餾水,棄去1ml;1號試管加9ml蒸餾水。（每管取液前均搖勻）。c.將6個(gè)試管內(nèi)溶液對號入座倒入6套培養(yǎng)皿中。2、在培養(yǎng)皿中鋪上一層濾紙，并在濾紙上播上已經(jīng)萌動的水稻種子10粒/皿。蓋好蓋，置20-25℃恒溫箱中。42第42頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟：3、于三天后觀察并記錄各培養(yǎng)皿中的下列項(xiàng)目：①平均根數(shù)：記錄根長0.5cm的根的數(shù)目，算平均數(shù)。②平均根長：量取各苗最長根的長度，算平均數(shù)。③平均芽長：量取各苗芽長，算平均數(shù)。43第43頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算與分析：1、列表顯示各種處理組及對照組中上述各項(xiàng)數(shù)據(jù)。2、對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論分析。NAA濃度ppm010-310-210-1110平均根數(shù)

平均根長

平均芽長

44第44頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、生長素濃度要盡量配制準(zhǔn)確。2、試驗(yàn)中要防止生長素污染。45第45頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)五種子生活力的快速測定—氯化三苯基四氮唑(TTC)法46第46頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解種子生活力測定的實(shí)踐意義；2、掌握氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定種子生活力的原理及操作要點(diǎn)。47第47頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理凡有生活力的種胚在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC溶液滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶(NADH2或NADPH2)還原時(shí)，可產(chǎn)生紅色的三苯基甲月替

(TTＦ)，胚便染成紅色。當(dāng)種胚生活力下降時(shí)，呼吸作用明顯減弱，脫氫酶的活性亦大大下降，胚的顏色變化不明顯，故可由染色的程度推知種子的生活力強(qiáng)弱。48第48頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是氧化還原色素，溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲月替（TTF），如下式：49第49頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1、材料：水稻種子2、儀器：

培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片、棕色試劑瓶、解剖針、搪瓷盤、PH試紙（6.5～7.5）、電爐、恒溫箱。50第50頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品3、試劑：

TTC溶液的配制：取3gTTC溶于1L蒸餾水或冷開水中，配制成0.3％的TTC溶液。（藥液PH應(yīng)在6.5～7.5）

(若難溶，可先加少量酒精使其溶解)。51第51頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、將水稻新種子、陳種子或死種子，用溫水(30℃)浸泡2～6H，使種子充分吸脹。2、隨機(jī)取種子2份，每份200粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開，取每粒種子的一半備用，另一半煮死作為對照。3、把切好的種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC溶液，以浸沒種子為度。52第52頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟4、放入30～35℃的恒溫箱內(nèi)保溫30Min。也可在20℃左右的室溫下放置40～60Min。5、保溫后，傾出藥液，用自來水沖洗2～3次，立即觀察種胚著色情況，（關(guān)鍵是看胚根、胚盾片中央），判斷種子有無生活力。53第53頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算計(jì)算活種子的百分率。54第54頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、TTC溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如需貯藏則應(yīng)貯于棕色瓶中，放在陰涼黑暗處，如溶液變紅則不可再用。2、染色溫度一般以25～35℃為宜。3、判斷有生活力的種子應(yīng)具備的特征：胚發(fā)育良好、完整、整個(gè)胚染成鮮紅色；子葉允許有小部分壞死，但其部位不是胚中軸和子葉連接處；胚根尖雖有小部分壞死，但其他部位完好。4、判斷無生活力的種子應(yīng)具備的特征：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子葉不染色或喪失機(jī)能的組織超過1／2；胚染成很淡的紫紅色或淡灰紅色；子葉與胚中軸的連接處或在胚根上有壞死的部分；胚根受傷以及發(fā)育不良的未成熟的種子。5、對于不同作物種子生活力的測定，所需試劑濃度、浸泡時(shí)間、染色時(shí)間不同。55第55頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（七）思考題1、試驗(yàn)結(jié)果與實(shí)際情況是否相符？為什么？2、就你所知還有哪些快速方法可以測定種子的生活力？56第56頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五實(shí)驗(yàn)六植物抗逆性的鑒定—電導(dǎo)儀法57第57頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解?xì)胞膜透性測定在實(shí)際應(yīng)用中的意義；２、掌握電導(dǎo)儀使用方法；３、掌握電導(dǎo)儀法測定植物細(xì)胞膜透性的原理及要點(diǎn)；４、觀察高、低溫因子對細(xì)胞透性的影響；58第58頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（二）實(shí)驗(yàn)原理

植物細(xì)胞膜對維持細(xì)胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細(xì)胞膜對物質(zhì)具有選擇透性能力。當(dāng)植物受到逆境影響時(shí)，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物細(xì)胞浸提液的電導(dǎo)率增大。膜透性增大的程度與逆境脅迫強(qiáng)度有關(guān)，也與植物抗逆性的強(qiáng)弱有關(guān)。因此，電導(dǎo)法目前已成為作物抗性栽培、育種上鑒定植物抗逆性強(qiáng)弱的一個(gè)精確而實(shí)用的方法。59第59頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（三）實(shí)驗(yàn)用品1、材料：小麥、女貞葉片等。2、儀器設(shè)備：電導(dǎo)儀；天平；恒溫箱；恒溫水浴鍋；帶抽氣泵的真空干燥器（或20ml注射器筒）；打孔器；紗布；吸水紙。3、試劑：

NaCl溶液。60第60頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：如需定量測定透性變化，可用純NaCl配成0、10、20、40、60、80、100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液，在20～25℃恒溫下用電導(dǎo)儀測定，可讀出電導(dǎo)度。2、選取小麥或其他植物在一定部位上生長葉齡相似的葉子若干，剪下后用紗布拭凈，稱取二份，各重2g。61第61頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟3、一份插入小杯中放在40℃恒溫箱內(nèi)萎蔫0.5～1h，另一份插入水杯中放在室溫下做對照。處理后分別用蒸餾水沖洗二次，并用潔凈濾紙吸干。4、然后剪成長約1cm小段放入小玻杯中（大小以夠容電極為度），并用玻棒或干凈尼龍網(wǎng)壓住，在杯中準(zhǔn)確加入蒸餾水20ml，浸沒葉片。放入真空干燥器，用抽氣機(jī)抽氣7～8min以抽出細(xì)胞間隙中的空氣；重新緩緩放入空氣，水即被壓入組織中而使葉下沉。62第62頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟或用6-8mm的打孔器打取圓片10片，放入注射器中，吸水10ml,排出空氣后，手指堵住前端小孔，同時(shí)把活塞向外抽拉，即可造成減壓排出組織中的空氣。輕放活塞，水即進(jìn)入組織。如此反復(fù)抽拉數(shù)次，葉片沉入水下。63第63頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（四）實(shí)驗(yàn)步驟5、將抽過氣的小玻杯取出（或把注射器里葉子連水倒入試管），放在實(shí)驗(yàn)桌上靜置20min，然后用玻棒輕輕攪動葉片，在20～25℃恒溫水浴下，用電導(dǎo)儀測定溶液電導(dǎo)率S1（μΩ/cm)。6、測過電導(dǎo)率后，再放入100℃沸水浴中15min，以殺死植物組織，取出后用自來水冷卻10min并搖勻，在20～25℃恒溫水浴下再測其煮沸電導(dǎo)率S2。64第64頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算

記錄結(jié)果，比較不同處理（萎蔫處理與對照）的葉片細(xì)胞透性的變化情況，并加解釋。

計(jì)算公式如下：65第65頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算相對電導(dǎo)度（L)=S1/S2傷害度（%）=（L處理-L對照）/（1-L對照）×100注：測定中一般應(yīng)用去離子水，若用蒸餾水，則需設(shè)一空白試管（蒸餾水作空白）：相對電導(dǎo)度（L)=（S1-空白電導(dǎo)度）/（S2-空白電導(dǎo)度）66第66頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五（六）實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)１、取樣要有代表性（應(yīng)注意葉齡、葉片的大?。?；２、所用器材必須干凈、干燥；３、葉片要用蒸餾水洗凈、擦干，并剪成大致相同的小塊；４、要抽去葉片間隙空氣，使水分滲入細(xì)胞進(jìn)行水分交換。5、測定電導(dǎo)時(shí)要盡量避免高CO2氣源，以免影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。6、溫度對溶液的電導(dǎo)影響很大，故S1和S2須在相同溫度下測定。67第67頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五請按時(shí)交實(shí)驗(yàn)報(bào)告！！實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括如下內(nèi)容：1、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目2、實(shí)驗(yàn)原理3、試劑和器材4、操作方法（主要步驟）5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果6、分析與討論等68第68頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五附：電導(dǎo)儀的使用方法DDS-A型電導(dǎo)率儀測量原理：在電解質(zhì)的溶液中，帶電的離子在電場的影響下，產(chǎn)生移動而產(chǎn)生電流，因此具有導(dǎo)電作用。其導(dǎo)電能力的強(qiáng)弱稱為電導(dǎo)S，電導(dǎo)是電阻的倒數(shù)。R=pL/AS=1/PqL:電極間距（cm）A:電極的截面積(cm2)Q:常數(shù)，（一個(gè)電杯）K=1/p:電導(dǎo)率(us/cm)69第69頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五電導(dǎo)儀的使用方法使用方法：1.表針調(diào)零：儀器在未接電源之前，觀察表針是否指零，如不指零，可調(diào)整表頭上的螺絲，使表針指零。2.電極的配用及電極常數(shù)調(diào)節(jié)：選鉑黑電極使電極常數(shù)調(diào)節(jié)器的指示值與配套電極與實(shí)際電極常數(shù)值相對應(yīng)。70第70頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五電導(dǎo)儀的使用方法3.“高周”“底周”選擇：為了提高測量精度，設(shè)有“高周”“底周”選擇按鍵開關(guān)。當(dāng)被測溶液的電導(dǎo)率﹤300us/cm[]4.如果在測量時(shí)，預(yù)先不知道被測溶液電導(dǎo)率的大小，應(yīng)先把量程開關(guān)置于最大電導(dǎo)率測量檔，然后逐檔下降，以防表針打彎。71第71頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五電導(dǎo)儀的使用方法校正：1.根據(jù)被測溶液的電導(dǎo)率范圍選擇相應(yīng)的電極，并將電極插頭插入電極插口內(nèi)，旋緊插口上的緊固螺絲，再將電極插入溶液中。2.根據(jù)被測溶液電導(dǎo)率范圍選擇“高周”或“低周”，并將電極常數(shù)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)在實(shí)際電極的常數(shù)上面。根據(jù)被測溶液的電導(dǎo)率范圍選擇“量程”檔別。3.將選擇開關(guān)置“校正位置”。4.接通電源，預(yù)熱10分鐘，此時(shí)表針應(yīng)有指示，調(diào)節(jié)“調(diào)正“電位器，使表針指示在滿度位置。72第72頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五電導(dǎo)儀的使用方法測量：1.將選擇開關(guān)置“測量”位置，此時(shí)表針示值乘以量程開關(guān)的倍率即為被測溶液的實(shí)際電導(dǎo)率。2.如果測量過程中表針指示太小或者超過滿度，應(yīng)適當(dāng)改變“量程選擇”開關(guān)于適當(dāng)位置，這時(shí)應(yīng)重新進(jìn)行“校正”。3.讀量程，對黑關(guān)讀黑線數(shù)值，1～8量程使Ks對低周；對紅關(guān)讀紅線數(shù)值，9～11量程使Ks對低周。73第73頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五電導(dǎo)儀的使用方法注意事項(xiàng)：1.電極插頭要保持清潔，電極引線不能潮濕，否則將引起測量誤差。2.高純水被盛入容器后，應(yīng)迅速測量，否則電導(dǎo)率降低很快，因?yàn)榭諝庵械腃O2溶于水中，變成CO32-。3.被測溶液的容器必須清潔，無離子污染。74第74頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五附：722型分光光度計(jì)的使用方法

722S型分光光度計(jì)是一種數(shù)碼顯示的可見光分光光度計(jì)，采用衍射光柵作為單色器，鹵素?zé)糇鞴庠矗褂貌ㄩL范圍為340-1000nm。除了可直接進(jìn)行透光率T%和吸光度A的測定，還具有濃度因子設(shè)定和濃度直讀的功能。75第75頁，共82頁，2023年，2月20日，星期五722型分光光度計(jì)的使用方法1、插上插頭，接通電源，打開暗箱蓋，預(yù)熱20min。

*注意：分光光度計(jì)在接通電源而不用時(shí)，必須打開暗箱蓋，以免光電管老化。2、將準(zhǔn)備好的試劑倒入比色杯中，用吸水紙擦去比色杯