紙色譜與薄層色譜法

紙色譜與薄層色譜法第1頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六一.實驗?zāi)康?/p>

1.了解用色譜法定性分析及提純化合物的原理；2.熟悉并掌握薄層色譜及紙色譜的基本操作。第2頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六二.實驗原理

(1)色譜法色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能(分配)的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì),進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配的作用,從而使各組分分離.

流動的混合物溶液稱為流動相；固定的物質(zhì)稱為固定相。

根據(jù)分離的原理不同,可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等,根據(jù)操作條件的不同,又可分為柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等類型。第3頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六(2)薄層色譜

薄層色譜常用TLC表示,按其作用機(jī)理可以分為吸附薄層層析,分配薄層層析等,

基本原理是當(dāng)待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時，由于各組份的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨溶媒向前移動，各組份不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動相移動時受到的阻滯作用小，向前移動的速度快。反之，與固定相相互作用越強(qiáng)的組份，向前移動速度越慢。分步收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達(dá)到將各組份分離的目的。第4頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六薄層層析的優(yōu)點：適用于小量樣品（幾到幾十微克）的分離又可用來精制樣品，特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。第5頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六(3)

紙色譜

紙色譜主要用于多功能團(tuán)或高極性化合物的分析和分離．基本原理是以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜。供試品經(jīng)展開后，可用比移值(Rf)表示其各組成成分的位置，但由于影響比移值的因素較多，因而一般采用在相同實驗條件下與對照物質(zhì)對比以確定其異同。作為藥品的鑒別時，供試品在色譜中所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置，應(yīng)與對照品在色譜中所顯的主斑點相同。作為藥品的純度檢查時，可取一定量的供試品，經(jīng)展開后，按各藥品項下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點的個數(shù)或呈色（或熒光）的強(qiáng)度。

Rf=溶液最高濃度中心至原點中心距離/溶劑前沿至原點中心的距離。第6頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六紙色譜演示第7頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六三.實驗試劑和儀器甘氨酸、亮氨酸的水溶液，兩種氨基酸各取等體積組成混合液，展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸（體積比），2%的茚三酮乙醇溶液。大試管一支，濾紙（2*15cm）,噴霧器一支，電吹風(fēng)一把，毛細(xì)管（口徑1mm）若干支，直尺一把，鉛筆一支1%偶氮苯的苯溶液，1%蘇丹III的苯溶液，1%的羧甲基纖維素鈉（ＣＭＣ）的水溶液，硅膠Ｇ，9：1的無水苯-乙酸乙酯。研缽一個，臺秤，載玻片（7.5*2.5cm）5片，烘箱一個，廣口瓶一個。第8頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六四．操作步驟（一）、薄層色譜偶氮苯和蘇丹III的分離

第9頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六（1）、薄層板制備：將硅膠G和CMC溶液調(diào)成均勻的糊狀，用滴管涂于潔凈的載玻片上，取下涂好薄層板，置水平桌面上于室溫下晾干，在110℃烘60分鐘。置于干燥箱中留以備用。（2）、

點樣：距底邊1cm處劃一橫線作為起始線，點樣直徑不應(yīng)超過2mm，點間距離約為1.8cm，點樣時必須注意勿損傷薄層表面。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴(kuò)散大，像降落傘。取三塊分別點樣試劑為偶氮苯和混合液，混合液和蘇丹III，偶氮苯和蘇丹III

第10頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六（3）

展開：廣口瓶需預(yù)先用展開劑（9：1的無水苯-乙酸乙酯）飽和，將點好樣品的薄層板放入裝有展開劑的廣口瓶中，薄層板浸入展開劑的深度為距薄層板底邊約0.7cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封室蓋，等展開至規(guī)定距離（距薄層板上端1cm左右），取出薄層板，盡快劃一橫線，晾干，測出顯色點與起始線的距離和溶劑上升的距離，并計算比移值。第11頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六（二）

紙色譜--氨基酸的紙上層析（1）取兩片新華一號濾紙，分別用鉛筆在距下端點約1cm處起始線，用直尺從中間折疊，在左右兩側(cè)點樣距約1.8cm，試劑分別為亮氨酸和混合酸，甘氨酸和混合酸.展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸（2ml）。展開劑在2/15cm的大試管。（2）待展開劑上升約7厘米時，取出作終點線后在紅外燈下烘干。（3）干燥后噴上2%的茚三酮乙醇溶液顯色。（4）取一塊薄層板分別點樣亮氨酸和甘氨酸，用展開劑為5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸展開。（5）測出顯色點與起始線的距離和展開劑上升距離，并計算比移值。第12頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六裝置圖薄層色譜紙色譜第13頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六五.

注意事項1.薄層板制備好之后，一定要進(jìn)行活化，除去水分；2.點樣時要注意樣點直徑要不超過2mm。點幾個樣點時間隔應(yīng)1—1.5㎝。一次點樣若不夠，可點幾次，但要等溶劑揮發(fā)后再點下一次，防止量多出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；3.所用濾紙應(yīng)質(zhì)地均勻平整且實驗中手不要觸及濾紙的表面，以免污染；4.避免兩條濾紙在大試管中碰一起，切勿將樣點浸入展開劑中；5.若溶質(zhì)展開后較分散,則選取其最高濃度中心；6.在向濾紙噴灑茚三酮時，要以霧狀噴灑，不能有液滴在其表面凝集，更不能有液滴在其表面流動，以免影響展開效果.第14頁，共15頁，2023年，2月20日，星期六六.思