環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法

第三章

環(huán)境毒理學(xué)基本研究方法毒理學(xué)試驗(yàn)調(diào)查研究環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第1頁(yè)毒理學(xué)

試驗(yàn)基礎(chǔ)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第2頁(yè)

研究方法流行病學(xué)研究受控臨床研究毒理學(xué)體內(nèi)試驗(yàn)毒理學(xué)體外試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)·真實(shí)暴露條件·要求限定暴露條·易于控制暴露條件·影響原因少，易于控·在各化學(xué)物之間發(fā)生相·在人群中測(cè)定反應(yīng)·能測(cè)定各種效應(yīng)

制

互作用·對(duì)某組人群(如哮喘)·能評(píng)價(jià)宿主特征作用·可進(jìn)行一些深入研·測(cè)定在人群作用

研究是有力(如：性別、年紀(jì)、遺究(如：機(jī)制，代謝)·表示全部人敏感性·能測(cè)定效應(yīng)強(qiáng)度

傳特征等和其它調(diào)控因·人力物力花費(fèi)較少

素飲食等)·能評(píng)價(jià)機(jī)制缺點(diǎn)·耗資、耗時(shí)多·耗資多·動(dòng)物暴露與人暴露相關(guān)·不能全方面反應(yīng)毒作用·多為回顧性，無(wú)健康·較低濃度和較短時(shí)

不確定性

不能作為毒性評(píng)價(jià)和

保護(hù)間暴露·受控喂養(yǎng)條件與人

危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)最終依·難以確定暴露，有混雜·限于較少許人群

實(shí)際情況不一致

據(jù)

暴露問(wèn)題(普通<50)

·暴露濃度和時(shí)間?！るy以觀察慢性毒作用·可檢測(cè)危險(xiǎn)性增加必·限于暫時(shí)、微小、

式顯著地不一樣于人群

需到達(dá)2倍以上

可逆效應(yīng)暴露·測(cè)定指標(biāo)較粗(發(fā)病率，·普通不適于研究最

死亡率)

敏感人群毒理學(xué)研究方法優(yōu)缺點(diǎn)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第3頁(yè)1試驗(yàn)動(dòng)物和人對(duì)外源化學(xué)物反應(yīng)敏感性不一樣，有時(shí)甚至存在著質(zhì)差異2高劑量向低劑量外推不確定性3小數(shù)量試驗(yàn)動(dòng)物到大量人群外推不確定性4成年健康動(dòng)物向年老體弱及患病個(gè)體外推不確定性試驗(yàn)動(dòng)物毒理學(xué)試驗(yàn)資料外推到人群接觸安全性時(shí)不確定性環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第4頁(yè)1化學(xué)物在試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生作用，能夠外推于人?；炯僭O(shè)①人是最敏感動(dòng)物物種；②人和試驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)過(guò)程與體重(或體表面積)相關(guān)。2試驗(yàn)動(dòng)物必須暴露于高劑量，這是發(fā)覺(jué)對(duì)人潛在危害必需和可靠方法。

3成年健康(雄性和雌性未孕)試驗(yàn)動(dòng)物和人可能暴露路徑是基本選擇。描述毒理學(xué)試驗(yàn)基本標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第5頁(yè)1受試物毒作用表現(xiàn)和性質(zhì)

2劑量—反應(yīng)(效應(yīng))研究

3確定毒作用靶器官

4確定損害可逆性

毒理學(xué)毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)基本目標(biāo)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第6頁(yè)試驗(yàn)動(dòng)物（laboratoryanimal）指經(jīng)人工培育，對(duì)其攜帶微生物實(shí)施控制，遺傳背景明確，起源清楚，可用于科學(xué)研究動(dòng)物。試驗(yàn)動(dòng)物選擇環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第7頁(yè)試驗(yàn)動(dòng)物選擇物種選擇

選擇對(duì)外液化學(xué)物毒性反應(yīng)及代謝特點(diǎn)與人類(lèi)靠近物種；選擇自然壽命不太長(zhǎng)物種；選擇易于喂養(yǎng)和試驗(yàn)操作物種；選擇經(jīng)濟(jì)并易于取得物種。

環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第8頁(yè)近交系動(dòng)物連續(xù)20代以上兄妹交配或親子交配培育突變系動(dòng)物突變基因可世代相傳并保持遺傳基因特征雜交群動(dòng)物兩個(gè)不一樣近交系之間有目標(biāo)進(jìn)行交配，所產(chǎn)生第一代動(dòng)物，亦稱雜交一代動(dòng)物。封閉群動(dòng)物5年以上不從外部引進(jìn)新血緣，僅由同一品系動(dòng)物在固定場(chǎng)所保留繁殖動(dòng)物群

試驗(yàn)動(dòng)物選擇品系選擇環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第9頁(yè)無(wú)菌動(dòng)物體內(nèi)外均無(wú)任何微生物和寄生蟲(chóng)無(wú)特定病原體動(dòng)物（SPF）體內(nèi)無(wú)特定微生物和寄生蟲(chóng)存在動(dòng)物(無(wú)傳染病)。喂養(yǎng)于封閉系統(tǒng)。清潔動(dòng)物與SPF不一樣：抗體檢驗(yàn)常有腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒等抗體滴度，但不應(yīng)有臨床癥狀、病理改變及自然死亡。喂養(yǎng)在半屏蔽系統(tǒng)。微生物控制選擇試驗(yàn)動(dòng)物選擇環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第10頁(yè)個(gè)體選擇

1年紀(jì)2性別3生理狀態(tài)4健康情況

試驗(yàn)動(dòng)物選擇環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第11頁(yè)

品系周齡 Wistar SD 雌性 雄性 雌性 雄性 3 54 56 50 52 4 91 97 86 101 5 134 134 130 150 6 166 187 172 206 7 209 233 210 262 8 214 297 240 318 9 232 325 258 365 10 246 370 272 399 大鼠體重與周齡關(guān)系環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第12頁(yè)

小鼠體重與周齡關(guān)系

品系周齡 昆明 BALB/c C57BL/6 615 雌性 雄性 雌性 雄性 雌性 雄性 雌性 雄性

0 1.95 2.10 1.40 1.46 1.40 1.44 1.58 1.58 1 5.54 5.82 3.35 3.50 3.42 3.50 4.64 4.64 2 7.90 8.35 5.50 5.60 5.55 5.60 7.96 7.96 3 13.55 14.80 7.32 7.40 6.40 6.90 9.83 9.83 4 21.35 22.60 11.60 12.45 12.20 12.57 15.75 19.00 5 27.90 33.25 14.75 16.10 16.90 18.10 20.75 22.58 6 32.80 39.25 15.60 17.40 18.40 20.50 21.88 25.96 7 34.70 39.90 16.10 18.65 19.00 21.60 23.12 27.96 8 34.80 40.05 18.16 20.25 20.25 22.40 24.16 28.83 環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第13頁(yè)1未處理對(duì)照組(空白對(duì)照組)：本底值，質(zhì)量控制2陰性(溶劑／賦形劑)對(duì)照：與染毒組比較基礎(chǔ)3陽(yáng)性對(duì)照：檢測(cè)試驗(yàn)體系有效性4歷史性對(duì)照：檢驗(yàn)試驗(yàn)體系穩(wěn)定性，即進(jìn)行試驗(yàn)室質(zhì)量控制和確保

毒理學(xué)試驗(yàn)慣用對(duì)照環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第14頁(yè)

對(duì)各個(gè)毒理學(xué)試驗(yàn)應(yīng)該用同一個(gè)、同一批號(hào)受試物

受試物成份和配方必須固定

如是異構(gòu)體混合物，異構(gòu)體百分比必須固定

活性成份百分含量和可檢測(cè)雜質(zhì)濃度也應(yīng)固定

受試物在貯存期內(nèi)穩(wěn)定性和在飼料中穩(wěn)定性必須進(jìn)行研究并匯報(bào)

受試物應(yīng)一次備齊全部試驗(yàn)用量受試樣品環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第15頁(yè)毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)學(xué)要求

隨機(jī)、重復(fù)、對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)常規(guī)毒理學(xué)試驗(yàn)資料統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料：普通用t檢驗(yàn)或ANOVA記數(shù)資料：卡方檢驗(yàn)毒理學(xué)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第16頁(yè)1處理組與對(duì)照組比較差異有沒(méi)有顯著性2有沒(méi)有劑量-反應(yīng)關(guān)系3是否伴有其它相關(guān)參數(shù)改變4是否在“正?！敝捣秶?/p>

試驗(yàn)結(jié)果判斷環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第17頁(yè)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)一、急性毒性試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：1、確定供試化學(xué)物急性毒性劑量—反應(yīng)關(guān)系和中毒特征；2、求LD50或LC50,為急性毒性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。3、研究毒物毒動(dòng)學(xué)和毒效學(xué)過(guò)程。表示急性毒性大小：

LD50(對(duì)受試物個(gè)體感受性影響較小，有更高重現(xiàn)性)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第18頁(yè)二、試驗(yàn)程序與評(píng)價(jià)

1．動(dòng)物選擇：首選受試物在體內(nèi)代謝情況與人體內(nèi)相近或?qū)κ茉囄镒蠲舾衅废?。普通：以哺乳?dòng)物為主，慣用大鼠、小鼠；經(jīng)皮：兔、豚鼠、豬應(yīng)對(duì)兩種性別、成年和幼年動(dòng)物進(jìn)行測(cè)定。選擇兩種以上試驗(yàn)動(dòng)物，最好一為嚙齒類(lèi)，一為非嚙齒類(lèi)。(目標(biāo)：查對(duì)種間差異)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第19頁(yè)2．染毒路徑與方式：普通與人接觸路徑相同。(1)經(jīng)口染毒：慣用灌胃法，也可將受試物放在飲水中由動(dòng)物自由攝取。(2)經(jīng)呼吸道染毒：將試驗(yàn)動(dòng)物放在有毒氣或粉塵染毒柜內(nèi)進(jìn)行染毒。急性吸入染毒采取靜式染毒瓶(柜)，染毒2—4h。(3)經(jīng)皮膚染毒：主要用于化學(xué)物經(jīng)皮(或粘膜)吸收所引發(fā)急性毒性。正式給藥前24h，背部脫毛，勿傷皮膚。將受試物均勻涂布于皮膚表面，用紗布覆蓋，共敷24h。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第20頁(yè)3．試驗(yàn)程序：（1）劑量與分組①預(yù)試驗(yàn)：找出受試物大致致死量范圍(死亡率為10%~90%)；例：欲做化合物A經(jīng)口預(yù)試驗(yàn)。化合物B化學(xué)結(jié)構(gòu)與A相同，已知B=LD50=40(預(yù)期毒性中值)。則預(yù)試驗(yàn)取2.5、10、40、160、640(上下各推1~2組，組距應(yīng)較大，初始4倍差)

環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第21頁(yè)③求LD50正式試驗(yàn)：在LD100與LD0之間設(shè)5—7個(gè)劑量組。

組距(對(duì)數(shù))

或

式中：n------設(shè)計(jì)劑量組數(shù)（2）癥狀觀察

時(shí)間：24h或兩周內(nèi)反應(yīng)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第22頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第23頁(yè)三、LD50計(jì)算與結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算方法：概率單位法和寇氏法。LD50值愈小，毒性愈大。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第24頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第25頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第26頁(yè)概率單位法環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第27頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第28頁(yè)存在正態(tài)曲線關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)差d=(x-μ)/δ式中：x——?jiǎng)┝繉?duì)數(shù)；μ——?jiǎng)┝繉?duì)數(shù)均數(shù)δ——標(biāo)準(zhǔn)差環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第29頁(yè)d=0，左邊面積(死亡率)為50％，右邊面積(存活率)50％d=1，死亡率為84.13％，d=2，死亡率為97.73％,d＞2，死亡率靠近100％。d=一1，死亡率為15.87％。d=一2，死亡率為2.27％。d＜一3，死亡率靠近0。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第30頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第31頁(yè)從上表，能夠任一死亡率換算為對(duì)應(yīng)概率單位。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第32頁(yè)A：劑量對(duì)數(shù)~死亡百分率B：劑量對(duì)數(shù)~概率單位環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第33頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第34頁(yè)LC50計(jì)算步驟以下：a.依據(jù)死亡率查概率單位(死亡率為100％或0％不計(jì))b.繪圖求回歸方程。c.求y=5濃度對(duì)數(shù)（m），其反對(duì)數(shù)即為L(zhǎng)C50y=2.78x-2.76同理可得LC5、LC10、……環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第35頁(yè)d.求LC50可信限先求LC50標(biāo)準(zhǔn)誤差(Sm)：S(校準(zhǔn)差)=1/k本例中：S=1/2.78

環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第36頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第37頁(yè)平均致死量法（又名寇氏法）

試驗(yàn)要求：①每個(gè)試驗(yàn)組動(dòng)物數(shù)相同；②各組劑量按等比級(jí)數(shù)分組；③最大劑量死亡率最好為100％或與之靠近，最小劑量死亡率最好為0％或與之靠近。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第38頁(yè)式中：Xm——最大劑量對(duì)數(shù)值；i—相鄰劑量比值對(duì)數(shù)；——各組死亡率總和（以小數(shù)表示）。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第39頁(yè)例小鼠腹腔注射致百蟲(chóng)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果以下表所表示，求LD50環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第40頁(yè)式中：p——一個(gè)組死亡率；q——一個(gè)組存活率；i——相鄰劑量比值對(duì)數(shù)；h——各組動(dòng)物數(shù)。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第41頁(yè)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第42頁(yè)第二節(jié)亞慢性和慢性毒性試驗(yàn)一、蓄積試驗(yàn)及其方法：（一）蓄積作用：一些物質(zhì)以較小劑量重復(fù)作用于機(jī)體，可使機(jī)體對(duì)該物質(zhì)反應(yīng)性增強(qiáng)，即一次染毒不引發(fā)顯著中毒反應(yīng)或死亡劑量，經(jīng)分次重復(fù)染毒后，可引發(fā)顯著中毒或死亡，此種現(xiàn)象稱為蓄積作用(accumulation)。可分兩種：

物質(zhì)蓄積：毒物在體內(nèi)排出量小于進(jìn)入量，以致毒物在體內(nèi)貯留量增多為物質(zhì)蓄積；

功效蓄積：毒物進(jìn)入機(jī)體后，并未發(fā)覺(jué)在體內(nèi)顯著貯留，但可引發(fā)機(jī)體功效改變逐步累積，造成對(duì)該毒物反應(yīng)性增強(qiáng)。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第43頁(yè)耐受性(tolerance)：機(jī)體屢次接觸化學(xué)物質(zhì)后．對(duì)該物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)性減弱現(xiàn)象，顯示不易發(fā)生慢性中毒。

（二）蓄積作用測(cè)定方法有各種，慣用蓄積系數(shù)法。蓄積系數(shù)(accumulationcoefficient)K：

ED50(n)——屢次染毒使半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)某種效應(yīng)總劑量;ED50(1)——一次染毒引發(fā)同一效應(yīng)半數(shù)效量。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第44頁(yè)若以死亡為毒效應(yīng)指標(biāo)，上式為K越小，受試化合物蓄積毒性越大。K蓄積作用強(qiáng)度＜1高度蓄積1~3顯著蓄積3~5中度蓄積＞5輕度蓄積環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第45頁(yè)1．固定劑量法：固定天天染毒劑量為1/20—1/5LD50，連續(xù)染毒，直至試驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)死亡。假如染毒劑量累計(jì)已達(dá)5個(gè)LD50動(dòng)物死亡仍末達(dá)半數(shù)，試驗(yàn)均可告結(jié)束，計(jì)算蓄積系數(shù)，作出評(píng)價(jià)。

2．遞增劑量法：先測(cè)定LD50（1），然后對(duì)另一組動(dòng)物天天染毒，以4天為一期，開(kāi)始給予0.1LD50。以后每期按1.5倍遞增劑量，直至動(dòng)物半數(shù)死亡，或試驗(yàn)已達(dá)28天，可結(jié)束試驗(yàn)，計(jì)算系數(shù)。3.二十天試驗(yàn)法：選取大鼠或小鼠每個(gè)劑量組雌雄各10只，以1/2、l/5、1/10、1/20LD50分別對(duì)每組進(jìn)行染毒，每日1次，共20天。如l/20LD50組動(dòng)物有死亡，且有劑量—反應(yīng)關(guān)系，則有較強(qiáng)蓄積作用；如1/20LD50組無(wú)死亡，則為弱蓄積。蓄積系數(shù)測(cè)定環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第46頁(yè)二、亞慢性毒性作用及其試驗(yàn)方法：1、目標(biāo)：確定化學(xué)物亞慢性毒性閾劑量和NOEL。2、試驗(yàn)期限：3-6月；呼吸道吸收：30-90天；皮膚毒性：30天。3、試驗(yàn)動(dòng)物選擇、喂養(yǎng)環(huán)境及染毒路徑：

試驗(yàn)動(dòng)物選擇：對(duì)受試化學(xué)物敏感物種或品系；

環(huán)境：營(yíng)養(yǎng)合理，飲水清潔、充分、溫、光、濕適宜；

染毒路徑：盡可能模擬人類(lèi)在環(huán)境中接觸受試化學(xué)物路徑，與急性毒性試驗(yàn)相同。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第47頁(yè)4、劑量選擇與分組

劑量：1／80—I／50LD50，對(duì)于在體內(nèi)不產(chǎn)生蓄積作用而排泄又快物質(zhì)可適當(dāng)加大劑量，反之則可降低劑量。

設(shè)3—4個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組。

試驗(yàn)組要求：在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)

最低劑量組不產(chǎn)生可觀察到毒性反應(yīng)；

最高劑量組能引發(fā)顯著毒性反應(yīng)，但不引發(fā)死亡；

中間劑量組產(chǎn)生輕微毒性反應(yīng)。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第48頁(yè)5、癥狀觀察普通性指標(biāo)(非特異)①普通綜合性指標(biāo)：動(dòng)物體重增加率、食物消耗率、活動(dòng)能力等。②普通化驗(yàn)性指標(biāo)：主要指血和肝、腎功效檢測(cè)。(2)特異指標(biāo)：測(cè)定特異性反應(yīng)。更確切說(shuō)明該物質(zhì)閾劑量(濃度)及無(wú)作用劑量(濃度)。(3)病理組織學(xué)檢驗(yàn)：試驗(yàn)中死亡動(dòng)物病理檢驗(yàn)及試驗(yàn)結(jié)束時(shí)尸檢。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第49頁(yè)三、慢性毒性作用及其試驗(yàn)方法1、目標(biāo)：評(píng)價(jià)化學(xué)物在長(zhǎng)久小劑量作用條件下對(duì)機(jī)體產(chǎn)生損害及其特點(diǎn)．確定閾劑量和最大無(wú)作用劑量。2、試驗(yàn)方法：（1）動(dòng)物選擇、染毒方法、觀察指標(biāo)等與亞慢性毒性試驗(yàn)相同；（2）染毒期限：1-2年或終生染毒，也有些人提出6月。（3）劑量分組：3個(gè)染毒組和一個(gè)對(duì)照組。高劑量組：1/5—1/2亞慢性試驗(yàn)閾值；中間劑量：1/50—1/10；低劑量組：1/100。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第50頁(yè)第四節(jié)致突變?cè)囼?yàn)一、目標(biāo)確定外源化學(xué)物對(duì)生物體是否含有致突變作用。基因點(diǎn)突變?cè)囼?yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)、DNA損傷試驗(yàn)。二、供試生物：微生物、動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)、動(dòng)物或植物三、試驗(yàn)方法體外基因突變?cè)囼?yàn)、細(xì)胞遺傳學(xué)試驗(yàn)、體內(nèi)基因突變?cè)囼?yàn)、DNA損傷試驗(yàn)環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第51頁(yè)（一）體外基因突變?cè)囼?yàn)1、Ames試驗(yàn)（鼠傷寒沙門(mén)氏菌/動(dòng)物肝細(xì)胞微粒體試驗(yàn)）

（1）原理：利用一個(gè)突變微生物菌株與被檢測(cè)化學(xué)物接觸，使突變型微生物回復(fù)突變，重新成為野生型微生物。突變型微生物不具備合成組氨酸能力，不能在不含（或低濃度）組氨酸培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第52頁(yè)（2）方法：將突變型沙氏菌在不含（或低濃度）組氨酸培養(yǎng)基上培養(yǎng),以其生長(zhǎng)情況作為指標(biāo)。在培養(yǎng)基中加入哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞微粒體：提升靈敏度。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第53頁(yè)（3）特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、靈敏、快速（48h）、費(fèi)用低；檢測(cè)結(jié)果與對(duì)動(dòng)物致癌性相符率達(dá)約90%。

缺點(diǎn)：利用微生物作為供試物，不能全方面反應(yīng)哺乳動(dòng)物遺傳信息，僅1/6；微生物DNA修復(fù)系統(tǒng)與動(dòng)物有差異；微生物無(wú)免疫功效。

環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第54頁(yè)2、哺乳動(dòng)物體細(xì)胞突變?cè)囼?yàn)（1）方法原理與微生物突變類(lèi)似。

慣用細(xì)胞株：中國(guó)地鼠肺細(xì)胞V79中國(guó)地鼠肺卵巢細(xì)胞(CHO）小鼠淋巴瘤L5178Y細(xì)胞株。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第55頁(yè)V79、CHO細(xì)胞株正常細(xì)胞：缺乏利用嘌呤堿酶HGPRT，不能在加入類(lèi)嘌呤堿類(lèi)物質(zhì)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；突變細(xì)胞：可在加入類(lèi)嘌呤堿類(lèi)物質(zhì)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。L5178Y突變細(xì)胞株正常細(xì)胞：缺乏胸苷激酶（TK），不可在含有細(xì)胞毒物5-溴脫氧尿苷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。突變細(xì)胞：可在此種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第56頁(yè)（二）細(xì)胞遺傳學(xué)試驗(yàn)染色體畸變?cè)囼?yàn)：直接在顯微鏡下觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目標(biāo)改變情況。生殖細(xì)胞或體細(xì)胞、體外或體內(nèi)試驗(yàn)。體外：CHO細(xì)胞:分裂快、數(shù)目適中、形態(tài)清楚；人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞體內(nèi)：受試動(dòng)物骨髓細(xì)胞或其它（胸腺、脾、精原細(xì)胞）染色體畸變率改變。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第57頁(yè)（1）試驗(yàn)方法：a.體外培養(yǎng)：CHO細(xì)胞或人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞與化學(xué)物，在細(xì)胞培養(yǎng)液（DMEM,RPM,1640或1999）中，370C下培養(yǎng)24h(CHO)或72h(人類(lèi)細(xì)胞）。觀察前2h加入秋水仙堿（中期分裂阻斷劑），制片，鏡檢觀察。b.體內(nèi)染色體畸變分析：大鼠、小鼠，染毒喂養(yǎng)，觀察骨髓細(xì)胞染色體畸變情況。環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第58頁(yè)第四節(jié)環(huán)境流行病學(xué)方法一、概念和特點(diǎn)：流行病學(xué)：研究特定人群中相關(guān)健康狀態(tài)和事件分布以及影響這些分布決定原因；環(huán)境流行病學(xué)：應(yīng)用流行病學(xué)原理和方法，重點(diǎn)研究人們?cè)谏詈凸ぷ鳝h(huán)境中各種原因與人群健康關(guān)系。普通流行病學(xué)研究?jī)?nèi)容是疾病在人群中分布，它要回答三個(gè)問(wèn)題：(1)疾病在時(shí)間、地點(diǎn)、不一樣人群中是怎樣分布?(2)什么原因是該病主要決定原因?(3)怎樣控制該病流行?環(huán)境毒理學(xué)的基本研究方法第59頁(yè)環(huán)境流行病學(xué)除了上述普通內(nèi)容，還有它本身特點(diǎn)。(1)它不但研究疾病分布規(guī)律，而且更經(jīng)常地研究疾病前狀態(tài)，即包含無(wú)異?！步】?、微弱功效改變、疾病前期(亞臨床狀態(tài))等各種健康情況，揭示環(huán)境污染或一些微量元素健康效應(yīng)。(2)環(huán)境流行病學(xué)研究暴露原因主要是理化原因。①已知暴露原因，研究其對(duì)健康影響；環(huán)境毒理學(xué)工作者所進(jìn)行大量工作就屬于這種。比如金屬冶煉廠鉛污染大氣對(duì)居民健康影響，磷肥廠氟污染大氣對(duì)居民健康影響調(diào)查等。②出現(xiàn)健康異常，追究引發(fā)異常暴露原因，這屬于探討病因研究。比如，近年來(lái)我國(guó)學(xué)者對(duì)于鼻咽癌、食道癌病因研究，對(duì)克山病、大骨節(jié)病病因研究，均屬于此種類(lèi)型。日本水誤病和痛痛病病因是重金屬污染造成公害病領(lǐng)域里研究結(jié)果，影響深遠(yuǎn)。(3)