DB 5304T 001-2019 草莓脫毒瓶苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.20B39

DB5304玉 溪 市 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB5304/T001—2019DG5304/T001-2015發(fā)布玉溪市市場監(jiān)督管理局發(fā)布玉溪市市場監(jiān)督管理局202002–24201911–25DB5304/001DB5304/001—2019前 言本標(biāo)按GB/T1.1—2009《準(zhǔn)工導(dǎo)則 第1部分標(biāo)的構(gòu)編》的定草本標(biāo)的錄A為料附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由玉溪市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：玉溪市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。IIDB5304/001DB5304/001—2019DB5304/T001—2019植物激素DB5304/T001—2019植物激素2.7培養(yǎng)基草莓脫毒瓶苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了草莓脫毒瓶苗生產(chǎn)的術(shù)語和定義、組培工廠的設(shè)計(jì)要求和所需儀器設(shè)備及化學(xué)試劑、培養(yǎng)基的配制、消毒滅菌操作、接種操作、培養(yǎng)室操作、組培苗生產(chǎn)流程和脫毒瓶苗出苗標(biāo)準(zhǔn)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于玉溪市草莓脫毒瓶苗生產(chǎn)。下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1植物組培12.2草莓莖尖脫毒組培技術(shù)0.1～1）2.3組培苗（瓶苗）經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得的根莖葉齊全的瓶裝生根苗。2.4組培室采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，生產(chǎn)植物組培苗的車間。12.2草莓莖尖脫毒組培技術(shù)0.1～1）2.3組培苗（瓶苗）經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得的根莖葉齊全的瓶裝生根苗。2.4組培室采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，生產(chǎn)植物組培苗的車間。2.5外植體指用于植物組織培養(yǎng)的植物體或一部分器官、組織、細(xì)胞及細(xì)胞器。2.6元素和某些植物生長物質(zhì)的基質(zhì)。2.8培養(yǎng)材料生長在培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)基上的無菌植物材料。2.9接種將滅菌后的外植體或培養(yǎng)材料在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過程。2.102指將滅菌后的外植體接種在無菌培養(yǎng)基中獲得無菌材料和無性繁殖系前的最初幾代培養(yǎng)。2指將滅菌后的外植體接種在無菌培養(yǎng)基中獲得無菌材料和無性繁殖系前的最初幾代培養(yǎng)。2.11誘導(dǎo)培養(yǎng)將滅菌后的外植體或培養(yǎng)材料接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)使其生長發(fā)育的過程。2.12繼代培養(yǎng)2.13增殖培養(yǎng)繼代培養(yǎng)材料產(chǎn)生出不定芽或新的組培苗的過程。2.14培養(yǎng)代數(shù)同一培養(yǎng)材料經(jīng)繼代培養(yǎng)的次數(shù)。2.15繁殖倍數(shù)一個(gè)培養(yǎng)周期內(nèi)不定芽增殖倍數(shù)，即培養(yǎng)一個(gè)周期后增殖的不定芽數(shù)/接種時(shí)的不定芽數(shù)。2.16生根培養(yǎng)把不定芽轉(zhuǎn)移到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，形成完整植株的過程。2.17組培室2.18洗滌室洗滌各種玻璃器皿、培養(yǎng)瓶和各種用具以及進(jìn)行植物材料預(yù)處理的場所。2.19培養(yǎng)基配制室33）2.20滅菌室進(jìn)行培養(yǎng)基、無菌水和器械等高壓滅菌的場所。2.21接種室2.22培養(yǎng)室培養(yǎng)材料和組培苗在人工控制溫度、相對(duì)濕度和光照等條件下培養(yǎng)和生長的場所。3 DB5304/T001DB5304/T001—2019DB5304/001DB5304/001—201930工廠化生產(chǎn)可選用自動(dòng)或半自動(dòng)洗瓶機(jī)或人工洗滌，配洗滌室水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱等。（無菌超凈工作臺(tái)、鑷子、剪刀、解剖刀、手術(shù)刀、酒精燈等。培養(yǎng)容器（三角瓶、罐頭瓶、專制塑料瓶、試管等）、培養(yǎng)架、空調(diào)、除濕機(jī)、光照培養(yǎng)箱等。pH量4表1 MS4表1 MS本養(yǎng)的制表4.1 MS4 相設(shè)備、測微尺等。3.3 組培中常用的無機(jī)鹽類、有機(jī)物類、植物生長物質(zhì)、消毒劑等參見附錄A。編號(hào)母液成分規(guī)定量(mg/L)擴(kuò)大倍數(shù)稱取量（mg）母液體積（ml）配制1升培養(yǎng)基吸取量定容4.2 4.2 細(xì)胞分裂素6-BA：先用少量0.1mol/L的鹽酸（HCl）溶解，然后加蒸餾水定容，配成濃度為0.2～0.4mg/ml的母液。生長素NAA：先用少量0.1mol/L的KOH或NaOH溶解，然后加蒸餾水定容，配成濃度為0.01mg/ml的母液。41551大量元素硝酸鉀KNO3190010190001000100硝酸銨NH4NO316501016500硫酸鎂MgSO4·7H2O370103700磷酸二氫鉀KH2PO41701017002氯化鈣CaCl2·2H2O44010440010001003微量元素硫酸錳MnSO4·4H2O22.31002230100010硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.6100860硼酸H3BO36.2100620碘化鉀KI0.8310083鉬酸鈉Na2MoO4·7H2O0.2510025硫酸銅CuSO4.5H2O0.0251002.5氯化鈷CoCL2.6H2O0.0251002.54鐵鹽乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37.31003730100010硫酸亞鐵FeSO4.7H2O27.810027805有機(jī)物甘氨酸C2H5NO22.010010050010鹽酸吡哆醇VB60.510025鹽酸硫銨素VB10.11005煙酸C6H5NO20.5100256肌醇C6H12O6100100500050010pH：用pHpHpH0.1mol/LHCl0.1mol/LNaOHpH5.8～6.0。30ml/1.1kg/cm21.1kg/cm2～1.2kg/cm212120～3006 66 6無菌水、玻璃器皿、接種器滅菌方法同培養(yǎng)基滅菌。接種器械用棉布或紙包好。753011～2（10ml/m3）（KMnO4，5g/m3）熏蒸2～3天，通2～3）3075（）7575150℃～2503075%10～20接種75%3-5250mL510株7575封口全部接種操作完后統(tǒng)一將瓶蓋邊緣用酒精浸泡過的保鮮膜密封。記錄送苗7接種完畢，把瓶苗送到培養(yǎng)室，宜整齊擺放在指定的組培架上。關(guān)機(jī)757.9.1 7.9.2 7.9.3 7.9.4 30%～45%（）2000Lx～3000Lx10h～12h培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)瓶宜擺放整齊，品種應(yīng)分明。）1～288.2 8.2 無病毒975（0.130（）1～2次。（病毒檢測淘汰病毒檢測淘汰初代培養(yǎng)莖尖剝離外植體消毒處理外植體（草莓匍匐莖）選擇和采集含病毒叢芽1.5厘米以上的小苗增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)8 8 8.1 培養(yǎng)瓶清洗、晾干 接種室接種培養(yǎng)瓶清洗、晾干接種室接種外植體準(zhǔn)備培養(yǎng)基配制、分裝、滅菌培養(yǎng)室增殖培養(yǎng)培養(yǎng)室增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)3～5（2～410～15）81，15～83～5470%300.15%～0.20%HgCl24～54～5（8～40）0.2～0.5初代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖3.0%，pH5.8～6.0。將剝離好的莖尖生長點(diǎn)接種于培養(yǎng)基，每瓶培養(yǎng)基接種1個(gè)生長點(diǎn)，培養(yǎng)時(shí)間30～60天。隨機(jī)抽取初代培養(yǎng)獲得的無菌苗送往具有資質(zhì)認(rèn)定的植物病毒檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行電鏡負(fù)染色觀察檢測，達(dá)到脫毒效果（無病毒）的繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，否則及時(shí)淘汰。（（20～3010MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.01MS+6-BA0.8mg/LNAA0.01mg/LMS+6-BA0.4mg/L+NAA0.01mg/L兩101111MS+6-BA0.4mg/LNAA0.01mg/LpH3.0%、5.8～6.04～5個(gè)芽）101.51025～35（生100%）MS3.0%，pH5.8～6.0。9 經(jīng)過25～35天的生根培養(yǎng)，可以形成以下三個(gè)級(jí)別的脫毒瓶苗。表2草莓脫毒瓶苗分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別根數(shù)（條）葉片數(shù)（片）苗高（厘米）其它一級(jí)5條以上6片以上2.5-5.0根白色，短而粗壯，微有須根二級(jí)3-44-82.0-5.0根微黃，稍長較細(xì)三級(jí)1-24-6片1.5-4.5根細(xì)長，無須根1212附 錄 A（資料性附錄）草莓組培常用化學(xué)試劑、藥品表表A.2 微量素類表A.1 大量表A.2 微量素類化學(xué)名稱技術(shù)指標(biāo)包裝單位硝酸鉀AR500g瓶硝酸銨AR500g瓶硝酸鈣AR500g瓶硫酸銨AR500g瓶氫氧化鈉AR500g瓶二水氯化鈣AR500g瓶七水硫酸鎂AR500g瓶磷酸二氫鉀AR500g瓶磷酸二氫鈉AR500g瓶過硫酸銨AR500g瓶過磷酸鈣AR500g瓶化學(xué)名稱技術(shù)指標(biāo)包裝單位乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）AR250g瓶乙二胺四乙酸鐵鈉（EDTA-FeNa）CP250g瓶硫酸亞鐵AR500g瓶硫酸錳AR500g瓶硫酸鋅AR500g瓶硼酸AR500g瓶碘化鉀AR500g瓶鉬酸鈉AR500g瓶氯化鈷AR100g瓶硫酸銅AR500g瓶1313表A.4 有機(jī)類表A.5 植物表A.4 有機(jī)類表A.5 植物素類表A.6 消毒劑化學(xué)名稱技術(shù)指標(biāo)包裝單位肌醇 環(huán)六醇99%500g瓶鹽酸硫胺（素）VB199%25g瓶煙酸（尼克酸）VB399%100g瓶D-泛酸鈣VB599%25g瓶維素B12 VB1299%1g瓶化學(xué)名稱技術(shù)指標(biāo)包裝單位甘氨酸99%100g瓶蔗糖AR500g瓶產(chǎn)品名稱技術(shù)指標(biāo)包裝單位6-芐氨基嘌呤6-BA9