(5)-1-6．色譜分離方法-按原理不同進(jìn)行分類

天然藥物化學(xué)色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類色譜法又稱為層析法，是一種分離技術(shù)。色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據(jù)組分在兩相中作用能力不同達(dá)到分離目的。其中的一相固定不動(dòng)，稱為固定相；色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類另一相是攜帶試樣混合物流過(guò)此固定相的流體，稱為流動(dòng)相。固定相固體液體（擔(dān)體或支持劑）——分配色譜流動(dòng)相液體——液相色譜氣體——?dú)庀嗌V液液分配色譜分配色譜法吸附色譜法凝膠色譜法離子交換色譜法按色譜原理不同分類色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類液-液分配柱色譜(層析)法：將兩相溶劑中的一相涂在硅膠等多孔載體上，作為固定相，填充在色譜管中，然后加入與固定相不相混溶的另一相溶劑沖洗色譜柱。物質(zhì)在兩相溶劑中作相對(duì)逆流移動(dòng)，進(jìn)行動(dòng)態(tài)分配而得到分離的方法。色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類正相色譜：固定相為強(qiáng)極性溶劑，流動(dòng)相為弱極性有機(jī)溶劑，主要用于分離極性及中等極性化合物。流動(dòng)相采用乙酸乙酯、正丁醇等。反相色譜：固定相為弱極性溶劑，流動(dòng)相為強(qiáng)極性有機(jī)溶劑,主要用于分離非極性及中等極性化合物。流動(dòng)相采用甲醇水等。根據(jù)流動(dòng)相的極性分類：加壓液相柱色譜法原理：常用的液-液分配柱色譜法中用的載體（如硅膠）顆粒較大，流動(dòng)相僅靠重力作用自上而下流過(guò)色譜柱，流動(dòng)相依靠人工分段收集，柱效低，且比較費(fèi)時(shí)。加壓液相色譜：用的載體顆粒直徑小、機(jī)械強(qiáng)度大、比表面高，因此柱效高。加壓液相色譜分為：低壓液相色譜（LPLC）中壓液相色譜（MPLC）高壓液相色譜（HPLC）色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類低壓和中壓柱層析（LPLC、MPLC）根據(jù)加壓液相色譜原理，采用薄層層析硅膠（氧化鋁或反相鍵合相硅膠等），在0.5~5kg（低壓）或5~50kg（中壓）下進(jìn)行柱層析，分離效果可以和薄層層析相媲美。色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類高效液相色譜法（HPLC）特點(diǎn)：壓力大，一次上樣量大，柱效高、分離速度快，重現(xiàn)性好。一次實(shí)驗(yàn)4-8小時(shí)內(nèi)完成。分離范圍廣，對(duì)揮發(fā)性差或遇熱不穩(wěn)定的成分及某些高分子化合物分離極為有利。因?yàn)橹饕捎梅聪噫I合相，對(duì)皂苷類等成分的分離效果非常好。色譜分離法——按原理不同進(jìn)行分類在天然藥物化學(xué)成分分離過(guò)程中，吸附現(xiàn)象應(yīng)用較多，尤其是固-液吸附。吸附層析分類物理吸附化學(xué)吸附半化學(xué)吸附(二）根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離1物理吸附（又稱表面吸附）基本原理：吸附與解吸附往復(fù)循環(huán)的過(guò)程。吸附解吸附吸附解吸附直至分離常見(jiàn)的吸附劑極性的吸附劑：硅膠、氧化鋁、大孔樹脂非極性吸附劑：活性炭基本原理：通過(guò)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行吸附。酸性物質(zhì)與氧化鋁吸附：如黃酮等酚性物質(zhì)被堿性氧化鋁吸附；堿性物質(zhì)與硅膠吸附：如生物堿被酸性硅膠吸附；2化學(xué)吸附3半化學(xué)吸附基本原理：通過(guò)氫鍵的形式進(jìn)行吸附。常用的吸附劑：聚酰胺應(yīng)用范圍：主要用于醌類、黃酮等成分的分離。（三）根據(jù)物質(zhì)的分子大小差別進(jìn)行分離又稱為分子篩層析（凝膠層析、排阻色譜）基本原理：利用凝膠的分子篩原理和化合物的分子大小差別分離化合物，按分子大小順序先后流出并得到分離。分離物質(zhì)范圍：多糖、蛋白質(zhì)、苷和苷元的分離。常用凝膠種類：葡聚糖凝膠（SephadexG）、羥丙基葡聚糖凝膠（SephadexLH-20）凝膠色譜分離示意圖具有酸性、堿性及兩性的化合物分子，在水中多呈解離狀態(tài)。堿（陰）性離子交換樹脂酸（陽(yáng)）性離子交換樹脂裝柱注意事項(xiàng):裝柱前必須充分溶脹。（四）根據(jù)物質(zhì)的解離程度不同進(jìn)行分離基本原理：利用酸堿性化合物在解離狀態(tài)時(shí)，與陰、陽(yáng)離子發(fā)生交換的原理進(jìn)行分離。

示例離子交換樹脂分離生物堿的過(guò)程（1）吸附生物堿鹽陽(yáng)離子被陽(yáng)離子交換樹脂吸附R-AlKH++H+R=樹