乳與乳制品微生物檢驗(yàn)食品中大腸菌群的檢測

乳與乳制品微生物檢驗(yàn)食品中大腸菌群的檢測YLNB3.21、引用依據(jù)：GB/T4789.3-20032、術(shù)語和定義中有否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100ml(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。3、儀器及器材3.1恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃；3.2冰箱：0-4℃；3.3恒溫水浴鍋：46±1℃；天平；顯微鏡；均質(zhì)器或乳缽；90mm；3.8滅菌試管：18×18020×200；滅菌吸管：1ml10ml；500ml；5mm；大腸菌群檢驗(yàn)程序:檢樣大腸菌群檢驗(yàn)程序:檢樣稀釋乳糖膽鹽發(fā)酵管36±1℃，24±2h不產(chǎn)氣產(chǎn)氣大腸菌群陰性伊紅美蘭瓊脂平板36±1℃，18~24h報(bào)告革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管36±1℃，24±2h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽孢桿菌產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陰性大腸菌群陽性酒精燈；試管架；4、培養(yǎng)基和試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管；伊紅美蘭瓊脂平板；乳糖發(fā)酵管；生理鹽水；5、檢驗(yàn)程序6、方法檢樣稀釋25ml（g）225ml生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）1：108000～10000r/min1min1：101ml1：1001ml101ml3查樣品中有無發(fā)酵產(chǎn)生氣體的細(xì)菌）1ml用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml1ml336±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培目的在于檢查乳糖初發(fā)酵試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)在）將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美蘭瓊脂平板上，置 36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)18～24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，做革蘭氏染色和證實(shí)實(shí)驗(yàn)。證實(shí)實(shí)驗(yàn)（復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)）酵試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)的試管內(nèi)分離到的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體)1～236±1±2h無芽孢桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陰性。報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)查MPN檢索表,報(bào)告每100mlg）大腸菌群的最可能數(shù)（見表17、注意事項(xiàng)初發(fā)酵和證實(shí)試驗(yàn)不代表大腸菌群陽性，因此，必須作進(jìn)一步證實(shí)試驗(yàn)。產(chǎn)氣量與倒管試驗(yàn)表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量與大腸菌群的檢出率呈正相關(guān)系。但也隨樣品的種類而變。大腸菌群的產(chǎn)氣量多者可充滿整個倒氣管，少者可產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。如果對如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。另外，產(chǎn)氣量與倒氣管有一定的關(guān)系，倒氣管口氣體的進(jìn)入。挑選菌落2～3試驗(yàn)，以免出現(xiàn)假陰性。抑菌劑大腸菌群檢驗(yàn)中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸抑菌劑的添加應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法添加。指示劑pH5.2～6.8紫，當(dāng)料管中培養(yǎng)基的顏色由紫色變黃色時(shí)，證明培養(yǎng)基中有酸性物質(zhì)產(chǎn)生，此時(shí)培養(yǎng)基的 PH≤5.2，培養(yǎng)基呈酸性。MPNMPN概率論來推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN降低或增加10倍。置于溫箱內(nèi)，同時(shí)培養(yǎng)，作為空白。檢查初發(fā)酵試驗(yàn)的乳糖膽鹽管內(nèi)是否有乳糖分解菌存在時(shí)，應(yīng)以產(chǎn)氣為主，產(chǎn)酸僅作參考。因?yàn)榕囵B(yǎng)基中所用PH6.0視為陽性。成黑色物，故菌落呈紫黑色（大腸桿菌）或褐色（伯氏菌等，前者有時(shí)還產(chǎn)生有金屬光澤。表1大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢陽性管數(shù)MPN陽性管數(shù)MPN陽性管數(shù)MPN110-110-2 100ml(g)110-110-2 100ml(g)000 ＜30200 90001 30201 1400026020220000390203260010302101500116021120001290212270013120213340020602202100219022128002212022235002316022342003090230290031130231360032160232440033190233530100403002301017030139010211030264010315030395011070310430111110311750112150312120011319031316001201103209301211503211500122200322210012324032329001301603302400131200331460013224033211000133290333≥24000