抗核抗體檢測的質(zhì)量要求及結(jié)果的合理判讀

抗核抗體檢測的質(zhì)量要求及結(jié)果的合理判讀李曉軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院全軍臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所第一頁，共五十三頁。自身免疫性疾病第二頁，共五十三頁。自身免疫病(Autoimmunediseases,AID)主要病理基礎(chǔ)：血清中存在有一種或多種針對自身組織成份的抗體標(biāo)志物及自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞致病機(jī)制：自身抗體和自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞在AID的發(fā)病過程中起重要作用1)體液免疫：由自身抗體介導(dǎo)→Ⅱ、Ⅲ過敏反應(yīng)導(dǎo)致的組織損傷2)細(xì)胞免疫：自身反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用3)二者共同參與：抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC）4)……第三頁，共五十三頁。自身免疫病的系統(tǒng)受累AID的類型：1）器官特異性AID2）系統(tǒng)性AID（非器官特異性）AID主要特征：1）相關(guān)的臨床癥狀2）ESR增高,血清Ig↑,自身抗體、CIC陽性,血清補(bǔ)體(C3、C4)活性降低3）有病變且病變處存在有與自身抗原分布相關(guān)的免疫活性細(xì)胞或抗體4）將相關(guān)抗原給動物注射時能重復(fù)出類似人的疾病，當(dāng)被動輸入淋巴細(xì)胞或抗體時可將疾病從患病動物轉(zhuǎn)移給正常動物第四頁，共五十三頁。自身免疫病的“病譜”器官特異性非器官特異性橋本甲狀腺炎擴(kuò)張性心肌炎自身免疫性溶血性貧血系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液水腫惡性貧血特發(fā)性血小板減少性紫癜干燥綜合征甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)自身免疫性胃炎特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎Addisino病1型糖尿病重癥肌無力多發(fā)性硬化癥脫髓鞘疾病尋常型天皰瘡類天皰瘡自身免疫性肝炎 原發(fā)性膽汁性肝硬化原發(fā)性硬化性膽管炎 潰瘍性結(jié)腸炎 克羅恩病自身免疫性腎小球腎炎 肺腎出血綜合征絕經(jīng)過早（少數(shù)病例） 男性不育（少數(shù)病例） 交感性眼炎 晶狀體源性葡萄膜炎硬皮病多發(fā)性肌炎/皮肌炎混合性結(jié)締組織病系統(tǒng)性血管炎 抗磷脂綜合征 藥物性狼瘡第五頁，共五十三頁。自身免疫病共同特征1.病因不明2.女性居多，發(fā)病率隨年齡增加而增加3.有遺傳傾向4.患者血清中有多種自身抗體或自身反應(yīng)性致敏淋巴細(xì)胞5.疾病有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上自身免疫病6.病程一般較長，多遷延為慢性7.病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤8.免疫抑制劑治療可取得一定療效第六頁，共五十三頁。自身免疫病主要實(shí)驗(yàn)檢查自身抗體免疫球蛋白補(bǔ)體淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子第七頁，共五十三頁。自身抗體與臨床疾病的關(guān)系天然自身抗體：維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定靶抗原：肌動蛋白、肌球蛋白、角蛋白、DNA、膠原、Ig、細(xì)胞因子等，多為IgM型、低滴度；病理性自身抗體：在免疫風(fēng)濕病的發(fā)病過程中起重要作用

1）診斷、鑒別診斷：抗dsDNA、抗Sm抗體與SLE；抗CCP與RA；AoAb與、女性不育、流產(chǎn)有關(guān)者2）疾病監(jiān)測、預(yù)后判定：抗dsDNA為SLE疾病活動標(biāo)志第八頁，共五十三頁。自身抗體的特性自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關(guān)參與免疫病理性損傷第九頁，共五十三頁。常檢測的自身抗體抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（A-ENA）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）類風(fēng)濕因子（RF）抗角蛋白抗體（AKA）抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）第十頁，共五十三頁?？购丝贵w（ANA）抗核抗體:針對真核細(xì)胞（HEp-2、肝細(xì)胞）各種核成分靶抗原的自身抗體的總稱。第十一頁，共五十三頁。

抗核抗體（ANA）抗DNA抗體（anti-dsDNA，anti-ssDNA）抗組蛋白抗體（histones:H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B）

抗ENA（抗:Sm,nRNP,SSA/Ro,SSB/La, rRNP,Scl-70,Jo-1,PCNA,.…）ANAs抗非組蛋白抗體

抗著絲點(diǎn)抗體（anti-CENP-A,B,C，D，F(xiàn)，G）抗核仁抗體抗其他細(xì)胞成分抗體（高爾基體，中心體，紡錘體，線粒體，溶酶體， 肌動蛋白，Vimentin，細(xì)胞角蛋白，Lamin…)第十二頁，共五十三頁。1.2.3.4.抗核抗體譜的分類和命名以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；以抗原的化學(xué)名稱分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體,抗核小體抗體等。第十三頁，共五十三頁。常規(guī)臨床診斷ANA種類:數(shù)十種新自身抗體和檢測方法:陸續(xù)被引進(jìn)臨床實(shí)驗(yàn)室為臨床醫(yī)生提供更多的選擇和診斷指標(biāo)另一方面也帶來一定的困惑?第十四頁，共五十三頁。如何根據(jù)患者病情挑選具有診斷價值的最佳自身抗體組合?如何選擇合理的檢測方法，并對結(jié)果作出正確的判斷?

將為患者得到及時準(zhǔn)確的診斷和治療發(fā)揮至關(guān)重要的作用!第十五頁，共五十三頁。免疫檢驗(yàn)工作者的目的:廣泛向臨床醫(yī)生宣傳有關(guān)ANA項(xiàng)目及其檢測技術(shù)的價值及其限制，宣傳ANA選擇的適應(yīng)征及有效性，從而對檢測結(jié)果作出科學(xué)合理的判讀。第十六頁，共五十三頁。保證檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性讓臨床醫(yī)生了解各種測定方法的特性包括方法的精確度、靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值、似然比等，關(guān)系到醫(yī)生如何準(zhǔn)確地選擇這些檢測項(xiàng)目服務(wù)于患者，并合理地利用資源。第十七頁，共五十三頁。敏感性（sensitivity）特異性（specificity）敏感性:某檢驗(yàn)項(xiàng)目對某病具有鑒別、確認(rèn)的能力患者陽性結(jié)果的百分比特異性:某檢驗(yàn)項(xiàng)目排除無某病的能力非患者陰性結(jié)果的百分比敏感性和特異性取決于所選用的cut-off值某法敏感性越高，特異性就越低，反之亦然應(yīng)優(yōu)選能獲得最佳敏感性和特異性組合的cut-off值第十八頁，共五十三頁。敏感性和特異性并不能告訴醫(yī)生陽性結(jié)果的個體是否患某種疾病，陰性結(jié)果的個體是否不患某種疾病

而臨床醫(yī)生關(guān)心的是，ANA陽性者中有多少是CTD患者；ANA陰性者中有多少不是CTD患者。PPV和NPV即回答這一問題第十九頁，共五十三頁。陽性預(yù)測值（PPV）陰性預(yù)測值（NPV）PPV：試驗(yàn)結(jié)果陽性者中真正患病的概率NPV：試驗(yàn)結(jié)果陰性者中未患病的概率PPV和NPV是臨床試驗(yàn)中對試驗(yàn)有用性的正確評價指標(biāo)PPV和NPV受人群患病率的影響：患病率↓：PPV↓，NPV↑理想的ANA試驗(yàn)：高PPV：大部分陽性結(jié)果者是CTD患者高NPV：大部分陰性結(jié)果者不患CTD第二十頁，共五十三頁。ANA檢測的選擇原則臨床醫(yī)生選擇ANA檢測的目的：1）在有典型癥狀患者中作出CTD的診斷2）在癥狀不確定患者中排除CTD的診斷3）明確CTD的類別4）判斷病情活動度第二十一頁，共五十三頁。ANA檢測的選擇原則通常原則:１）首先采用以HEp-2細(xì)胞為基質(zhì)片的IFA作為篩查實(shí)驗(yàn)，以有效地排除CTD的存在

２）ANA陽性→進(jìn)一步檢查抗ds-DNA或抗ENA抗體，以期對CTD作出特異性地診斷。３）不主張單獨(dú)用抗—ENA抗體作為篩查實(shí)驗(yàn)第二十二頁，共五十三頁。ANA免疫學(xué)測定方法瓊脂雙向擴(kuò)散或?qū)α髅庖唠娪究筪s-DNA，抗Sm，抗U1RNPFarr試驗(yàn)：抗ds-DNA間接免疫熒光技術(shù)：細(xì)胞內(nèi)抗原自身抗體檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”(篩查)抗核抗體(ANA)、抗ds-DNA抗體、抗平滑肌抗體(ASMA)、ANCA等酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):自身抗體確認(rèn)免疫印跡＆免疫斑點(diǎn)技術(shù):自身抗體確認(rèn)ENA多肽抗體譜、AMA(M2/M4/M9)、抗LKM-1、抗LC-1、抗SLA/LP等微陣列免疫芯片技術(shù)懸浮芯片技術(shù)第二十三頁，共五十三頁。

IFA－ANAIFA－篩查ANA有效的“金標(biāo)準(zhǔn)”基質(zhì)片抗原：鼠肝勻漿組織 ↓ 敏感性差，不能測出抗SSA

Hep-2細(xì)胞

↓陽性檢出率高

Ro60cDNA轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞（Hep-2000TM）可顯著提高檢測抗SSA/Ro抗體的敏感性第二十四頁，共五十三頁。1)IFA－ANA如何鑒別假陽性現(xiàn)象(滴度,核型)?血清稀釋度：1:40：健康人ANA＋％高達(dá)30%；1:160：＋％則僅5%高滴度的ANA陽性結(jié)果方有診斷意義2)核型:3)A-ENA:健康人A-ENA常為陰性第二十五頁，共五十三頁。Mariz.ArthRheumatol,2011,63:191ANA-IFA核型有助于區(qū)別正常人ANA+和ARDANA+?密而細(xì)顆粒型第二十六頁，共五十三頁。抗核膜抗體(抗板層素抗體)熒光模式:在核膜區(qū)呈現(xiàn)線狀熒光,中心區(qū)域熒光強(qiáng)度弱(Hep-2),而肝細(xì)胞片:中心區(qū)域發(fā)暗,無熒光,此點(diǎn)可與核均質(zhì)熒光相區(qū)別.靶抗原:包括60kD,68kD和74kD3種蛋白組分,與中間絲相關(guān),以網(wǎng)狀形式包被在核內(nèi)膜的內(nèi)部.相關(guān)疾病:慢性活動性自身免疫性肝炎的活動期.ANA(均質(zhì)型)熒光模式:Hep-2細(xì)胞:間期細(xì)胞核陽性,呈均勻的熒光;核仁與核漿一樣呈強(qiáng)度相同的均質(zhì)熒光;分裂期染色體陽性(增強(qiáng)),亦呈均勻的熒光.肝細(xì)胞片:肝細(xì)胞核陽性,呈均勻的熒光,與Hep-2細(xì)胞的熒光強(qiáng)度一致.主要相關(guān)自身抗體:抗ds-DNA,核小體和組蛋白抗體等.EUROIMMUN第二十七頁，共五十三頁。

粗顆粒型 抗RNP/Sm抗體

熒光模式: §Hep-2細(xì)胞:間期時,整個細(xì)胞核呈現(xiàn)粗顆粒,但有 時也出現(xiàn)中等到細(xì)的顆粒熒光,核仁為陰性;在分裂 期細(xì)胞中,濃縮的染色體部位為陰性,而外周區(qū)幾乎 為均質(zhì)型、光滑的熒光. §靈長類肝組織切片:細(xì)胞核亦呈現(xiàn)顆粒型熒光,核

仁為陰性,熒光強(qiáng)度與Hep-2細(xì)胞相同.

細(xì)顆粒型 抗SS-A/SS-B抗體熒光模式:§Hep-2細(xì)胞:間期細(xì)胞核呈現(xiàn)細(xì)顆粒型熒光,核仁有部分不發(fā)熒光。分裂期細(xì)胞在染色體以外顯示顆粒熒光,而染色體本身則不發(fā)熒光.§靈長類肝組織切片:肝細(xì)胞核及部分核仁可見細(xì)顆粒熒光,細(xì)胞漿不發(fā)熒光.§在某些細(xì)胞（如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）中的熒光反應(yīng)較強(qiáng)EUROIMMUN第二十八頁，共五十三頁。ANA常見核型與疾病關(guān)系DiagnosticPathology2009,4:1第二十九頁，共五十三頁。ANA臨床診斷CTD特性DiagnosticPathology2009,4:1第三十頁，共五十三頁。ArthRheumat,2002,47,pp434–444ANA(+)臨床診斷意義對疾病診斷非常重要

SLE、系統(tǒng)性硬化病對疾病診斷有一定作用干燥綜合征、多發(fā)性肌炎-皮肌炎對監(jiān)測預(yù)后非常重要幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、雷諾現(xiàn)象疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)的重要組成部分藥物引起的狼瘡、混合性結(jié)締組織病對疾病診斷、監(jiān)測預(yù)后沒有作用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、甲狀腺疾病、傳染病、特發(fā)性血小板減少性紫癜纖維組織肌痛第三十一頁，共五十三頁。IFA法檢測ANA時應(yīng)注意的問題ANA滴度和熒光圖譜不能作為判斷抗體特異性的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果陽性時應(yīng)進(jìn)一步作特異性抗核抗體項(xiàng)目的檢查．IFA限制:*ANA(-)，抗ds-DNA(+)，抗ENA(+)→技術(shù)誤差SLE特殊類型*某些ANA(抗SSA/Ro、抗SSB/La)用IFA難以測出*Jo-1抗原屬于胞漿抗原，IFA檢測ANA陰性時不能排除抗Jo-1的可能第三十二頁，共五十三頁。IFA法檢測ANA時應(yīng)注意的問題如果臨床高度懷疑CTD，應(yīng)同時做ANA和抗ENA抗體，即使ANA(-)，也要進(jìn)行抗ENA抗體的檢測，否則會漏檢一些ANA如抗SSA/Ro、SSB/La或抗Jo-1抗體。第三十三頁，共五十三頁。IFA法檢測ANA時應(yīng)注意的問題由于目前國內(nèi)缺乏合適的質(zhì)控品，檢測結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間很難做到標(biāo)準(zhǔn)化。每個實(shí)驗(yàn)室必須規(guī)范化各自的操作規(guī)程，確立各自的cut-off值，使判斷標(biāo)準(zhǔn)兼顧到診斷敏感性和診斷特異性的平衡。應(yīng)該參加當(dāng)?shù)鼗驀业氖议g質(zhì)量評價（externalqualityassessment，EQA）計(jì)劃。目前，國際上已有抗核抗體的標(biāo)準(zhǔn)參考品結(jié)果解釋應(yīng)密切結(jié)合其他臨床指標(biāo)第三十四頁，共五十三頁。ANA室間結(jié)果很難具備可比性

15個國際Lab同時用HEp-2-IFA進(jìn)行ANA的檢

測，所獲得的平均變異系數(shù)（CV）值如下：

1:401:80室內(nèi)CV（%）16.513.1室間CV（%）50.744.31:160 12.2 37.91:320 12.8 36.0

每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)各自情況，建立本室的cut-off值，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和可比性第三十五頁，共五十三頁。部分自身抗體的國際參考品

參考品WHOWo80WHO1064

特異性

dsDNA100IU/ampoule均質(zhì)型ANA100IU/ampouleMRC參考品A均質(zhì)型ANA100IU/ampouleWHO1063WHO1061CDC參考品

nRNP IgMANA100IU/ampouledsDNA、La、U1-RNP、Sm、

Ro、中心粒、Scl70、Jo-1第三十六頁，共五十三頁?？筪s-DNA檢測抗ds-DNA與SLE及狼瘡性腎炎的發(fā)生及其活動程度密切相關(guān)。檢測常用短膜蟲IFA（CLIF）、Farr試驗(yàn)和ELISA技術(shù)。Farr試驗(yàn)是經(jīng)典的特異性檢測方法，但可測出高親和力的IgM類抗ds-DNA。目前臨床推薦使用的是測IgG類抗ds-DNA的ELISA和CLIF第三十七頁，共五十三頁。

單鏈DNA,變性的DNA(嘌呤和嘧啶堿基)

雙鏈DNA,天然DNA(氧核糖核酸骨架)

相關(guān)疾病:

風(fēng)濕病:ssDNA:SLE:80.8%;Sj?gren‘s綜合征:40.0%;

硬皮病:44.0%;RA:12.3%(歐蒙)

健康獻(xiàn)血員:6.8%(歐蒙)

風(fēng)濕病:dsDNA:SLE:30%-90%;歐蒙(51.7%)

抗dsDNA抗體

ANA(均質(zhì)型)組蛋白抗體：抗原:組蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4(主要的靶抗原為H1和H2B);功能:核小體的形成相關(guān)疾病:藥物誘導(dǎo)性LE:100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標(biāo)志性抗體);SLE:40%-80%、歐蒙(56.4%);在其他風(fēng)濕病中很少見抗核小體抗體:抗原:組蛋白和DNA形成的復(fù)合物;功能:染色體的功能亞單位。相關(guān)疾病:SLE:58%(歐蒙研究)

歐蒙第二代:對SLE的特異性為100%EUROIMMUN第三十八頁，共五十三頁。使用注意事項(xiàng)（1）不同組織來源（哺乳類或非哺乳類）的DNA做固相抗原，會有不同的結(jié)果（2）某些試驗(yàn)可測出不同Ig類別的抗ds-DNA。如Farr試驗(yàn)， 或用多克隆抗人Ig抗體建立的ELISA或CLIF可檢測出IgM類 抗ds-DNA。該類抗ds-DNA無診斷SLE的特異性。因此應(yīng)該

采用檢測IgG類抗ds-DNA的ELISA或CLIF第三十九頁，共五十三頁。使用注意事項(xiàng)（3）高親和力抗ds-DNA對SLE特別是狼瘡性腎炎有特異性診 斷價值，低親和力抗體則無。但ELISA往往能測出低親和 力的抗ds-DNA，因此若ELISA結(jié)果陽性，必須用CLIF或

Farr試驗(yàn)予以確認(rèn)。（4）CRP和ssDNA在Farr試驗(yàn)、脂蛋白-IgG復(fù)合物在CLIF中可引起假陽性結(jié)果（5）嚴(yán)格執(zhí)行室內(nèi)質(zhì)量控制以確保檢測結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間的可比性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該參加室間質(zhì)量控制（EQA）計(jì)劃第四十頁，共五十三頁?？箍商崛⌒院丝乖‥NA）抗體譜的檢測?抗Sm抗體：SLE標(biāo)記性抗體（20%~30%）?抗nRNP抗體：MCTD95%~100%（高滴度）?抗SSA抗體：PSS60%~75%，其它CTD?抗SSB抗體：PSS10%~40%，其它CTD?抗Scl-70抗體：SSc25%~75%,標(biāo)記性抗體?抗Jo-1抗體：PM/DM25%，標(biāo)記性抗體?抗組蛋白抗體：SLE特異性抗體（50%~70%）第四十一頁，共五十三頁?？笶NA抗體檢測方法雙向免疫擴(kuò)散（ID）對流免疫電泳（CIE）免疫印跡法（Western-blot）免疫斑點(diǎn)ELISA酶免疫斑點(diǎn)法第四十二頁，共五十三頁。DID和CIEP抗原與抗體在瓊脂(或瓊脂糖)凝膠中擴(kuò)散或電場泳動中相遇形成沉淀線，通過對沉淀線的鑒別和用陽性血清作對照來進(jìn)行判斷。經(jīng)典的檢測ENA抗體的方法CIEP的敏感性和特異性＞DID某些帶負(fù)電荷較少的抗原如Scl-70，在CIEP中的移動方向會與抗體一致而不形成沉淀線優(yōu)點(diǎn)：操作便利，特異性高，缺點(diǎn)：果判斷帶有一定的主觀性，需要經(jīng)驗(yàn)，耗時長，不易獲得陽性標(biāo)準(zhǔn)血清第四十三頁，共五十三頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)操作快速簡便，自動化程度高，定性和定量分析關(guān)鍵是獲取純化的特異抗原。重組抗原由于純度的提高，也大大提高了檢測的特異性存在的問題：１）重組抗原中可能混有大腸桿菌抗原，患者體內(nèi)的抗菌體蛋白抗體在試驗(yàn)中可能造成假陽性反應(yīng)２）重組抗原缺乏翻譯后折疊修飾過程，不能形成天然 二級、三級結(jié)構(gòu)，可能丟失某些空間構(gòu)像的表位，導(dǎo) 致實(shí)驗(yàn)的假陰性反應(yīng)。采用真核系統(tǒng)表達(dá)重組抗原有 助于解決這類問題。第四十四頁，共五十三頁。免疫印跡技術(shù)（IB）特異性和敏感性比DID、CIEP高，能在一次檢測中，同時完成對多種特異性ＡＮＡ（抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗J0-1及抗核糖體抗體等）的識別和過篩因?yàn)榭乖?jīng)SDS后發(fā)生變性，該法檢測的是抗線型抗原表位的抗體蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印效果不佳，本底染色深SSA抗原轉(zhuǎn)印效果差，加上15%的抗SSA抗體僅識別立體構(gòu)象的抗原表位，檢測抗SSA的敏感性要低于CIEP和ELISA；也不能測出某些抗Scl-70抗體第四十五頁，共五十三頁。第四十六頁，共五十三頁。免疫斑點(diǎn)技術(shù)（IB）IB繞過凝膠電泳，直接將純化的自身抗原包被在NC膜上由于抗原位置固定，結(jié)果判斷比WB簡單、可靠包被抗原純度高，膜條上沒有多余蛋白，顯色后非特異背景比WB要弱第四十七頁，共五十三頁。第四十八頁，共五十三頁。Jo-1Centro

液態(tài)芯片技術(shù)目前，國際上有BMD、Bio－RadDiagnostics、INOVADiagnostics、ZEUSScientific基于液芯平臺ANA檢測產(chǎn)品國內(nèi)尚未常規(guī)開展SSASSBRNPScl-70SmmereBDNAChrom atin第四十九頁，共五十三頁。

迄今為止還沒有一種檢測抗ENA既高特異又高敏感的方法。歐洲ConsensusWorkshops曾推薦采用兩種或兩種以上的方法檢測抗ENA抗體，由于費(fèi)用昂貴，目前難以廣泛采納。某些實(shí)驗(yàn)室采用ELISA-CIEP聯(lián)合應(yīng)用檢測技術(shù)來解決ELISA低親和力的問題，例如，先用簡便快速的ELISA篩查抗ENA抗體，陽性標(biāo)本再用CIEP予以確認(rèn)，但常規(guī)實(shí)驗(yàn)室也難以接受第五十頁，共五十三頁。ELISADIDCIEPHAANA測定方法比較

方法

IF‐ANAWestern

blot

優(yōu)點(diǎn)經(jīng)濟(jì)、易操作、高靈敏度和特異性自動化、可定量、高靈敏度、可進(jìn)行抗體分類經(jīng)濟(jì)、高特異性、可同時檢測多種抗體經(jīng)濟(jì)有效、高特異性、可同時檢測多種抗體、比雙擴(kuò)散快半定量、高特異性比DID和CIE更靈敏、高特異性

不足耗時、假陽性、ENA分類困難需要積累經(jīng)驗(yàn)假陽性、昂貴、需純化抗原低靈敏度、主觀判讀、需大量陽性血清參照物靈敏度一般、主觀判讀、需大量陽性血清參照物耗時、需純化抗原昂貴、耗時、只能檢測線性抗原Dot/Line

blot易操作、快速、高靈敏度和特異性、定性、某些抗體難以區(qū)分可自動化

MIAFlowcytometry可同時檢測多種抗體、可定量經(jīng)濟(jì)有效、自動化、高靈敏度昂貴每次只提供一個結(jié)果Microarray可同時檢測多種抗