生物基因工程浙教選修

生物基因工程浙教選修第1頁(yè)/共13頁(yè)基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是－↓GATC－。根據(jù)圖示,判斷下列操作正確的是（）

A．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

B．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

C．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割

D．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割A(yù)第2頁(yè)/共12頁(yè)第2頁(yè)/共13頁(yè)（山東）2.繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進(jìn)展。最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。（1）將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞，常用方法是

。（2）進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入

中，原因是

。（3）通常采用

技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組。（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的

細(xì)胞中特異表達(dá)。（5）為使外源基因在后代長(zhǎng)期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的

轉(zhuǎn)入

細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體。該技術(shù)稱為

。顯微注射技術(shù)

受精卵（或早期胚胎）受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)DNA分子雜交（核酸探針）膀胱上皮去核的卵核移植（或克隆）細(xì)胞核第3頁(yè)/共12頁(yè)第3頁(yè)/共13頁(yè)對(duì)某一DNA進(jìn)行酶切，用A限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到1個(gè)DNA片段，用B限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到3個(gè)DNA片段，若同時(shí)用A、B限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到4個(gè)DAN片段，則可判斷該DNA有

個(gè)A限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)，有

個(gè)B限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)。13第4頁(yè)/共12頁(yè)第4頁(yè)/共13頁(yè)

第一步：獲取目的基因（目的基因的序列已知）①化學(xué)方法合成目的基因②PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增目的基因2、從基因文庫(kù)中獲取目的基因（目的基因的序列未知）1、人工合成目的基因(根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列直接合成)第5頁(yè)/共12頁(yè)第5頁(yè)/共13頁(yè)（1）來(lái)源：（2）作用：原核生物(主要)識(shí)別和切割DNA分子內(nèi)特定核苷酸序列

即:一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子。（3）特點(diǎn)：專一性(特異性)1、限制性核酸內(nèi)切酶磷酸與脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵（4）作用部位:（5）作用結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端第二步：形成重組DNA分子第6頁(yè)/共12頁(yè)第6頁(yè)/共13頁(yè)2、“分子縫合針”

——DNA連接酶（1）作用：連接DNA片段間的磷酸二酯鍵，將外源基因和載體連接在一起（2）常用種類：①E.coliDNA連接酶：來(lái)源：大腸桿菌作用：只連接黏性末端②T4DNA連接酶：來(lái)源：T4噬菌體作用：連接黏性末端、平末端DNA連接酶比較DNA聚合酶第7頁(yè)/共12頁(yè)第7頁(yè)/共13頁(yè)3、“分子運(yùn)輸車”——運(yùn)載體⒈載體需要的條件：⑴能在受體細(xì)胞中自主復(fù)制、表達(dá)并穩(wěn)定保存⑵有1~多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接⑶有某些標(biāo)記基因，便于篩選

⑷對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害⒉常用運(yùn)載體：

⑴質(zhì)粒⑵噬菌體或某些動(dòng)植物病毒（最常用：大腸桿菌的質(zhì)粒）：環(huán)狀雙鏈DNA第8頁(yè)/共12頁(yè)第8頁(yè)/共13頁(yè)1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)（最多、最有效）3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞CaCl2處理，以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性?；ǚ酃芡ǖ婪ǖ谌剑簩⒅亟MDNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞第9頁(yè)/共12頁(yè)第9頁(yè)/共13頁(yè)第四步：篩選含有目的基因的受體細(xì)胞檢測(cè):轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因常用方法：利用標(biāo)記基因(抗性基因)進(jìn)行篩選或DNA分子雜交技術(shù)第10頁(yè)/共12頁(yè)第10頁(yè)/共13頁(yè)

基因工程是否獲得成功，最重要的是要看目的基因是否在受體細(xì)胞中得到表達(dá)。第五步：目的基因表達(dá)1、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA？

DNA—RNA分子雜交技術(shù)2、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)（表達(dá)）？抗原—抗體雜交如何檢測(cè)目的基因是否表達(dá)？檢測(cè)是否產(chǎn)生了目的基因產(chǎn)物。第11頁(yè)/共12頁(yè)第11頁(yè)/共13頁(yè)SEO（SearchEngineOptimization）:漢譯為搜索引擎優(yōu)化。搜索引擎優(yōu)化是一種利用搜索引擎的搜索規(guī)則來(lái)提高目前網(wǎng)站在有關(guān)搜索引擎內(nèi)的自然排名的方式。SEO的目的理解是：為網(wǎng)站提供生態(tài)式的自我營(yíng)銷解決方案，讓網(wǎng)站在行業(yè)內(nèi)占據(jù)領(lǐng)先地位，從而獲得品牌收益；北京seo/北京seojzh41kbeSEO包含站外SEO和站內(nèi)SEO兩方面；SEO是指為了從搜索引擎中獲得更多的免費(fèi)流量，從網(wǎng)站結(jié)構(gòu)、內(nèi)容建設(shè)方案、用戶互動(dòng)傳播、頁(yè)面等角度進(jìn)行合理規(guī)劃，使網(wǎng)站更適合搜索引擎的索引原則的行為；使網(wǎng)站更適合搜索引擎的索引原則又被稱為對(duì)搜索引擎優(yōu)化，對(duì)搜索引擎優(yōu)化不僅能夠提高SEO的效果，還會(huì)使搜索引擎中顯示的網(wǎng)站相關(guān)信息對(duì)用戶來(lái)說更具有吸引力。——不然你還有其他選擇？”寶音沒有。她警惕的把簪子交給七王爺?！稗D(zhuǎn)身?！逼咄鯛斝Φ?，“不然我怎么分剔？”寶音只好轉(zhuǎn)身，把后腦勺給他。他一手按定寶音的肩，摸到她的肩頭，骨胳纖圓，似女兒家。另一只手，他用簪子，剔出當(dāng)中頭路，旋剔、旋把先一只手從肩上抬起來(lái)，挽住半邊的頭發(fā)，免得又散亂了新剔清的路數(shù)。他接觸到她的頭發(fā)，觸感與他想像的一樣好。他的鼻息吹動(dòng)她后脖頸的細(xì)發(fā)，聞到她領(lǐng)口中散發(fā)出來(lái)的香味，像是半明半昧的黃昏，春正盛，細(xì)細(xì)的桃紅色小花半開半闔、纖瓣半掩著弱蕊。這也完全是女兒家一路的香氣。七王爺想：“這孩子真是天生的孌童?！彼佑|過太多比女孩子更美、更柔弱的男孩子，以至于完全沒猜疑寶音是女扮男裝。第八十五章自毀入宮路（4）頭路剔得，他把簪子還給寶音，寶音接簪在手，忙忙后退，回肘摸了摸頭上，果然沒什么馬腳，便攏起半邊頭發(fā)，綰上去，盤定了，以發(fā)帶系牢，插進(jìn)簪子去。七王爺時(shí)看女眷、丫頭們梳頭，有時(shí)也幫上兩手，從沒見人不借鏡子、自梳自發(fā)，能梳得這樣流暢熟練的，不覺稱奇。寶音結(jié)好這一邊的髻，抬頭看七王爺一眼，想說話，又不敢說。“你講你講?！逼咄鯛斝念^大蕩，但覺對(duì)這孩子，沒什么不能應(yīng)允的要求。“我另一支簪子……”寶音想叫七王爺讓一讓，她好去座位后頭尋那支丟了的簪子?！芭杜?！”七王爺忙忙的從袖子里，把那支簪子拿出來(lái)。被這樣的孩子簪子打到頭，他如果丟在地上、不收進(jìn)袖子里，他也不是憐香惜玉的七王爺了！簪子被他體溫焐得暖融融的。寶音用指尖拈著這簪子，雖無(wú)潔癖，也很有一種“被玷污了”的感覺，然也無(wú)法了，就把另一邊發(fā)髻也挽起。外頭忽有異動(dòng)，似官兵捉賊，又似朝廷拿叛，呼啦啦狼奔蝗突，殺來(lái)好一隊(duì)人馬！這些人有的穿本地城兵服裝、有的著朝廷正式戎裝、有的是太守府里家丁號(hào)衣，有的騎馬、有的徒步，有的佩刀、有的握矛，每種站一隊(duì)，倒也整齊。四個(gè)人引領(lǐng)他們，排成六花圓陣，把酒廬包圍得嚴(yán)嚴(yán)實(shí)實(shí)。酒廬里的所有人，禍從天降，不知自己犯了何事，想驚呼不敢驚呼、想逃不敢逃，都兩股戰(zhàn)戰(zhàn)、目瞪口呆，有那不爭(zhēng)氣的，連褲?rùn)n都濕了。還幸唐靜軒認(rèn)得那領(lǐng)頭的四人，是七王爺?shù)乃膫€(gè)侍衛(wèi)，便抖抖簌簌上前交涉：“大人……”“我們王爺呢？”健銳營(yíng)侍衛(wèi)面色鐵青?！八碧旗o軒也多喝了幾杯，愣沒