小柴胡片提取工藝的研究

小柴胡片提取工藝的研究

摘要：目的

優(yōu)選小柴胡片提取工藝最佳條件。方法：采用正交實驗，以提取率、柴胡皂苷a含量和干膏收率為指標(biāo)，進行綜合評分，篩選出最佳提取工藝。結(jié)果：藥材以10倍量水煎煮3次，每次60分鐘，為最佳提取條件。Keys：小柴胡片；正交實驗；最佳提取工藝

小柴胡片方出自張仲景《傷寒論》的“小柴胡湯”名方，現(xiàn)收載于國家標(biāo)準《中國藥典》2020年版一部[1]，處方由柴胡445g、姜半夏222g、黃芩167g、黨參167g、甘草167g、生姜167g、大棗167g組成，為臨床常用中成藥，具有解表散熱，疏肝和胃的作用，全方寒溫并用，升降協(xié)調(diào)，有疏利三焦，通達上下，宣通內(nèi)外之功[2]?，F(xiàn)代藥理研究也顯示柴胡、黃芩有顯著的抗炎及抗病毒作用，柴胡[3]中柴胡皂苷a具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用[4]，是小柴胡片治療外感病，邪犯少陽證的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此，建立本品中柴胡皂苷a的含量測定方法，有助于更好的控制本品的質(zhì)量。本文采用正交實驗的方法，對小柴胡片提取工藝條件進行考察研究。1

儀器與試藥1.1儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠，型號規(guī)格101-4AS）；電子天平CP114（奧豪斯儀器上海有限公司制造）；高效液相色譜儀（包括四元梯度泵，自動進樣器，二極管陣列檢測器，柱溫箱，型號：UltiMate3000，DIONEX，U.S）；色譜柱C18（4.6mm×250mm，5μm，S/N:0J7U73，KromatUniversil）；SK2200HP超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；分析天平（型號AB265-SMETTLERTOLEDO,Switzerland，0.00001g）1.2材料

乙腈和甲醇均為色譜純（美國Tedia公司），柴胡皂苷A對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，編號：VIP(AL)0202），乙醇，純化水，其他均為分析純。柴胡、黨參、大棗、姜半夏、甘草、黃芩、生姜經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室楊竹雅老師鑒定，符合《中國藥典》2020年版（一部）的要求。2

方法與結(jié)果2.1滲漉工藝研究

取處方量1/3的姜半夏、生姜的量，碾磨成粗粉加入70%乙醇浸泡、滲漉，采用單滲漉法做單因素實驗。取24h、48h、72h的浸泡時間，乙醇濃度70%，流出速度為慢速：1~3ml/min，溶媒量為藥材5倍，收集滲漉液，濃縮至恒重，計算結(jié)果為72小時所得浸膏得率5.44%為最大。2.2藥材吸水率測定

取處方1/3的藥材量加入10倍藥材量水，每隔10分鐘測定一次剩余水量，計算吸水率。其結(jié)果為90min達到飽和吸水率為22%。2.3水提工藝研究

以加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為3因素，選用L9(33)正交設(shè)計安排試驗，將柴胡、黨參、大棗、甘草加水浸泡90min后煎煮，待煮沸后加入黃芩，所得濾液濃縮、干燥。見表1、表2、表3。2.4柴胡皂苷a含量測定2.4.1照高效液相色譜法（中國藥典2020年版一部附錄VI

D）測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，檢測波長為210nm。2.4.2對照品溶液的制備

取柴胡皂苷A對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。2.4.3供試品溶液的制備

取重量差異項下的本品，研細，取約0.3g，精密稱定，置100ml量瓶中，加70%乙醇70ml，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.4.4測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。2.5實驗數(shù)據(jù)表1

正交實驗因素水平表水平因素加水量（A）（倍）提取時間（B）（分）提取次數(shù)（C）（次）18301210602312903表2

正交實驗設(shè)計及結(jié)果實驗編號影響因素評價指標(biāo)水平組合ABC干膏重（g）柴胡皂苷a（mg/g）1A1B1C1830130.20.4602A1B2C2860237.60.7203A1B3C3890339.50.7364A2B1C210302330.5025A2B2C31060344.11.1406A2B3C11090128.10.3727A3B1C31230338.50.6328A3B2C11260124.70.2429A3B3C21290237.90.741I35.76733.90027.66737.400II36.06735.46736.16734.733III33.70035.16740.70032.400極差2.0671.56713.0335.000表3

方差分析方差來源偏差平方和自由度F比F臨界值顯著性A6.62921.59819.000B4.14921.00019.000C262.669263.30919.000＊誤差4.1522.6結(jié)果分析：由表中極差值可見：C因素有顯著的影響，影響因素順序為C>A>B，實驗中采用柴胡皂苷a含量和干膏收率為評價指標(biāo)，故得出最佳工藝為：10倍量水煎煮3次，每次60分。姜半夏和生姜滲漉單因素實驗最佳滲漏條件為：用藥材5倍量的70%濃度的乙醇浸泡72小時，以1~3ml/min的流速收集滲漏液所得干浸膏量是最多的。藥材吸水率以90min達到飽和吸水率為22%最佳。3.討論

3.1藥材飽和吸水率測定時要注意用水量和時間的控制，如果測定時間相隔太長，則測出的吸水量誤差大，不容易選出最佳飽和吸水率，而如果測定時間相隔短則耗時費力；藥材用水量以達到能剛好浸沒藥材的量為最佳。3.2在煎煮黃芩時要特別注意黃芩需要在藥材煎煮開了時才可放入，提前放入黃芩苷含量不夠，所以，為了達到黃芩苷含量，需要把黃芩在藥材煎煮開了才可以放入。3.3柴胡皂苷a屬于五環(huán)三萜類齊果烷型衍生物,具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)以及抗驚厥、抗癲病及抗細胞粘附等多種藥理作用。為控制藥材質(zhì)量,一般采用HPLC或HPLC-ELSD法對柴胡中所含柴胡皂昔a進行含量測定,由于柴胡皂昔a的吸收波長在205nm,處于紫外光譜末端,在測定時易受干擾。3.4在稱量干浸膏前必須注意需在干燥器里干燥，以防止空氣中的水分被吸入而影響測定。用分析天平測定時必須注意分析天平需要在水平位置和一個方面相對穩(wěn)定的室內(nèi)環(huán)境中，這樣所測得的數(shù)值才有科學(xué)性。Reference：[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2020年版一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2020:602.[2]許燕萍,蔡小平.從