DNA的粗提取和鑒定課件高二下學期生物人教版（2019）選擇性必修3

重組DNA技術(shù)的基本工具BasictoolsfortherecombinantDNAtechnology基因工程目錄01DNA的粗提取與鑒定02習題鞏固DNA的粗提取與鑒定RoughextractionandidentificationofDNA01一、實驗原理1.提取DNA的原理

利用DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面的差異，對它們進行提取。(1)DNA

酒精，某些蛋白質(zhì)

酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。(2)DNA在不同濃度的

中的溶解度不同，它能溶于

的NaCl溶液。不溶于溶于NaCl溶液2mol/L2.鑒定DNA的原理在一定溫度下（沸水?。珼NA遇

試劑會呈現(xiàn)

。二苯胺藍色DNA的粗提取與鑒定當NaCl濃度為2mol／L時，DNA的溶解度最大，濃度為0.14mol／L時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出二、目的要求：1.了解DNA的物理化學性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學會DNA粗提取的方法以及利用二苯胺試劑對DNA進行鑒定。三、材料用具：1.材料：DNA含量相對較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。（注意：不能選擇哺乳動物成熟的紅細胞，因為哺乳動物成熟的紅細胞中沒有細胞核和線粒體，幾乎不含DNA。）洋蔥花菜香蕉豬肝雞血菠菜DNA的粗提取與鑒定2.試劑及作用：(1)研磨液(2)體積分數(shù)為95%的酒精(3)2mol/L的NaCl溶液(4)二苯胺試劑(5)蒸餾水——溶解并提取DNA——析出DNA——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用——滴入NaCl溶液中，使其濃度逐漸下降至0.14mol/L，從而析出DNA研磨液成分作用SDS使蛋白質(zhì)變性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl緩沖液穩(wěn)定DNADNA的粗提取與鑒定（1）通過研磨釋放DNA

稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨（可加入少量石英砂助研）。①研磨的目的：破碎細胞，使核物質(zhì)容易溶解在研磨液中②研磨時間不宜太長：防止研磨時產(chǎn)生的熱量影響DNA的提取量③有條件的可以在材料處理的過程中加入纖維素酶、果膠酶：

研磨效果好（有利于充分研磨）④研磨不宜太用力

四、方法步驟（2）過濾獲取含DNA的上清液

在漏斗中墊上紗布，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。也可以直接將研磨液倒入塑料離心管中，在1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液放入燒杯中。為減少DNA的損失，過濾過程一般使用紗布可能含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)低溫放置幾分鐘的作用：①可抑制核酸水解酶的活性，進而抑制DNA降解；②抑制DNA分子運動，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA的柔韌性，減少其斷裂。四、方法步驟在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的酒精溶液（體積分數(shù)為95%），靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分；或者將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。（3）冷卻酒精析出DNA減少DNA斷裂，以便獲得較完整的DNA分子。四、方法步驟（4）DNA的鑒定

取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCI溶液中。向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。

加入2mol/L氯化鈉溶液不加入絲狀物加入4mL二苯胺試劑加入2mol/L氯化鈉溶液加入絲狀物加入4mL二苯胺試劑實驗組對照組水浴加熱溶液藍色的深淺與溶液中DNA的含量的多少有關(guān)四、方法步驟1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？

觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍色說明實驗基本成功；如果不呈現(xiàn)藍色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在實驗操作過程中出現(xiàn)了失誤等。2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。結(jié)果分析與評價習題鞏固Exercisestoconsolidate021．下列關(guān)于“DNA的粗提取和鑒定”實驗的原理的敘述，錯誤的是（

）A．利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白質(zhì)能溶于酒精溶液，可將DNA與蛋白質(zhì)分離B．利用高溫能使蛋白質(zhì)變性，卻對DNA沒有影響的特性，可將DNA與蛋白質(zhì)分離C．在用預(yù)冷的酒精沉淀DNA時，要用玻璃棒沿一個方向攪拌，防止DNA斷裂D．利用DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液，可將提取的絲狀物或沉淀物溶解于NaCl溶液中B2．下列關(guān)于“DNA的粗提取和鑒定”實驗的原理的敘述，錯誤的是（

）A．利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白質(zhì)能溶于酒精溶液，可將DNA與蛋白質(zhì)分離B．利用高溫能使蛋白質(zhì)變性，卻對DNA沒有影響的特性，可將DNA與蛋白質(zhì)分離C．在用預(yù)冷的酒精沉淀DNA時，要用玻璃棒沿一個方向攪拌，防止DNA斷裂D．利用DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液，可將提取的絲狀物或沉淀物溶解于NaCl溶液中B3．下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是（）A．取材時可選用雞血、洋蔥、香蕉等富含DNA的材料進行實驗B．將白色絲狀物置于2mol/L的NaCl溶液中，離心后棄去上清液C．可將洋蔥置于清水中，細胞吸水破裂后將DNA釋放出來D．鑒定DNA時，應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進行沸水浴A4．下列關(guān)于