臨床專用自動生化分析儀分析技術(shù)

教學目標與要求掌握：濁度、電解質(zhì)、血氣和電泳自動分析儀分析技術(shù)的基本原理和方法。熟悉：濁度、電解質(zhì)、血氣和電泳自動分析儀的結(jié)構(gòu)組成特點，儀器的維護保養(yǎng)，質(zhì)量控制和臨床應用。了解：濁度、電解質(zhì)、血氣和電泳自動分析儀的分類。1現(xiàn)在是1頁\一共有130頁\編輯于星期六目錄濁度自動化分析技術(shù)1電解質(zhì)自動化分析技術(shù)2血氣自動化分析技術(shù)3電泳自動化分析技術(shù)4小結(jié)與展望5返回總目錄2現(xiàn)在是2頁\一共有130頁\編輯于星期六第一節(jié)

濁度自動化分析技術(shù)3現(xiàn)在是3頁\一共有130頁\編輯于星期六前言濁度分析通過檢測溶液濁度,對物質(zhì)含量進行分析的方法。臨床上多用于特定蛋白的分析。特定蛋白在機體內(nèi)具有某種生理功能，疾病狀態(tài)時又有著特定的病理生理意義的蛋白質(zhì)，臨床上常被稱為特定蛋白（specialprotein）。4現(xiàn)在是4頁\一共有130頁\編輯于星期六一、濁度分析的基本原理和方法5現(xiàn)在是5頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）濁度分析的基礎(chǔ)理論1.膠體溶液粒子對光具有反射、折射、散射和吸收等作用。2.光透射理論朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律：3.光散射理論雷萊（Rayleigh）公式：6現(xiàn)在是6頁\一共有130頁\編輯于星期六該公式來自氣溶膠懸浮微粒，用于溶液時需進行校正。當使用高強度光源（如激光）時，液相懸浮顆粒與非偏振光源的散射作用公式為：公式可見，散射光強度與顆粒的濃度和分子量有關(guān)。7現(xiàn)在是7頁\一共有130頁\編輯于星期六雷萊公式與修正公式雷萊公式僅適合直徑＜1／10入射光波長的小顆粒Debye修正公式適合于顆粒直徑略小于入射光波長的溶液Mie修正公式適合于顆粒直徑等于或大于入射光波長的溶液8現(xiàn)在是8頁\一共有130頁\編輯于星期六4.免疫濁度分析在一定條件下，可溶性抗原與抗體在液相中特異結(jié)合，形成有一定大小的抗原-抗體免疫復合物顆粒，使反應液出現(xiàn)濁度；當光線通過介質(zhì)中的復合物顆粒時，可形成光的吸收、透射、散射和折射；通過測量透射光或散射光信號強弱，從而推算出被測物的量。9現(xiàn)在是9頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）濁度分析的基本方法濁度分析方法的分類根據(jù)檢測器的位置及其接收光信號的性質(zhì)分：透射免疫濁度法（turbidimetryimmunoassay）散射免疫濁度法（nephelometryimmunoassay）根據(jù)復合物形成速度和測定方式分：終點濁度法速率濁度法根據(jù)濁度形成的原理分：沉淀反應免疫濁度法：靈敏度低膠乳凝集比濁（或粒子強化免疫濁度法）：靈敏度高10現(xiàn)在是10頁\一共有130頁\編輯于星期六1.透射免疫濁度法指在光源的光路0o角方向上測量透射光強度，并研究其與被檢測溶液微粒濃度關(guān)系的方法。2.散射免疫濁度法指在光路的5o～90o角的方向上測量散射光強度，并研究其與被測溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。11現(xiàn)在是11頁\一共有130頁\編輯于星期六免疫濁度分析法測定光路圖12現(xiàn)在是12頁\一共有130頁\編輯于星期六1.終點散射濁度法檢測反應終點與起始點之間信號變化的方法為終點測定法。2.速率散射濁度法所謂速率即指在抗原抗體結(jié)合反應過程中，單位時間內(nèi)兩者結(jié)合成復合物的量。速率散射濁度法是在抗原與抗體反應的最高峰測定其復合物形成的量，該峰值的高低與抗原的量成正比。13現(xiàn)在是13頁\一共有130頁\編輯于星期六粒子強化免疫濁度法為一種帶載體的免疫濁度法，其敏感度較高。該方法選擇一種大小適中、均勻一致的膠乳顆粒，吸附或交聯(lián)抗體；當遇到相應抗原時，則發(fā)生聚集。單個膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi)，光線可透過。當兩個或更多膠乳顆粒凝聚時，透過光減少，光減少的程度與膠乳凝集量成正比。14現(xiàn)在是14頁\一共有130頁\編輯于星期六二、濁度分析儀的分類和基本結(jié)構(gòu)15現(xiàn)在是15頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）濁度分析儀分類1.分光光度儀采用終點法作免疫濁度分析的測定儀。2.自動生化分析儀目前較流行的大型多通道自動生化分析儀多專門編有或可自編透射濁度分析程序。3.散射濁度分析儀應用較為普遍的有固定時間散射分析儀、速率散射分析儀和雙光路自動免疫濁度分析儀。16現(xiàn)在是16頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）自動散射濁度分析儀的結(jié)構(gòu)主要由分析系統(tǒng)、計算機系統(tǒng)組成。分析系統(tǒng)用于加樣、稀釋、保溫和測試等；包括散射測濁儀、加液系統(tǒng)、試劑轉(zhuǎn)盤、樣品轉(zhuǎn)盤、卡片閱讀器以及軟盤驅(qū)動器等；計算機系統(tǒng)用于輸入病人數(shù)據(jù)、選擇程序菜單、計算參考曲線和儲存測試結(jié)果；包括計算機主機、CRT顯示屏和鍵盤等。17現(xiàn)在是17頁\一共有130頁\編輯于星期六散射濁度分析儀光路示意圖18現(xiàn)在是18頁\一共有130頁\編輯于星期六三、濁度分析儀的保養(yǎng)19現(xiàn)在是19頁\一共有130頁\編輯于星期六常規(guī)保養(yǎng)1.日保養(yǎng)①關(guān)機前沖洗管道，以防止管道阻塞。②開機前應檢查注射器，防止漏液。③檢查稀釋液、緩沖液及抗體試劑中液體的體積。④檢查廢液桶中的廢液是否已經(jīng)裝滿。⑤在做標本之前必須對所有光路進行光路校正。2.周保養(yǎng)①更換流動比色杯和小磁棒。②用紗布蘸10%漂白溶液清潔探針的外部。③檢查蠕動泵和鉗制閥控制著管路中液體的流動情況。20現(xiàn)在是20頁\一共有130頁\編輯于星期六常規(guī)保養(yǎng)3.月保養(yǎng)①更換注射器插桿頂端；②空氣過濾網(wǎng)沖洗；③疏通標本和抗體探針的內(nèi)部。4.半年保養(yǎng)①更換鉗制閥上管道和泵周管道；②給機械傳動部分的螺絲上潤滑油。21現(xiàn)在是21頁\一共有130頁\編輯于星期六四、濁度分析的質(zhì)量控制22現(xiàn)在是22頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）抗原過剩校正免疫濁度分析的基本要求：始終保持反應體系中抗體適量過剩?？乖^剩的檢測方法：①連續(xù)監(jiān)測抗原抗體反應曲線，當抗原過剩時，反應曲線呈現(xiàn)異常。②反應體系中追加抗體，如果濁度繼續(xù)增大則提示抗原過剩。③待測標本用兩種稀釋度測定，濃度高的樣本濁度反而降低則提示抗原過剩。23現(xiàn)在是23頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）減少偽濁度偽濁度：在反應體系中，除待測抗原抗體免疫復合物產(chǎn)生的濁度外，其它可引起透射光或散射光發(fā)生變化的濁度都稱為偽濁度。減少產(chǎn)生偽濁度的方法：1.標本：采用新鮮、合格標本。2.檢測體系：保持比色杯和稀釋杯清潔。3.試劑：使用合格的抗體試劑。4.增濁劑濃度：嚴格控制增濁劑的濃度。24現(xiàn)在是24頁\一共有130頁\編輯于星期六（三）選擇合適的入射光波長無論是散射比濁還是透射比濁，入射光波長的選擇原則：除了抗原抗體免疫復合物外，反應體系中的其他成分對入射光的干擾應為最小，因為如果反應體系中其他成分吸收了部分入射光，透射比濁法測定結(jié)果將使抗原濃度偏高，而散射比濁法測定將使抗原濃度偏低。25現(xiàn)在是25頁\一共有130頁\編輯于星期六（四）儀器校正1.選擇合適的校準品2.校準曲線的繪制校準曲線的形狀取決于抗血清和促聚劑的濃度的選擇，也與所用免疫濁度法類型、校正方法及校準品的質(zhì)量有關(guān)。多推薦5點或6點定標。選擇適當?shù)臄?shù)學方法進行曲線擬合。26現(xiàn)在是26頁\一共有130頁\編輯于星期六五、特定蛋白濁度分析的

臨床應用27現(xiàn)在是27頁\一共有130頁\編輯于星期六特定蛋白臨床常規(guī)項目28現(xiàn)在是28頁\一共有130頁\編輯于星期六免疫功能監(jiān)測項目免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）、補體（C3、C4）臨床意義IgG、IgA、IgM檢測有助于了解機體抗感染能力，有助于疾病的正確診斷和有效治療。在免疫復合物疾病中，C3、C4檢測可以了解其消耗程度。適應癥①免疫力低，反復感染病人；②自身免疫性疾??；②多發(fā)性骨髓瘤；④慢性肝?。虎莘呛谓芙鹗狭馨土?；⑥白血病；⑦良性單克隆免疫球蛋白??；⑧先天性或獲得性低免疫球蛋白血癥；⑨對白、球蛋白比例異常者的隨訪；⑩術(shù)后感染、移植排斥反應。返回章目錄29現(xiàn)在是29頁\一共有130頁\編輯于星期六第二節(jié)

電解質(zhì)自動化分析技術(shù)30現(xiàn)在是30頁\一共有130頁\編輯于星期六前言電解質(zhì)在溶液中能解離成帶電離子而具有導電性能的一類物質(zhì)。主要指體液中最常測定的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、HCO3-和無機磷等。電解質(zhì)分析儀（electrolyteanalyzer）是采用ISE測量溶液中離子濃度的儀器。廣泛應用于各級臨床實驗室，可直接測量患者血液、腦脊液、稀釋尿等體液中的電解質(zhì)離子濃度。31現(xiàn)在是31頁\一共有130頁\編輯于星期六一、電解質(zhì)分析的原理和方法32現(xiàn)在是32頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）離子選擇電極電位分析理論離子選擇性電極（ionselectiveelectrode，ISE）是一類用特殊敏感膜制成，對溶液中某種特定離子具有選擇性響應的電化學傳感器。在臨床實驗室，常用于測量離子的活度或濃度。33現(xiàn)在是33頁\一共有130頁\編輯于星期六1.ISE基本結(jié)構(gòu)通常由電極管、內(nèi)電極、電極內(nèi)充溶液和電極膜（或稱敏感膜）四個部分組成。34現(xiàn)在是34頁\一共有130頁\編輯于星期六2.電極電位產(chǎn)生大多數(shù)電極膜電位的產(chǎn)生是基于膜材料與溶液界面發(fā)生的離子交換反應。當電極置于溶液中時，由于離子交換和擴散作用，改變了二相中原有的電荷分布，因而形成雙電層，其間產(chǎn)生一定的電位差即膜電位。ISE的電位與溶液中特定離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系。Nernst方程式：

±：陰離子時為－，陽離子時為＋35現(xiàn)在是35頁\一共有130頁\編輯于星期六3.電極電位測量ISE的EISE值不能直接測定必須將ISE與參比電極共同浸入待測樣品中組成一個原電池，通過測量E電池來測定EISE值。電池的電動勢在一定條件下，原電池的電動勢與被測離子活度的對數(shù)呈線性關(guān)系。36現(xiàn)在是36頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）ISE電位分析方法1.定量方法（1）標準比較法（或直讀法）指在pH計或離子計上直接讀出數(shù)值的方法，適用于少量樣本的分析。（2）標準曲線法適用于大批量的試樣分析。（3）標準加入法當待測溶液組分較復雜，很難控制相同的離子強度時，選用標準加入法。37現(xiàn)在是37頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）ISE電位分析方法2.樣本測定方式直接法指樣本不經(jīng)稀釋直接由電極測量離子活度；優(yōu)點是可采用全血測定，它迅速方便，結(jié)果準確，不會因血清中水體積所占比例改變而影響結(jié)果。間接法指樣本經(jīng)一定離子強度緩沖溶液稀釋后由電極測量離子活度。與直接法相比，間接法樣品用量少；由于樣品預先進行稀釋，不易堵塞管道；降低了血脂、不溶性蛋白質(zhì)對電極的污染，以及對電極的損耗，使壽命延長。直接法比間接法測定結(jié)果高3％～5％，因為血脂及蛋白質(zhì)等不包含有K＋、Na＋。38現(xiàn)在是38頁\一共有130頁\編輯于星期六二、電解質(zhì)分析儀分類和結(jié)構(gòu)39現(xiàn)在是39頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）電解質(zhì)分析儀的分類1.按自動化程度分類分為半自動和全自動電解質(zhì)分析儀。2.按工作方式分類分為濕式和干式電解質(zhì)分析儀。3.按儀器的功能分類可分為電解質(zhì)分析儀、含電解質(zhì)分析的血氣分析儀、含電解質(zhì)分析的自動生化分析儀等。40現(xiàn)在是40頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）電解質(zhì)分析儀的基本結(jié)構(gòu)濕式電解質(zhì)分析儀一般由離子選擇性電極組、液路系統(tǒng)、電路系統(tǒng)、程序控制模塊和顯示操作系統(tǒng)等組成41現(xiàn)在是41頁\一共有130頁\編輯于星期六濕式電解質(zhì)分析儀結(jié)構(gòu)框圖42現(xiàn)在是42頁\一共有130頁\編輯于星期六1.離子選擇性電極組電極組包括指示電極和參比電極。ISE的構(gòu)成通常采用流動式毛細管結(jié)構(gòu)，即在毛細管的側(cè)臂開多個小孔，孔里插入各種離子選擇性電極。在真空泵的負壓作用下，待測樣被吸入毛細管中，與各個插入電極接觸，并將溶液濃度的變化轉(zhuǎn)換成電極電位的變化。一次進樣可完成多個參數(shù)的測量。43現(xiàn)在是43頁\一共有130頁\編輯于星期六電極結(jié)構(gòu)示意圖44現(xiàn)在是44頁\一共有130頁\編輯于星期六鈉、鉀、氯電極鈉電極是一種含鉛硅酸鈉的玻璃膜電極；鉀電極為由纈氨霉素和聚氯乙烯（PVC）等組成的膜電極；氯電極由一個銀／氯化銀電極組成。45現(xiàn)在是45頁\一共有130頁\編輯于星期六2.液路系統(tǒng)通常由標本盤、溶液瓶、驅(qū)動電機、采樣針、電極系統(tǒng)、蠕動泵、三通閥、管道等組成。主要用于將檢測樣品、定標液和緩沖稀釋液等按工作要求吸取和輸送至電極管道中，并完成沖洗電極管道、排除廢液的工作。46現(xiàn)在是46頁\一共有130頁\編輯于星期六3.電路系統(tǒng)一般由微處理器模塊、信號放大及數(shù)據(jù)采集模塊、蠕動泵和三通閥控制模塊、輸入輸出模塊、電源電路模塊等五大模塊組成。共同完成對儀器各部件的動作進行控制，并對前置放大器采集的電極mV值進行處理和計算，完成儀器設定的工作程序，并將運算、處理后結(jié)果送顯示單元顯示或打印輸出。47現(xiàn)在是47頁\一共有130頁\編輯于星期六4.程序控制系統(tǒng)主要包括儀器微處理系統(tǒng)程序、儀器設定程序、儀器測定程序和自動清洗程序等。5.顯示操作系統(tǒng)輕觸鍵盤用于控制儀器工作和輸入數(shù)據(jù)。液晶顯示器用于顯示輸出測量結(jié)果，儀器操作提示等。在分析檢測樣品時，操作者可以通過按鍵操作控制分析檢測過程。48現(xiàn)在是48頁\一共有130頁\編輯于星期六三、電解質(zhì)分析儀的維護和保養(yǎng)49現(xiàn)在是49頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）日常維護l.每日維護檢查試劑量，如不足1／4液面，應及時更換；清潔儀器表面灰塵及吸樣探針，保持探針的暢通；及時棄去廢液瓶中的廢液。2.每周維護清洗儀器流路，除去蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶。50現(xiàn)在是50頁\一共有130頁\編輯于星期六3.每月維護用酒精棉球清潔泵管和不銹鋼轉(zhuǎn)軸，在泵管的彎處涂硅油或白色凡士林等潤滑劑。4.每季度進行MV值試驗電極的MV值由儀器使用說明書給出。51現(xiàn)在是51頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）儀器的保養(yǎng)1.電極系統(tǒng)的保養(yǎng)定期更換電極膜和電極內(nèi)充液。定期進行去蛋白清洗及電極的活化。2.流路系統(tǒng)的保養(yǎng)保證流路中沒有蛋白質(zhì)、脂類沉積和鹽類結(jié)晶。每天工作結(jié)束關(guān)機前，都要進行管路的清洗。沖洗完畢，應當對儀器進行重新定標。52現(xiàn)在是52頁\一共有130頁\編輯于星期六四、電解質(zhì)分析的質(zhì)量控制53現(xiàn)在是53頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）分析前質(zhì)量控制1.樣本的采集與處量①采血用器材必須干燥、清潔，最好選用一次性用品。②減少輸液對結(jié)果的影響。③采血中應避免溶血。④應盡快送檢，不能劇烈振蕩，不能長時間被日光照射；不能立即測定時應分離血清，置于4℃冰箱中保存。⑤當血樣與空氣接觸時，可造成血樣中的CO2濃度偏低，pH值升高，進而使鈣離子濃度降低。54現(xiàn)在是54頁\一共有130頁\編輯于星期六2.抗凝劑與藥物的影響抗凝劑血樣不能使用EDTA、檸檬酸鹽或草酸鹽等抗凝劑。即使用肝素，其濃度通常也不超過20U/ml血樣。藥物對測量結(jié)果的影響有兩方面：藥物或它的代謝產(chǎn)物，能引起患者體內(nèi)被測物的濃度發(fā)生改變。如利尿劑促進K+、Na+、Cl-從尿中排出。藥物直接對ISE的響應產(chǎn)生影響。如水楊酸鹽對Cl-電極響應有干擾，維生素C對K+電極響應有干擾等。55現(xiàn)在是55頁\一共有130頁\編輯于星期六3.儀器安裝儀器要求安裝在干凈、平穩(wěn)的工作臺上，盡可能避免潮濕和陽光直射；實驗室的供電必須符合要求，必要時需連接穩(wěn)壓電源；周圍不得有強的電磁干擾源（如離心機等），并確保儀器外殼接地良好。56現(xiàn)在是56頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）分析中質(zhì)量控制1.定標校正液各廠家的定標校正液基本上都不能互換使用。2.電極保養(yǎng)電極使用一段時間后就需要保養(yǎng)。3.質(zhì)控品選用質(zhì)量好、性能穩(wěn)定和對離子選擇性電極響應沒有干擾的質(zhì)控血清，作為實驗室內(nèi)的質(zhì)控品。57現(xiàn)在是57頁\一共有130頁\編輯于星期六4.評價分析性能儀器、試劑、方法等整個檢測系統(tǒng)一旦確定之后，必須對整個系統(tǒng)的不精密度、不準確度、病人結(jié)果的可報告范圍、分析靈敏度、分析干擾和參考范圍等分析性能進行評價；并建立嚴格的質(zhì)量控制規(guī)范（包括選用質(zhì)控品，設定靶值、標準差，繪制質(zhì)控圖，失控情況處理及原因分析等）；然后才能正式用于檢測病人樣品。58現(xiàn)在是58頁\一共有130頁\編輯于星期六（三）分析后的質(zhì)量控制異常結(jié)果的分析取舍：如葡萄糖、碳酸氫根過低，同時鉀離子過高往往是血樣未經(jīng)分離放置時間過長所致。多項檢測結(jié)果過低，往往提示樣品稀釋比例不對、樣品中有纖維蛋白凝塊或吸樣針部分堵塞導致吸樣量不足所致。對某些急診檢驗項目：如血鉀、血鈣等遇到特別異常結(jié)果時，應及時與臨床醫(yī)生聯(lián)系，以便對患者進行緊急處置。59現(xiàn)在是59頁\一共有130頁\編輯于星期六五、電解質(zhì)分析技術(shù)的臨床應用血鈉測定在臨床的表現(xiàn)為低鈉血癥和高鈉血癥；血鉀測定在臨床的表現(xiàn)為血清鉀增高和血清鉀降低；血氯測定在臨床的表現(xiàn)也是增高和減低。詳細應用情況見第十三章體液與酸堿平衡紊亂。返回章目錄60現(xiàn)在是60頁\一共有130頁\編輯于星期六第三節(jié)

血氣自動化分析技術(shù)61現(xiàn)在是61頁\一共有130頁\編輯于星期六前言血氣分析儀(bloodgasanalyzer)是應用電化學分析技術(shù)和原理，采用電極對血液中的pH值、PCO2和PO2進行測定的臨床分析儀器。近年來，血氣分析儀又增加了新功能，如電解質(zhì)，尿素氮、肌酐、葡萄糖、乳酸等代謝物及血氧系統(tǒng)定量測定，現(xiàn)代血氣分析儀又稱為全自動血氣／電解質(zhì)／代謝物／血氧分析儀。62現(xiàn)在是62頁\一共有130頁\編輯于星期六一、血氣分析的原理和方法63現(xiàn)在是63頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）血氣分析儀的工作原理框圖64現(xiàn)在是64頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）電極的工作原理電極的工作原理即電化學分析原理。電化學分析(electrochemicalanaIysis)是建立在溶液電化學性質(zhì)基礎(chǔ)上并利用這些性質(zhì)，通過電極這個變換器，將被測物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變成電學參數(shù)而進行檢測的方法。65現(xiàn)在是65頁\一共有130頁\編輯于星期六1.pH電極屬玻璃膜電極，由鈉或鋰玻璃熔融吹制而成。通常需與參比電極構(gòu)成一個電化學電池，通過測量該電池的電動勢E而獲得相應溶液的pH。在一定溫度下，玻璃電極的電極電位E玻與待測溶液的pH有線性關(guān)系：66現(xiàn)在是66頁\一共有130頁\編輯于星期六pH電極與甘汞電極結(jié)構(gòu)圖67現(xiàn)在是67頁\一共有130頁\編輯于星期六2.PCO2電極屬氣敏電極，是由pH玻璃電極和銀-氯化銀電極組裝在一起形成的復合電極。由內(nèi)電極、滲透膜、尼龍網(wǎng)和外緩沖液組成，內(nèi)電極為pH玻璃電極和銀-氯化銀參比電極。滲透膜只允許血液樣品中CO2分子通過。氣體CO2分子在內(nèi)溶液中酸化后使pH下降，再通過pH電極測定。待測溶液中pH值的變化與lgPCO2有線性關(guān)系。68現(xiàn)在是68頁\一共有130頁\編輯于星期六

PCO2電極結(jié)構(gòu)圖69現(xiàn)在是69頁\一共有130頁\編輯于星期六3.PO2電極是一種氣敏電極、極譜電極，屬氧化還原電極，它基于電解氧的原理實現(xiàn)對氧的測量。PO2電極由鉑絲陰極與銀-氯化銀陽極組成。鉑絲被封閉在玻璃柱中，玻璃柱裝在一個有機玻璃套內(nèi)，套的一端覆蓋著O2滲透膜，套內(nèi)空隙充滿PO2電極緩沖液。O2滲透膜為聚丙烯膜或聚四氟乙烯膜或聚乙烯、聚酯。70現(xiàn)在是70頁\一共有130頁\編輯于星期六在0.65V的極化電壓下，電極電流的大小取決于鉑陰極表面O2量。O2在鉑陰極表面發(fā)生的反應如下：極限擴散電流的大小決定于滲透到陰極表面氧的多少，后者又取決于膜外的PO2。PO2電極電流與PO2成正比，過0點的一條直線，只需要1點定標（校準）。而其他電極的電壓與含量（或?qū)?shù)含量）關(guān)系都不過0點，所以需要兩點定標，且偏差不能大于5%。71現(xiàn)在是71頁\一共有130頁\編輯于星期六PO2電極結(jié)構(gòu)圖72現(xiàn)在是72頁\一共有130頁\編輯于星期六（三）血氣分析的基本方法血氣分析的基本方法包括直接計算法、標準曲線法和標準加入法。具體內(nèi)容參見離子選擇電極電位分析方法一節(jié)。73現(xiàn)在是73頁\一共有130頁\編輯于星期六二、血氣分析儀的基本結(jié)構(gòu)74現(xiàn)在是74頁\一共有130頁\編輯于星期六血氣分析儀的結(jié)構(gòu)由電極系統(tǒng)、管路系統(tǒng)和電路系統(tǒng)三大部分組成。電極系統(tǒng)基本結(jié)構(gòu)參見本節(jié)儀器工作原理部分。75現(xiàn)在是75頁\一共有130頁\編輯于星期六(一)管路系統(tǒng)通常由溶液瓶、氣瓶、正壓泵、負壓泵、電磁閥、轉(zhuǎn)換裝置和連接管道等部分組成。1.氣路系統(tǒng)主要用來提供PO2和PCO2兩種電極定標時所需的兩種標準氣體。依據(jù)配氣方式，氣路系統(tǒng)可分兩種類型：(1)外配氣方式，又叫壓縮氣瓶供氣方式。(2)內(nèi)配氣方式，又叫氣體混合器供氣方式。76現(xiàn)在是76頁\一共有130頁\編輯于星期六(1)外配氣方式儀器由兩個壓縮氣瓶提供定標氣，一個含有5％CO2和20％O2；另一個含10％CO2，不含O2。(2)內(nèi)配氣方式儀器本身配備有氣體混合器，以產(chǎn)生定標氣。來自空氣壓縮機產(chǎn)生的壓縮空氣和氣瓶送來的純CO2氣體由氣體混合器進行配比、混合，產(chǎn)生符合要求的定標氣體。77現(xiàn)在是77頁\一共有130頁\編輯于星期六2.液路系統(tǒng)液路系統(tǒng)具有兩種功能：①為pH電極系統(tǒng)提供定標緩沖液；②管道沖洗。該系統(tǒng)一般需要四個溶液瓶，分別盛放緩沖液1、緩沖液2、沖洗液和廢液。78現(xiàn)在是78頁\一共有130頁\編輯于星期六

(二)電路系統(tǒng)血氣分析儀電路系統(tǒng)將儀器測量信號進行放大和模數(shù)轉(zhuǎn)換，對儀器實行有效控制、顯示和打印結(jié)果，通過鍵盤輸入指令。79現(xiàn)在是79頁\一共有130頁\編輯于星期六試劑包式血氣分析儀現(xiàn)在也有試劑包式，每盒可測40～50例，包含電極、定標液、定標氣體（類似質(zhì)控）80現(xiàn)在是80頁\一共有130頁\編輯于星期六三、血氣分析儀的保養(yǎng)81現(xiàn)在是81頁\一共有130頁\編輯于星期六

(一)儀器的保養(yǎng)①每天檢查大氣壓力、鋼瓶氣體壓力；檢查定標液、沖洗液是否過期，檢查氣泡室是否有蒸餾水；②每周更換一次內(nèi)電極液，定期更換電極膜；沖洗管道系統(tǒng)，擦洗分析室；③若電極使用時間過長，電極反應變慢，可用電極活化液對pH、PCO2電極活化，對PO2電極進行輕輕打磨，除去電極表面氧化層。82現(xiàn)在是82頁\一共有130頁\編輯于星期六(二)電極的保養(yǎng)1.pH電極血液中的蛋白質(zhì)容易黏附在電極表面，必須經(jīng)常按血液→緩沖液(或生理鹽水)→水→空氣的順序進行清洗。若清洗后仍不能正常工作，應更換電極。無論使用與否，pH電極的使用壽命一般都為1～2年。如果pH電極在空氣中暴露2h以上，應將其放在緩沖液中浸泡6h～24h才能使用。83現(xiàn)在是83頁\一共有130頁\編輯于星期六2.PCO2電極電極要經(jīng)常用專用清潔劑清洗，如果經(jīng)清洗、更換緩沖液后仍不能正常工作時，應更換半透膜。多數(shù)電極的緩沖液密封在電極內(nèi)，但有些型號的要更換緩沖液。3.PO2電極PO2電極中干凈的內(nèi)電極端部和四個鉑絲點應該明凈發(fā)亮。每次清洗時，都應該用電極膏對PO2電極進行研磨保養(yǎng)。84現(xiàn)在是84頁\一共有130頁\編輯于星期六4.參比電極參比電極套需要定期更換。內(nèi)電極部分不需要保養(yǎng)。在更換鹽橋或電極內(nèi)的KCl溶液時，除加入室溫下飽和的KCl溶液外，還需要加入少許的KCl結(jié)晶，使其在37℃恒溫條件下也達到飽和。同時防止參比電極存在氣泡，否則會嚴重影響電極的功能。85現(xiàn)在是85頁\一共有130頁\編輯于星期六四、血氣分析儀的質(zhì)量保證86現(xiàn)在是86頁\一共有130頁\編輯于星期六(一)定標定標或校準(calibration)制作或校正pH、PCO2和PO2電極系統(tǒng)工作曲線的過程。1.定標方式兩點定標：對于不過0點的直線，需要測量2個標準的檢測信號，以確定斜率和截距；一點定標：對于不過0點的直線，通過測量1個標準的檢測信號，以確定斜率。定標后，根據(jù)標準比較法測定血樣含量。87現(xiàn)在是87頁\一共有130頁\編輯于星期六2.標準物質(zhì)pH、PCO2電極為兩點定標，PO2電極為1點定標。pH系統(tǒng)：使用7.383和6.840兩種標準緩沖液。O2和CO2系統(tǒng)分別用1種、兩種混合氣體來進行定標。3.定標頻率可以手動或自動執(zhí)行，其頻率由所用儀器類型及儀器狀態(tài)而定。當儀器開機時，必須進行兩點定標；儀器連續(xù)運轉(zhuǎn)過程中，應多次進行一點標定，或重復進行兩點定標，以保證結(jié)果的可靠性?，F(xiàn)代血氣分析儀有自動校正程序。88現(xiàn)在是88頁\一共有130頁\編輯于星期六(二)質(zhì)量控制1.質(zhì)控物的使用血氣分析的參考試劑按基質(zhì)不同分為水劑緩沖液、全血、血液基質(zhì)、血代氟碳化合物4種，使用最多的是水劑緩沖液，該質(zhì)控物用安瓿封存，具有穩(wěn)定、使用方便等優(yōu)點。2.質(zhì)控要求臨床實驗室每天應測定質(zhì)控液，并繪制質(zhì)控圖，檢測儀器的運行狀態(tài)和精密性。主動參加各省市臨檢中心或衛(wèi)生部臨檢中心組織的室間質(zhì)評活動。89現(xiàn)在是89頁\一共有130頁\編輯于星期六水劑質(zhì)控物用Na2HPO4、KH2PO4及NaHCO3配成不同的pH緩沖液，再與不同濃度的CO2和O2平衡，加入防腐劑貯存，有高、正常、低3種水平規(guī)格。質(zhì)控物用安瓿裝，液體并未充滿整支安瓿，液相為水及緩沖物質(zhì)，氣相則由O2、N2、CO2及汽水組成。使用時，需在室溫平衡后，再用力振搖2min～3min，使氣相與液相重新平衡。90現(xiàn)在是90頁\一共有130頁\編輯于星期六五、血氣分析的臨床應用血氣分析在呼收系統(tǒng)疾病和酸堿平衡紊亂中的應用十分廣泛。臨床應用詳見第十三章體液和酸堿平衡紊亂。返回章目錄91現(xiàn)在是91頁\一共有130頁\編輯于星期六第四節(jié)

電泳自動化分析技術(shù)92現(xiàn)在是92頁\一共有130頁\編輯于星期六前言電泳(electrophoresis)帶電粒子在電場中的移動現(xiàn)象。電泳技術(shù)利用這種現(xiàn)象對化學或生物化學組分進行分離分析的技術(shù)。已廣泛用于各種生物分子分離分析。93現(xiàn)在是93頁\一共有130頁\編輯于星期六一、電泳技術(shù)的基本原理94現(xiàn)在是94頁\一共有130頁\編輯于星期六(一)電泳的基本原理1.荷電性與移動方向機體中的許多生物分子都是兩性物質(zhì)，其荷電性質(zhì)受介質(zhì)pH的影響。當pH在生物分子等電點（isoelectricpoint,pI）以下時，帶正電荷，否則帶負電荷。物質(zhì)帶電性質(zhì)不同，在電場強度中移動的方向不同。在某個設定的電場中，帶電粒子在支持介質(zhì)中可向與其所帶電荷相反的電極方向移動。95現(xiàn)在是95頁\一共有130頁\編輯于星期六2.移動的速度與遷移率粒子恒定移動速度

v=QE／6πrη遷移率（μ）指單位電場強度下帶電粒子的運動速度，它與帶電粒子關(guān)系為：粒子帶凈電荷量愈多、直徑愈小、愈接近球形，在電場中移動速度愈快。96現(xiàn)在是96頁\一共有130頁\編輯于星期六(二)影響電泳的因素1.待分離物質(zhì)的性質(zhì)一般來說，粒子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。2.緩沖液的性質(zhì)（1）溶液的pH值：決定了待分離生物分子的解離程度，影響其帶電性質(zhì)、凈電荷量。（2）緩沖液離子強度一般在0.02～0.20mol／kg之間。97現(xiàn)在是97頁\一共有130頁\編輯于星期六3.電場強度電場強度也稱電位梯度，它是指單位長度的電位降（V/cm）。電壓越高，電場強度越大，遷移率越大，帶電粒子移動越快。4.支持介質(zhì)的性質(zhì)包括支持介質(zhì)的黏性吸附對泳動的阻礙作用，支持介質(zhì)的分子篩和電滲作用。此外，溫度升高時，介質(zhì)黏度下降，分子運動加劇，引起自由擴散加快、區(qū)帶變寬和分辨率下降。98現(xiàn)在是98頁\一共有130頁\編輯于星期六二、電泳儀的分類和基本結(jié)構(gòu)99現(xiàn)在是99頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）電泳技術(shù)的分類1.依據(jù)工作原理的不同分移動界面電泳、區(qū)帶電泳(zoneelectrophoresis)、穩(wěn)態(tài)電泳或稱置換電泳等。2.依據(jù)有無支持物分自由電泳和支持物電泳（區(qū)帶電泳）。3.依據(jù)電源控制的不同分恒壓電泳、恒流電泳、恒功率電泳。100現(xiàn)在是100頁\一共有130頁\編輯于星期六4.依據(jù)自動化程度的不同分手工操作、半自動電泳、全自動電泳、全自動電泳分析系統(tǒng)。其他分類方式依據(jù)支持載體的裝置形式，區(qū)帶電泳可分成水平平板電泳、垂直板狀電泳、垂直柱狀電泳、U型管電泳、倒V字形電泳、毛細管電泳等。101現(xiàn)在是101頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）電泳儀的基本結(jié)構(gòu)1.手工電泳儀自動化程度低，其電源、電泳槽，以及電泳條帶分析裝備(或掃描儀)三部分的結(jié)構(gòu)分離，加樣、電泳、電泳后的染色和脫色等均需手工操作，人工設置參數(shù)完成電泳。102現(xiàn)在是102頁\一共有130頁\編輯于星期六2.自動電泳分析儀將電源、電泳槽、烘箱、染色缸等組合在一起，采用計算機對電泳過程進行控制，部分乃至全部操作由電泳儀完成；依據(jù)自動化程度分半自動或全自動電泳儀。全自動電泳儀組成①遷移／烘干／培養(yǎng)模塊、②染色／去色／烘干模塊、③鍵盤、熒光屏、④電源裝置、⑤PC主板等組成。103現(xiàn)在是103頁\一共有130頁\編輯于星期六全自動電泳儀外型圖104現(xiàn)在是104頁\一共有130頁\編輯于星期六三、自動電泳儀的使用和保養(yǎng)105現(xiàn)在是105頁\一共有130頁\編輯于星期六

(一)自動電泳儀的操作使用自動電泳儀就是模擬手工電泳的過程，支持物準備、加樣、搭橋、電泳（遷移）、固定染色、漂洗、脫色、烘干、掃描、計算、打印等依次按程序自動進行。光密度掃描儀的操作同樣全部程控。106現(xiàn)在是106頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）自動電泳儀的保養(yǎng)每天保養(yǎng)的重點應當是電極的維護，每天電泳工作完成后，應當用干濾紙擦凈電極，避免緩沖鹽沉積于電極上或酸堿對電極的腐蝕。每月保養(yǎng)的重點應是掃描系統(tǒng)的比色濾鏡及光源。107現(xiàn)在是107頁\一共有130頁\編輯于星期六四、電泳分析的質(zhì)量控制108現(xiàn)在是108頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）電泳分析前質(zhì)量控制1.電泳分析方法的選擇在進行電泳分析前，加強實驗室與臨床醫(yī)生的溝通，宣傳實驗室所開展的電泳技術(shù)及應用，全面了解電泳儀的結(jié)構(gòu)和原理、電泳結(jié)果的意義，合理使用電泳分析方法。109現(xiàn)在是109頁\一共有130頁\編輯于星期六2.標本的采集與保存（1）標本采集：宜采集新鮮血液，分離血清作為電泳標本；避免標本溶血，否則導致電泳分析異常。腦脊液(CSF)標本也應以新鮮采集為最佳；在做CSF免疫固定電泳時，必須是對同一病人同時采集CSF標本和血清標本。尿液標本以新鮮的晨尿為佳。（2）標本保存：不能立即進行電泳分析的標本血液，應先分離血清，再保存。血清、腦脊液和尿液標本，在2～8℃冷藏保存可穩(wěn)定1周，-20℃冰凍至少可保存1個月，-40℃保存可長達5年。如血清標本加入0.2g／L的疊氮鈉，冷凍保存的穩(wěn)定性更好。110現(xiàn)在是110頁\一共有130頁\編輯于星期六3.電泳試劑的保存應遵照試劑使用說明書的要求保存電泳試劑，避免因電泳試劑產(chǎn)生誤差。大多數(shù)廠家的電泳載體使用的是瓊脂糖凝膠，其保存期至少在半年以上。凝膠片通常在干燥的室溫條件下保存，具有生物活性的試劑(如抗體、酶等)需嚴格按要求保存，其他配套保存試劑應在有效期內(nèi)使用。111現(xiàn)在是111頁\一共有130頁\編輯于星期六（二）電泳分析中的質(zhì)量控制1.標本準備和使用①標本是否需要稀釋或濃縮，應根據(jù)不同電泳要求而定。一般來說，血清蛋白電泳標本不需稀釋；但免疫固定電泳標本一般需要稀釋；尿液電泳分析時，如果尿中蛋白的濃度達不到15g／L～20g／L，應對尿標本進行濃縮處理。②由于冷凍后的血清標本有時會變得黏稠或混濁，影響血清的擴散，所以冷凍的標本在電泳分析前要置室溫平衡。112現(xiàn)在是112頁\一共有130頁\編輯于星期六③由于冷凍標本蛋白或脂蛋白可能降解，解凍后應予以標記，以便在結(jié)果分析時觀察是否存在β-脂蛋白向陰極漂移；越陳舊的血清標本，電泳時這種漂移更明顯。④標本量的要求盡可能做到嚴格和精確，否則所定出的區(qū)帶可能不一致或不清。113現(xiàn)在是113頁\一共有130頁\編輯于星期六2.電泳操作自動化電泳與手工法電泳操作一樣，應注意加樣、電泳、染色等因素對電泳結(jié)果的干擾，如樣品是否同時“點”在凝膠片上，電泳方式的選擇是否正確，染色液是否足夠，掃描膠片是否“對號入座”等。114現(xiàn)在是114頁\一共有130頁\編輯于星期六3.質(zhì)控物正確應用質(zhì)控物應每天插入病人標本中進行操作，以判斷電泳過程的可靠性。自動化電泳分析的質(zhì)控品已商業(yè)化，目前較成熟的商業(yè)性質(zhì)控物主要用于血清蛋白電泳分析。在無合適商品化質(zhì)控物的情況下，也可以考慮用正常人血清。115現(xiàn)在是115頁\一共有130頁\編輯于星期六（三）電泳分析后的質(zhì)量控制電泳后的質(zhì)量控制主要包括電泳結(jié)果的及時發(fā)送、對分析結(jié)果的正確解釋和應用以及電泳分析后自動電泳儀的維護和保養(yǎng)等。116現(xiàn)在是116頁\一共有130頁\編輯于星期六五、電泳分析技術(shù)的臨床應用117現(xiàn)在是117頁\一共有130頁\編輯于星期六（一）蛋白質(zhì)電泳1.血清蛋白電泳許多疾病可使血清蛋白濃度和組分比例發(fā)生改變，形成具有一定特征的血清蛋白電泳圖譜。詳見第十章血漿蛋白質(zhì)與含氮化合物的代謝紊亂。2.免疫固定電泳可對各類Ig及其輕鏈進行分型，最常用于臨床常規(guī)M蛋白的分型與鑒定。一般用于單克隆Ig增殖病、本周氏蛋白和游離輕鏈病、多組分單克隆Ig病、多克隆Ig病的診斷和鑒別診斷。118現(xiàn)在是118頁\一共有130頁\編輯于星期六免疫固定電泳119現(xiàn)在是119頁\一共有130頁\編輯于星期六3.脂蛋白電泳主要用于高脂血癥的分型、冠心病危險性估計，以及動脈粥樣硬化性及相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展、診斷和治療效果觀察的研究等。4.尿蛋白電