活體光學(xué)技術(shù)手冊(cè)

PartI.技術(shù)概念說(shuō) 2D與3D成像比 DLIT與FLIT信號(hào)源重 PartII.軟件技術(shù)說(shuō) 自動(dòng)................................................................................................. 圖像- 3D-影像......................................................................................... PartIII.實(shí)驗(yàn)操作說(shuō) 熒光素與成 體內(nèi)外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的............................................. RC2+異氟烷麻醉機(jī)使 PartIV.光學(xué)成像應(yīng)用匯 腫 ...................................................................................................220 PartI.–起來(lái)，并且被用于后面微小漂移的矯正（2count/pixel），這種微小的漂移通常發(fā)生在檢確有暗電荷數(shù)值（大的binning值和長(zhǎng)時(shí)間）。如果不需要暗電荷圖像，軟件將會(huì)使用讀出偏離進(jìn)行去除。暗電荷會(huì)隨著時(shí)間增加，并且在較高的binning值的情況下會(huì)更加明顯。通常用來(lái)判斷暗B2<表示時(shí)間(s)，B表示binning因我們假設(shè)在進(jìn)行體內(nèi)成像時(shí)，所有被檢測(cè)的生物發(fā)光信號(hào)都是樣品在過(guò)程中發(fā)射出來(lái)的。而如果存是磷光源。為維持一個(gè)干凈的成像室，請(qǐng)將成像動(dòng)物放置在黑紙上（如Artagain黑紙，Strathmorecatno.重要提示：請(qǐng)僅使用Perkinelmer認(rèn)證的清潔劑。許多清潔劑中會(huì)含有磷光物！需要已測(cè)試認(rèn)證的清潔物列表，請(qǐng)聯(lián)系Perkinelmer技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。. 而有時(shí)我們沒(méi)有辦法去除樣品的自身發(fā)射光。這種自身發(fā)射光一直伴隨著動(dòng)物（自發(fā)生物發(fā)光），在高靈敏度檢測(cè)弱信號(hào)的時(shí)候會(huì)存在問(wèn)題。Perkinelmer已經(jīng)針對(duì)小鼠的自發(fā)背景光進(jìn)行了一系列測(cè)試處這種自發(fā)生物發(fā)光源目前還沒(méi)被完全解釋清楚。還沒(méi)有外源物質(zhì)被證明會(huì)激發(fā)自身發(fā)射光，而在圖2中顯示，對(duì)照組的白毛小鼠和鼠的圖像有明顯可見(jiàn)的背景發(fā)射光。這些時(shí)間為五分鐘，高靈敏度（高Binning值）條件。白毛小鼠和鼠的發(fā)射光平均大約分別為1600photons/s/cm2/sr和1000photons/s/cm2/sr。由于這些數(shù)值已經(jīng)遠(yuǎn)超過(guò)了IVIS成像系統(tǒng)的最低檢測(cè)極圖2 圖像可以通過(guò)各種方式被顯示出來(lái)，包括偽彩圖像（通過(guò)LivingImagesoftware來(lái)實(shí)現(xiàn)），等高線圖或等（圖1）。最后的圖像結(jié)果相當(dāng)于一張黑白。IVIS成像系統(tǒng)獲得白光成像圖像就是一張灰色的偽彩圖像。1. 和數(shù)字一起顯1. 和數(shù)字一起顯 描 CCD檢測(cè)的自帶數(shù)值。圖像獲取的檢測(cè)器 CCD檢測(cè)器上入射光子數(shù)計(jì)量的一種設(shè)定要進(jìn)行恰當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)。調(diào)整合適的圖像 Radiance -Radiant -度 效率（表面熒光）光值（樣品發(fā)射光/照射光強(qiáng)度）NTF字輸出顯示。其測(cè)定計(jì)數(shù)值（也被稱(chēng)作模擬數(shù)字轉(zhuǎn)換器單元（ADU）或相對(duì)生物發(fā)光單元））與每個(gè)2ROI（計(jì)數(shù)模式---圖3量（光子數(shù)/秒。當(dāng)細(xì)胞存在于組織度（photons/second/cm2/sdian當(dāng)圖像數(shù)據(jù)以發(fā)射光值的形式顯示時(shí)，單位會(huì)切換至光子數(shù)/平方厘米/球面度針對(duì)不同范圍從500-700nmCCD響圖圖4不同F(xiàn)OV=樣品發(fā)光量/光照強(qiáng)度10-210-9。當(dāng)ROI測(cè)定完成后，ROI內(nèi)的總效率是整個(gè)ROI區(qū)域內(nèi)每個(gè)像素的效率值總和，所以最后緣的光。LivingImage軟件提供了一種矯正算法，用于補(bǔ)償透鏡收集效率的不同。這種方式使得整1Bialkaliphotocathode(▲)Back-illuminatedCCD(◆)Front-illuminatedCCDIVISCCDsLensApertureFOV=25cm）。您可以使用控制板（ControlPanel）FOV推薦光源為f/2或f/4。2圖像的時(shí)間同樣會(huì)影響靈敏度。收集到的光子數(shù)量直接和成像的時(shí)間相關(guān)。例如，兩分鐘時(shí)間獲得的圖像的光子數(shù)是同樣情況下一分鐘時(shí)間的兩倍。遇到非常弱的樣品的時(shí)候，更長(zhǎng)的時(shí)間將會(huì)更有效。盡管如此，有時(shí)候也受限于各種背景噪聲，如特定的暗電荷會(huì)隨著時(shí)間的增加而增強(qiáng)。關(guān)于背景噪聲的的信息請(qǐng)參見(jiàn)ConceptTechNote1-生物發(fā)光背景源及校正。視野范圍（例如，一張圖像的拍照條件為binning=4，F(xiàn)OV=20cmbinning=8，Binning電荷耦合器是由二維的像素陣列組成的光敏感型檢測(cè)器。每張獲取之后，每個(gè)像素都包含有電荷，而電荷量與像素過(guò)程中捕獲的光信號(hào)量成正比。軟件會(huì)測(cè)定每個(gè)CCD像素單元中的計(jì)數(shù)值，詳見(jiàn)IVIS1024×10242048×2048CCD，因此具有高水平的空間分辨率。binning=1時(shí)，每個(gè)像素都被讀出，而且像素的大?。ㄏ袼氐臄?shù)量）CCD像素的物理數(shù)量是相同的，如（3）。3CCDbinning24binning4，16Binning=Binning=Binning=當(dāng)binning=2時(shí)，CCD上的四個(gè)像素會(huì)以2×2進(jìn)行合并組合，在讀出之前被相加，該種組合的總數(shù)量會(huì)被則可以使用LivingImage軟件中Tools-Preference-CameraSettings框內(nèi)的ManualBinning。1Binning是來(lái)自Windows7/LivingImage4.22周?chē)徑袼兀òū旧硐袼卦趦?nèi)）的平均強(qiáng)度。如圖4顯示，3x3像素鄰近區(qū)域。圖圖 3x3像素鄰近區(qū)圖圖 IVISImagingSystem200圖圖 IVISImagingSystemLumina,Lumina100Series,andLumina50400-850nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有很高的激發(fā)性能。分光反射鏡為避免光纖組件的過(guò)熱，Image軟件可以控制光照強(qiáng)度水平（關(guān)、低或高）。光照強(qiáng)度為低設(shè)置時(shí)，大概是高設(shè)置的18%左右。IVIS系統(tǒng)背部的激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)輪（5）。光經(jīng)過(guò)光纖導(dǎo)入一個(gè)準(zhǔn)直透鏡，透鏡后是25mm直徑的激發(fā)光濾片。IVIS12個(gè)位置的激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)輪，可以在上面選擇多達(dá)11個(gè)的熒光濾光片（原來(lái)更老的系統(tǒng)只有五個(gè)濾光片）。其中一個(gè)濾光片的間隙上裝有一個(gè)光擋板，用于在進(jìn)行生物發(fā)光成像過(guò)程中，阻擋外界光進(jìn)入成像室。LivingImage軟件可以控制激發(fā)濾光片的轉(zhuǎn)輪。5情況進(jìn)行處理。當(dāng)效率模式被選擇的時(shí)候，被檢測(cè)的熒光圖像會(huì)以參考照明圖像進(jìn)行均一化。關(guān)于效率的信息，詳見(jiàn)ConceptTechNote2-圖像數(shù)據(jù)顯示和測(cè)定。制。從下方的透射樣品成像模式具有精確的x-y，以用于對(duì)深樣品更高靈敏度的檢測(cè)及精確的切換（IVISAcquisitionControlPanel或ImagingWizard）有的IVIS成像系統(tǒng)都需要每個(gè)濾光片輪上有一個(gè)空的位置，以用于生物發(fā)光成像。可能會(huì)有（一些雜光沒(méi)有被濾光片，而被相機(jī)檢測(cè)到）。濾光片的構(gòu)成材質(zhì)可能會(huì)影響濾光片 圖圖 光譜距離為帶寬，帶寬值通常為25-50nm。的。特別是在更短的波長(zhǎng)（400-500nm）范圍內(nèi)，斜坡會(huì)更陡，這就需要使用帶寬25nm的窄帶濾光10位窄帶激發(fā)濾光片：415nm760nm（30nm帶寬18490-850nm（20nm帶寬IVIS成像系統(tǒng)具有熒光功能，標(biāo)配8位激發(fā)濾光片和4位發(fā)射濾光片（Table1.1）。同時(shí)也有定制的濾光片可選。IVIS成像系統(tǒng)的熒光成像波長(zhǎng)范圍為400-950nm，針對(duì)相當(dāng)寬范圍的熒光和熒光蛋白的應(yīng)對(duì)于體內(nèi)的應(yīng)用，有一點(diǎn)很重要，波長(zhǎng)范圍最好在600nm以上。對(duì)于波長(zhǎng)范圍低于600nm的光，很容易在進(jìn)行熒光成像時(shí)，激發(fā)光必須到達(dá)動(dòng)物體內(nèi)的熒光基團(tuán)，才能開(kāi)始整個(gè)熒光激發(fā)過(guò)程。一旦熒光圖圖 在600-900nm范圍內(nèi)，光對(duì)組織的性最高，產(chǎn)生的自發(fā)熒光較低。因此，選擇在600-900nm范圍內(nèi)的活性熒光基團(tuán)，是非常重要的。一些熒光基團(tuán)，例如GFP的活性范圍在450-600nm之內(nèi)，也可用，但熒光信號(hào)通常要比生物發(fā)光信號(hào)強(qiáng)，所以時(shí)間要更短，一般在1-30秒之間。亮的信號(hào)可用較小的于熒光成像。更高的光圈值會(huì)改善景深，獲得一個(gè)更銳利的圖像。有關(guān)光圈設(shè)定的細(xì)節(jié)，請(qǐng)參考檢測(cè)靈敏度（DetectionSensitivity）章節(jié)(選擇菜單欄里的Help→Library)CountsPhotos發(fā)光值（光子數(shù)率單位顯示的圖像數(shù)據(jù)沒(méi)有單位，表示激發(fā)光和入射光的比例。有關(guān)關(guān)于效率的描述，請(qǐng)參考圖像顯示和測(cè)定（ImageDisyandMeasurement）章節(jié)(選擇菜單欄里的Help→Library)。表1 描 CCD檢測(cè)的自帶數(shù)值。圖像獲取的檢測(cè)器 CCD檢測(cè)器上入射光子數(shù)計(jì)量的一種設(shè)定要進(jìn)行恰當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)。調(diào)整合適的圖像 Radiance -Radiant -度 效率（表面熒光）光值（樣品發(fā)射光/照射光強(qiáng)度）NTF圖圖 圖圖 以對(duì)的組的熒光信號(hào)一化處理。處理后的圖像數(shù)據(jù)沒(méi)有單位，通常范圍在10-2到10-9之間。的參考圖像。在儀器交付以前，參考圖像已經(jīng)過(guò)測(cè)定，并存在LivingImage文件夾中。圖12GFP（445-490nm，發(fā)射515-575nm）。圖圖 黑色的聚苯乙烯板具有最小的發(fā)射信號(hào)，而白色聚苯乙烯板具有最高的發(fā)射信號(hào)。（成像參數(shù)：GFP 時(shí)間4秒）13在這塊黑色聚苯乙烯孔板上有四個(gè)對(duì)稱(chēng)的熱點(diǎn)，表示有照射源的鏡面放射。（成像參數(shù)：GFP濾光片、 時(shí)間4秒）品臺(tái)潔凈。如果您使用的透射光模式，請(qǐng)不要使用黑色的Lexan?薄片，否則信號(hào)將會(huì)被阻擋。發(fā)熒光、光和來(lái)自IVIS系統(tǒng)成像室內(nèi)部微弱的自發(fā)熒光。一個(gè)環(huán)狀的結(jié)構(gòu)是典型的背景自發(fā)熒光/圖圖 像表示來(lái)自黑色Lexan薄片光的典型環(huán)狀結(jié)構(gòu)，黑色Lexan薄片是一種具有低自發(fā)熒光的材料， 5秒圖圖 光時(shí)間4秒）（ 物飼料改成alfalfa-的嚙齒類(lèi)食物是減少自發(fā)熒光最好的方法。通常要用對(duì)照組小鼠對(duì)背景自發(fā)熒光進(jìn)圖 圖圖18顯示為一組 熒光和生物發(fā)光發(fā)射的對(duì)比圖。這個(gè)例子里，3×106個(gè)PC3M-luc/DsRed雙標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞被 射到動(dòng)物的背部區(qū)域。該細(xì)胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了螢火蟲(chóng)螢光素 和DsRed2- 在這個(gè)例子里，熒光成像需要至少需要3.8×105個(gè)細(xì)胞才能獲得比組織自發(fā)熒光高的信號(hào)，而生物發(fā)光 參考LivingImage軟件用戶手冊(cè)里面的ImageMath章節(jié)。進(jìn)行背景去除，將成像室內(nèi)的樣品清空，測(cè)定熒光背景信號(hào)（選擇主菜單上的Acquisition→FluorescentBackground→MeasureFluorescentBackground）。在LivingImage軟件中，背景信號(hào)被獲取之后，在控制板（controlpanel）上會(huì)出現(xiàn)SubFluorBkg的復(fù)選框。您可以使用該復(fù)選框開(kāi)關(guān)背圖圖19對(duì)比暗電荷偏離去除（左）和熒光背景去除（右）。右邊的圖已通過(guò)熒光背景去除選項(xiàng)，對(duì)鼻錐 與去除儀器熒光背景（SubtractingInstrumentFluorescentBackground）章節(jié)里描述的方法不同，前章節(jié)里高水平的組織自發(fā)熒光會(huì)限制對(duì)外源熒光基團(tuán)檢測(cè)的靈敏度，特別是在400-700nm的可見(jiàn)光區(qū)域。即使從對(duì)原始激發(fā)濾片圖像信息中提取出背景濾片圖像。的信息，請(qǐng)參考LivingImage軟件用戶手冊(cè)中同時(shí)也顯示了背景濾光片（DsRedBkg）、初始激發(fā)濾光片（DsRed）和激發(fā)濾光片（DsRed）的帶通。圖20表示IVIS使用初始激發(fā)濾光片和背景濾光片獲取的圖像，和自發(fā)熒光校正后的。區(qū)域（ROI）動(dòng)物背景的發(fā)光峰值。在校正圖像里，使用均誤差（RMSerror）對(duì)背景進(jìn)行定量。原這種提高可以使檢測(cè)到的最少細(xì)胞量從1.5×105改進(jìn)到6.7×103。圖圖 圖21通過(guò)背景激發(fā)濾片進(jìn)行自發(fā)熒光去除技術(shù)的光譜數(shù)據(jù)。這顯示PKH細(xì)胞的激發(fā)和發(fā)射光譜，及小鼠組織的激發(fā)光譜。同時(shí)包括了使用這種時(shí)所用的藍(lán)偏背景濾片（DsRedBkg）、原始激發(fā)濾SpectralSpectralPre-clinicalinvivoTECHNICA NOT光譜分離技術(shù)是小動(dòng)物熒光成像的一種關(guān)鍵技術(shù)，是為了將探針信號(hào)與背景信號(hào)或不同探針信號(hào)區(qū)LuminaIII19塊激發(fā)光濾片已充分滿足多光譜掃描的需要。另外，LuminaIII配備的濾光片均為從世界最大的濾光片廠家Semrock定制的硬涂層耐損傷高透光濾光片，SemrockvsCompetitor。綜上所述，LuminaIII基于高數(shù)量、高品質(zhì)濾光片的配置，可實(shí)現(xiàn)最優(yōu)質(zhì)的III具備全球公認(rèn)的用于光譜拆分的金標(biāo)準(zhǔn)專(zhuān)利分析算法，通過(guò)這種分析算法可進(jìn)行背景光去除及多射波長(zhǎng)540nm，接近GFP的波段，為高背景低波段）的熒光FITC。成像后未使用光譜分離技上圖：Rawdata（光譜分離前）,5ngFITC的信號(hào)肉眼隱約可見(jiàn)，背景熒光高，信噪比低，3ngFITC的信號(hào)難以辨別。FITCdye-PBS0.05μg/mlFITC（lefttube）&0.03 μg/mlFITC（righttube）熒光素酶獨(dú)一無(wú)二的發(fā)射光譜信號(hào)和組織的光學(xué)特征使得LivingImage軟件可檢測(cè)到小動(dòng)物體內(nèi)光或多張波長(zhǎng)位于560-660nm之間的single-view。關(guān)DLIT分析的詳細(xì)內(nèi)容，請(qǐng)見(jiàn)光源的DLITFLIT重建。LivingImage軟件采用獲取的single-view光譜學(xué)信息來(lái)估算發(fā)光細(xì)胞的深度。LivingImage運(yùn)用螢火蟲(chóng)熒光素酶生物發(fā)光波段為500700nm，這一波段與組織發(fā)光波段能夠形成鮮明對(duì)比（1。火蟲(chóng)熒光素酶發(fā)光光譜采用PC3M細(xì)胞在37℃下測(cè)量。

（μ's優(yōu)化散射系數(shù)（μ's定義為）光子在組織內(nèi)散射前路徑的反路徑。 （2）,反應(yīng)光在空氣-1.4。該模型假設(shè)組織具有光學(xué)均一性，LivingImage軟件提供多種組織光學(xué)性能可進(jìn)行選擇。種細(xì)胞系。這一光譜圖用來(lái)normalize軟件在不同波段測(cè)量得到的光子通量值。:IVIS200成像系統(tǒng)用560600nm6組濾光片獲取小鼠序列圖，每組濾光片間隔20nm。圖2鼠腫瘤轉(zhuǎn)移部秒，在其余波段時(shí)間=60秒。使得每片呈現(xiàn)出~2000的信號(hào)。將Normalize后的數(shù)據(jù)代入解析1中，第2頁(yè)S=光源發(fā)射出的絕對(duì)光子通量，d=光源深度（4）3 繪制的線性結(jié)果于測(cè)量的精密度和光學(xué)特性測(cè)定的精密度。這一方法的準(zhǔn)確性多取決腹部朝上時(shí)腹部朝上時(shí)背部朝上時(shí)如果光信號(hào)很微弱或者在組織中位置很深，那么它的強(qiáng)度可能幾乎過(guò)組織的自發(fā)熒光，光信號(hào)更580nm發(fā)生在二維水平，二維光學(xué)成像缺陷主要表現(xiàn)于：1、無(wú)法獲取真實(shí)的3D2、無(wú)法進(jìn)行絕對(duì)精確定量；3、無(wú)法實(shí)現(xiàn)信號(hào)的觀測(cè)；4、無(wú)法與其它分子成像系統(tǒng)（如CT、PET、MRI等）進(jìn)行聯(lián)表光斑信號(hào)，因此出體內(nèi)真實(shí)信號(hào)的深度信息、3D發(fā)光信息，并且無(wú)法進(jìn)行不同深度信號(hào)定量因此，要獲取完整豐富的生物學(xué)數(shù)據(jù)，必須在三維水平進(jìn)行成像、觀測(cè)及分析。IVISSpectrum是目前全球唯一一款同時(shí)具備生物發(fā)光及熒光三維成像能力的小動(dòng)物成像系統(tǒng)，確定量的信息，更為嚴(yán)謹(jǐn)、全面地觀察小動(dòng)物體內(nèi)生物學(xué)反應(yīng)，完成小動(dòng)物成像系統(tǒng)從二：從而導(dǎo)致激發(fā)光能量過(guò)于分散而無(wú)法有效激發(fā)體內(nèi)部位的信號(hào)，同時(shí)也造成大范圍自發(fā)熒光的產(chǎn)生。IVISSpectrum在具備反射照明滿足淺層信號(hào)成像的同時(shí)，還具備有透射成像技術(shù)，這種底部透射技術(shù)結(jié)合了快速掃描（RasterScan）方式，并采取每點(diǎn)兩次誤差影響，最終得到準(zhǔn)確的成像結(jié)果。透射成像技術(shù)的應(yīng)用，很大程度擴(kuò)展了光學(xué) DLITDLIT與FLITDLITFLIT生物發(fā)光成像斷層掃描（DiffuseLuminescenceImagingTomography(DLIT)）是一種通過(guò)分析表660nm）(熒光圖像需要在IVISSpectrum或IVISSpectrumCT上使用同樣發(fā)射/激發(fā)光濾片在不同的透射光源位置上 備注：如果在ControlPanel上選擇結(jié)構(gòu)Structure選項(xiàng)，會(huì)自動(dòng)獲取結(jié)構(gòu)照明圖像。圖圖 載物臺(tái)和結(jié)構(gòu)照明投光器之間的距離（l），計(jì)算得到角度（θ）(2)。2Dandl構(gòu)成給出的三角形的兩個(gè)直角邊：tanθ=D/lh=Δx/tanIVISSpectrumCT、IVISSpectrum和IVIS200系列都做過(guò)絕對(duì)校準(zhǔn)，所以每個(gè)CCD像素的電子數(shù)都可以被回溯到樣品表面，針對(duì)每個(gè)成像的表面元素產(chǎn)生一其發(fā)光信號(hào)的絕對(duì)值 dian)（圖3）。成像系統(tǒng)收集來(lái)自表面元素的發(fā)射光，從一定角度（θe）（相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)面和表面元間進(jìn)量）到朝向前透光孔的一個(gè)固定角度dΩ。表面發(fā)光值L（θe）與表面元素內(nèi)的光子密度ρ(photons/mm3)直接相軟件會(huì)將樣品分解為體積單元（體素/voxels）的實(shí)體網(wǎng)格。每素被當(dāng)做在其中心具有一個(gè)點(diǎn)光源。中，當(dāng)獲得每個(gè)陽(yáng)性體素的信號(hào)源強(qiáng)度時(shí)（方程2），盡量將χ2值最小化（方程2）。4DLIT3D從Plot下拉列表中的可在光SourceSpectrum。僅在DLIT時(shí)需要。

MouseTissueXPM-（MousePhantomSourceSpectrumDescriptionCBCBSeapansy(Renillareniformis TritiumBeadPhosphor-coatedglassbeadcontainingtritiumgas.含有氚氣的磷Spectrumforbead#5.Bead5備注：螢火蟲(chóng)螢光素酶的光譜與溫度和PH值有關(guān)。表中提供的數(shù)據(jù)僅是在溫度為37°C，PH范圍為7.0您可以在組織特性（TissueProperties）下拉列表中看到組織的光譜特性值。組織的光譜特性值根據(jù)波長(zhǎng)進(jìn)行繪制。選擇與成像樣品最具有代表性的光學(xué)特性描述。通常選擇―小鼠組織（MouseTissue）‖ PartII.成像向?qū)谦@取序列圖像非常有利的工具?？梢栽诳刂泼姘鍐?wèn)成像向?qū)В⒁龑?dǎo)用戶獲取gd選擇生物發(fā)光或熒光成像中的多種幫助向FilterConfig。出現(xiàn)的表格可提供所有的可色-未被選擇的變成白色。選擇好濾光片對(duì)后，點(diǎn)擊Close然后點(diǎn)擊Next。如自動(dòng)/手動(dòng)，F(xiàn)OV，樣品高度和透相關(guān)設(shè)置信息請(qǐng)參考用戶手冊(cè)或者相關(guān)技術(shù)說(shuō)明。 Auto-exposureAuto-exposure可自動(dòng)設(shè) 時(shí)間、f/stop和binning來(lái)獲取定量的最佳信號(hào)ttoexttoexxpoosuref/stotopbinning可以通過(guò)點(diǎn)擊主菜單的Edit>Preference，在Acquisition選項(xiàng)中設(shè)置包括自動(dòng)等參數(shù)的排列TargetCountMinimum3000counts左右來(lái)顯示低強(qiáng)度信號(hào)（例如，研究原位腫瘤的微小轉(zhuǎn)移灶，高通量同時(shí)對(duì)多只小鼠成像。另一方面，將TargetCountMinimum設(shè)定為高于3000count會(huì)提高過(guò)曝現(xiàn)象發(fā)生的幾率。FirstPreference調(diào)整，軟件會(huì)用調(diào)整SecondPreference和thirdpreferences來(lái)達(dá)到在圖像的ToolPaletteCorrections/Filtering選項(xiàng)。選CropArea，可以通過(guò)調(diào)節(jié)繪制的方形選框?qū)μ囟▍^(qū)域進(jìn)行CropSet鍵后，儀器背景區(qū)域?qū)⒈蛔詣?dòng)從結(jié)果圖 勾選UseasBKGforfutureROIs，然后選擇EntireSequence。后續(xù)每一個(gè)在上測(cè)量的ROI將會(huì)自動(dòng)減去BKG1ROI測(cè)量得到的平均背景信號(hào)值。據(jù)表中顯示的特定背景ROI已經(jīng)被減去了。65,535個(gè)光子。60060000的范圍內(nèi)；最 y下拉 這篇指南給您提供具體操作步驟——從手動(dòng)獲取圖像序列到光譜分離的過(guò)程。LivingImage4.3.1軟件版針對(duì)您的樣品使用相應(yīng)特定熒光基點(diǎn)擊序列eeeetp，在eeceEitr我們建議在獲取序列的時(shí)候除了包我們舉一個(gè)例子：AlexoFluor680，激發(fā)679nm/702nm備注：在上面的例子中，進(jìn)行發(fā)射掃描，CCD45-50nm的675nm/發(fā)射700nm的濾光片組選擇在內(nèi)。參數(shù)（時(shí)間、Binning、光圈、激發(fā)光濾備注：有關(guān)自動(dòng)的設(shè)置請(qǐng)參見(jiàn)Living

導(dǎo)入圖像序列，將單位切換至Radiant在yze框中，選擇要用來(lái)分析的圖像。請(qǐng)注意要確認(rèn)每像保持在有過(guò)飽和過(guò)低信號(hào)的，請(qǐng)去掉這些從下拉單中選擇光譜分離的方法：Library，GuidedAutomatic或者物體（對(duì)照作為僅自發(fā)光的有熒光的域通有點(diǎn)。而，自擇對(duì)照小鼠同樣的解剖置來(lái)作為陽(yáng)性小鼠的自發(fā)熒光標(biāo)記物是一個(gè)很好的Loitiltesorlal或magigWiard建議在進(jìn)行光譜分離過(guò)程中盡量使用該特Image軟件中的光譜分離具有相似的設(shè)置，在這種另外，Manual和Guided模式可以用于創(chuàng)建Spectraltudies有多達(dá)4個(gè)組分特征可供選擇。如果光譜組分?jǐn)?shù)量未知，PrincipleComponent ysis選擇會(huì)被激活，然

一旦熒光基團(tuán)的準(zhǔn)確數(shù)量通過(guò)green+按鈕被添加在ProbeInformationlist之后，可通過(guò)以從AF680+自發(fā)熒光組分中被提取出來(lái)，ComputePureSpectrum。在ImageCube中，置。使用PenTool可以標(biāo)記ImageCube中 putePure putePureSpectrumAF680信號(hào)的圖像（在這里以藍(lán)色表示。另外，SpectralLibrary的組分可以通過(guò)點(diǎn)擊綠色的+UnmixingWizardPenTool下拉菜單里的Import選項(xiàng)，導(dǎo)入Spectral一旦通過(guò)ComputePureSpectrum算法將純的AF680Imagecube中將AF680信號(hào)完全回溯分離出來(lái)。

成以后，分離的組分可以保存在Spectral種背景信號(hào)（例如，熒光+自發(fā)熒光。Guided選項(xiàng)通常被應(yīng)用到含有陽(yáng)性和對(duì)照的已建立的SpectralLibraries，而且也可以被用做區(qū)域型的特GuidedUnmixing。使用鉛筆工具，在Imagecube的光譜列使用已建立的光譜文件進(jìn)行分離熒光基團(tuán)信號(hào)，原來(lái)保存的SpectrumLibrary是對(duì)應(yīng)相同設(shè)置的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)導(dǎo)入的圖像序列的光譜分離。如果光譜文庫(kù)過(guò)Guided或Manual的選項(xiàng)針對(duì)合適的對(duì)照和

如果光譜文庫(kù)中包括序列的設(shè)置，可以點(diǎn)擊StartUnmixingSpectralLibrary文件可以被運(yùn)用到該圖像序列時(shí)，導(dǎo)入LoadSpectralLibraryshowqualifiedonly的選項(xiàng)，可以去除在圖像序列獲取中不合適的文件名會(huì)以藍(lán)色，點(diǎn)擊Apply按鈕。序列會(huì)自SpectralLibrary文件中的方法進(jìn)行分離，并光探針顏色編碼的合成圖像。每一像都可以通每像都有自動(dòng)標(biāo)尺，并且在每像的頂部上方ROI工具熒光探針的發(fā)射曲線靠左，在500nm的發(fā)射光以上選擇標(biāo)準(zhǔn)是基于假設(shè)用戶使用型號(hào)為IVISSpectrum、LuminaIII、XRKinetic有多組IVISLumina、LuminaII、50、100或200，則僅需選擇探針濾光片對(duì)應(yīng)的背對(duì)為激發(fā)DsRed/發(fā)射DsRed-自發(fā)背景熒光濾光片則選擇激發(fā)DsRedBKG/發(fā)射DsRed。

3ROI來(lái)確定k值。k值可顯示在不同波段的ROI和選擇圈選的ROI非常重要。 -圖像-第一步是選擇作為底層的。請(qǐng)注意，來(lái)自于不適于的。這能僅適用于同一動(dòng)物被多種markers標(biāo)記時(shí)的圖像。選定需進(jìn)行的層后，可選擇和調(diào)節(jié)每一提示：強(qiáng)度單位形式只可顯示為兩像共用的單位，如果存在生物發(fā)光光源，RadiantEfficiency多種格式，如PNG、JPG、BMP。每一片可在獨(dú)立窗口中打開(kāi)。將設(shè)置統(tǒng)一為一個(gè)標(biāo)尺。此時(shí)調(diào)節(jié)標(biāo)尺會(huì)使整個(gè)序列圖同時(shí)被如果需要對(duì)SequenceGroup中的圖方的EditSequence圖標(biāo)。在Browser中打開(kāi)的每片都會(huì)列在BrowserImages窗口中，并可以直接加到生成如果新生成的序列組被保存，在RetiredImages窗口中會(huì)出現(xiàn)刪除選項(xiàng)，同時(shí)后SequenceClicks上點(diǎn)擊選中（或者按住Control-點(diǎn)擊多選），您可采用RetireMoveUpMoveDown鍵對(duì)圖圈選圈選行選擇。形狀無(wú)關(guān)緊要，不同形狀可繪制不同的ROI。記住此規(guī)則—ROIs越大越好。背景自發(fā)熒光水請(qǐng)注意紅色方形ROI，較大的圓圈ROIs和輪廓線ROIs總信號(hào)通量相似—然而在強(qiáng)度最高紅色區(qū)域圈選的ROI信號(hào)通量只有信號(hào)14%（其信號(hào)通量占其它三個(gè)ROI信號(hào)通量平均值的百分果用戶決定使用該功能，那么在ToolPalette中ROIToolsThreshold%滑塊會(huì)被激活。推薦threshold5-10%之間。使用draw工ROI，點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵閉SubjectROIs的形狀只能是方形。用戶只有這一個(gè)形狀可以選擇。SubjectROI，使其圈選住整只小鼠。雙擊ROIROIProperties。屬性中可對(duì)該SubjectROI的顏色、大小和標(biāo)注進(jìn)行更改。備注：SubjectROIsMeasurementROI圈選會(huì)自動(dòng)聯(lián)接MeasurementROIs進(jìn)行手動(dòng)聯(lián)接。MeasurementROI的邊框可進(jìn)入ROILabel，對(duì)您的ROIs通過(guò)在ToolPalette中ROITools部分選擇MeasureROIs，生成一個(gè)展示所有在序列圖中圈選ROIs的ConfigureConfigureMeasurementsCustomize鍵來(lái)調(diào)整顯示數(shù)據(jù)列表。ROIMeasurementsConfigureMeasurements窗口的左側(cè)。不僅可顯示ROIEditImageLabels窗口，如獲取日期和時(shí)間。在SubjectLabel排序的。另外，可通過(guò)左右拖拽整列數(shù)據(jù)，對(duì)數(shù)據(jù)按照需要進(jìn)行整理。在窗口右下角點(diǎn)擊SelectAllCopy鍵，數(shù)據(jù)可直接粘貼于?Excel?或其它電子表格分析程序中。于反射照明成像方法。對(duì)于組織的熒光光源，由于激發(fā)光為集中的2mm光束，且激發(fā)光與檢測(cè)CCD在動(dòng)物的兩側(cè)，因此該透射成像方式得到的組織自發(fā)光水平會(huì)更低。6a14b和熒光透射成像SequenceSetup提示：LI4用戶可以設(shè)置時(shí)間，相關(guān)信息請(qǐng)參考自動(dòng)技術(shù)說(shuō)明2。 Setup窗口。 在TransilluminationSetup窗口左上端可以勾選快速的對(duì)比，可在窗口上端勾選MaskGridPointsToSubject選框會(huì)自動(dòng)去除動(dòng)物區(qū)域點(diǎn)表示建議避免選中的區(qū)域。按住鍵盤(pán)上的Ctrl鍵并按照以下規(guī)則中的情 內(nèi)—600-60,000counts。

在上方的下拉菜單中將單位更換成NTFEfficiency可對(duì)信號(hào)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和校準(zhǔn)。有關(guān)NTFEfficiency的內(nèi)容請(qǐng)參見(jiàn)熒光透LivingImage4以上的軟件版本中才能實(shí)現(xiàn)。該標(biāo)準(zhǔn)化透射熒光的技術(shù)說(shuō)明是1.通過(guò)中性密度濾光片激發(fā)/620

在進(jìn)行熒光透射成像時(shí)，較薄組織所對(duì)應(yīng)的光吸收較少，小鼠身上每個(gè)透射成像區(qū)域所對(duì)應(yīng)的組織和光吸收信息可以通過(guò)背景透射光圖像來(lái)反映。熒光探針特異性的透射光圖像是使用與背景透射光圖像相同的發(fā)射濾光片拍攝的，但利用了一張熒光探針?biāo)鶎?duì)應(yīng)的特異性激發(fā)濾光片，之后通過(guò)背景透射光圖像來(lái)對(duì)特異性透射光圖像進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。該標(biāo)準(zhǔn)化透射熒光技術(shù)可以有效地―去除‖由于動(dòng)物組織的光密度差異導(dǎo)致的全部背景信號(hào)，還原出熒光探針真實(shí)特異的信號(hào)。 Panel中或ImagingWizard窗口中將“標(biāo)準(zhǔn)化”選項(xiàng)框勾選上。

Wizard窗口中是默認(rèn)被勾選上的像（被成為Fluorescent）。圖4.激發(fā)535nm/發(fā)射620 成NTFEfficiency。6.使用NTFEfficiencyLivingImage4軟件中，我們加入快速掃描功能。快速掃描過(guò)程中，2D熒光透射成像序列圖像下圖所示的一張成像同時(shí)能夠節(jié)約用戶時(shí)間。使用快速掃描功能掃描一整只小鼠所需時(shí)間在2-5分3D成像（FLIT–3D）3D成像所需的空間信建。使用不能進(jìn)行FLIT成像。因?yàn)槠つw中的黑色素會(huì)影響重建算法中對(duì)被測(cè)對(duì)象和成像臺(tái)的區(qū)分。（NTF - IVIS?Spectrum配備有激光振鏡，用來(lái)在儀器表面投射FOV。當(dāng)打開(kāi)成像箱門(mén)時(shí)可以看到其照射在該輪廓被稱(chēng)為表面拓?fù)湫蚊?，在DLIT3D信號(hào)重建過(guò)程中被用來(lái)計(jì)算熒光信號(hào)深度和強(qiáng)度。OrientationDorsal或Ventral，在SubjectNude/Furredmouse或Phantom―ue‖選項(xiàng)，對(duì) 鼠選擇―‖選項(xiàng) 到一合適的表面結(jié)構(gòu)。FLIT?杈垤與債像髬?抺槝?核和騾光果壎抒擦-表面挾扨 對(duì)于所有的3DFLIT重建，默認(rèn)建議的圖像單位格式為NTF效率。這種情況下軟件會(huì)利用NTF進(jìn)行背Fluorescence–NormalizedTechnical。備注：如果是通過(guò)ImagingWizard獲取的，軟件會(huì)自動(dòng)識(shí)別Wizard中輸入的濾光片信息。 在DataPreview下，可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)節(jié)，并設(shè)定閾值。閾值通常默認(rèn)5%或以上，因?yàn)樽园l(fā)熒小鼠對(duì)象進(jìn)行蒙板區(qū)域選擇，以排除其他區(qū)域。信息請(qǐng)參照UserGuide中關(guān)于該工具的使用。當(dāng)重建完成以，會(huì)在ets下展示計(jì)算的數(shù)信息?？梢源騊otoneityMa，并通Mae和mle在最底部一行。如果底部一行顯示出ae和mltd圖偏差接近%（以綠色來(lái)顯示），則表a一旦重建結(jié)果被保存以后，在ToolPalette中的3DOpticalRegistration。默認(rèn)情況下，SubjectSurface，或Topographicmap會(huì)自動(dòng)打開(kāi)，以便進(jìn)行樣品內(nèi)部信號(hào)源的3D定位。也可以通過(guò)Surface中的選項(xiàng)，對(duì)Subject另外，可以通過(guò)點(diǎn)擊DisyPhotonDensityMap按鈕，選擇顯示分析中每個(gè)波長(zhǎng)的Simulated或Measured的2D光漫射的體素的光強(qiáng)度以TotalFluorescentYieldpmol/Mcm表示，會(huì)出現(xiàn)在Source中的MeasuredSources框信號(hào)源的深度可以使用VoxelSelectionTool左側(cè)的MeasurementCursor來(lái)確定。點(diǎn)擊Source右CoronlSagittl nesTools可以滾動(dòng)選擇動(dòng)物的axis，有關(guān)信號(hào)源和相3D信號(hào)源可以制作成動(dòng)畫(huà)，以.avi，.mov，.mpg和.mp4的格式輸出。該功能可以在Tools->3D備注：通過(guò)FLIT獲得的熒光信號(hào)源的光強(qiáng)度值以TotalFluorescentYieldpmol/Mcm表示，信號(hào)源可以使IVISSpectrum系統(tǒng)有一個(gè)內(nèi)置激光振鏡，用于在成像平臺(tái)的OrientationSubject下點(diǎn)擊GenerateSurface后，拓?fù)浞治龉ぞ呖虿ㄩL(zhǎng)超過(guò)600nm的光吸收現(xiàn)象會(huì)顯著下降，所以如果我們使實(shí)驗(yàn)對(duì)象表面發(fā)射的光通過(guò)560到640nm素酶。當(dāng)然，LivingImage軟件同樣支持其它生物發(fā)光光源的3D重建。的時(shí)間或更大的binning值才能使每片獲的獲取。在這種情況下，您可以將減少為3張-580nm，600nm620nm，此三張?jiān)诜治鲞^(guò)程那么其信號(hào)強(qiáng)度足以完成生物發(fā)光3D分析。

表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)說(shuō)明:使用鼠會(huì)得到更好的表?yè)渲亟?，DLIT分析不能進(jìn)行。因此，有必要DLIT成像。因?yàn)槠つw中的黑色素會(huì)影響重建算法中對(duì)被測(cè)對(duì)象和成像臺(tái)的區(qū)設(shè)置提示:在視野DC進(jìn)行DLIT可得到更的序列圖。LivingImage4軟件版本包括自動(dòng)在在IVIS系統(tǒng)控制面板中點(diǎn)擊Sequence~62m擇適合于報(bào)告熒光的濾光片。覆蓋范圍為確定選中Photograph，對(duì)Luminescent參560nm，并勾選Structure獲取體表結(jié)構(gòu)。p果使用自動(dòng)，需要對(duì)參數(shù)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)射濾光片-此處選用580nm為例。確保每片中有600-60,000counts。點(diǎn)開(kāi)備注:DLIT獲取的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的光強(qiáng)物發(fā)光斷層掃描技術(shù)說(shuō)明中的以下操作：SetupandAcquisition和Topography。ToolPalette里面打開(kāi)DLIT3DReconstruction標(biāo) 備注：LivingImage軟件會(huì)自動(dòng)去除過(guò)飽和備注：如果是通過(guò)ImagingWizard獲取的，在DataPreview下，可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)口底部的SelectAll和DataAdjustment，將閾值稍微調(diào)低，以便將的信號(hào)包含到如果需要對(duì)單像進(jìn)行閾值調(diào)節(jié)，可以雙擊打開(kāi)該。在這個(gè)窗口中也有Masking排除其坾區(qū)域。信息請(qǐng)參照UserGuide當(dāng)選好序列，并且DataAdjustment（如果需計(jì)算的數(shù)值信息?？梢源蜷_(kāi)PhotonDensity如果底部一行顯示出Measured和Simulated

每像Measured和Simulated漫射形式之間的偏差%。綠色表示―Go。一旦重建結(jié)果被保存以后，在ToolPalette中的3DOpticalTool中，SubjectSurface更換不同的顏色、不或幾何形式。有兩種可視化的選擇：DisySourceSurface和DisyVoxel。選擇DisySourceSurface將會(huì)顯示出重建信號(hào)源體積的等值面。用表3D散射的類(lèi)型，可以使用VoxelSelectionTool選擇體素，信號(hào)源的測(cè)量值將會(huì)被記錄下來(lái)（參見(jiàn)步驟12-14。lrare節(jié)信號(hào)源的大小，因?yàn)樵诙枯敵龅臅r(shí)候，使腫?盁樨會(huì)去掉一些在3DOpticalTools中的Registration表中，可以對(duì)表面/信號(hào)源重建和通用MouseOrganAtlas進(jìn)行疊加。 和on-linearAutomatic中選擇擊名邊上的checking/unchecking框，將顯示或移除。的顏色不能改變，但是的可以通過(guò)Opacity滑動(dòng)條工具進(jìn)會(huì)出現(xiàn)在Source中的MeasuredSources信號(hào)源的深度可以使用VoxelSelectionTool左側(cè)的MeasurementCursor來(lái)確定。點(diǎn)擊Source右下角的CenterofMass，選擇信號(hào)源。軟件將展示出Coronal（冠狀面）、Sagittal（矢量面）和Transaxial（橫斷面）使用SlicenesTools可以滾動(dòng)選擇動(dòng)物的3D信號(hào)源可以制作成動(dòng)畫(huà)，功能可以在Tools->3DAnimations里找到。 ficationTechnical。即可推斷出DLIT光信號(hào)代表的細(xì)胞數(shù)目或FLIT光信號(hào)代表的分子濃度或細(xì)胞數(shù)量。數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)自于已知濃度檢測(cè)對(duì)象的成像數(shù)據(jù)，包括生物發(fā)光或熒光細(xì)胞，分子和熒光標(biāo)記的化合物等。圖 擇Wellte

AF750752nm，發(fā)射峰779nm。我們選擇的激發(fā)濾光片745nm。圖2.Welltefication選項(xiàng)位Tools 定位好ROI并在窗口中相應(yīng)表格里輸入細(xì)胞Set作Set作為背景孔。最后，選擇fy計(jì)算光子/秒/細(xì)胞。

3.輸入生物發(fā)光細(xì)胞數(shù)目定量和對(duì)

ROIROI并在下窗口外Set鍵，作為樣品孔。然后選擇孔板作為背景對(duì)照并按下窗口外的Set作為背景孔。選ApplytoSequence，使序列中所有濾光片加入計(jì)算。最后，選擇fy計(jì)算每組濾光片成像ficationPlots表中會(huì)顯示ROIs計(jì)算數(shù)

結(jié)果表中會(huì)列出每片分析值。命名序列圖或使用序列圖默Save

用Well teficationWindow加載數(shù)據(jù)，并在新的DLITFLITpmol數(shù)時(shí)，選擇ToolPalette中的DLIT3DReconstruction，選擇Properties鍵下的Luminescent或Fluorescent9.3D定量輸出為細(xì)胞或pmol

備注：有關(guān)DLIT和FLITpmol數(shù)。 DLITFLIT3D圖像加入，如生物發(fā)光（DLIT）或ColorTablesScale的最小值。3DView中，可使用體素選PerkinElmerIVIS自動(dòng)注射系統(tǒng)的操作說(shuō)明或哈佛儀器公司的PHD22/2000注射泵系列用戶手冊(cè)。上述文件在LivingImage安裝軟件的CDROM中均可以找到。IVIS自動(dòng)注射系統(tǒng)可以在動(dòng)態(tài)或靜態(tài)圖像獲取時(shí)使用，但動(dòng)物必須保持不動(dòng)狀圖1輸液泵控制界面2圖3如需自動(dòng)停止注射，選擇AutoStopAfterAcquisition。如需手動(dòng)停止注射，可隨時(shí)點(diǎn)擊StopNow。備注：輸液泵控制面板中的信息可以在clickinfofile中進(jìn)行保存。在數(shù)據(jù)獲取過(guò)程中，如果在開(kāi)始注射通 um-Time圖中。 um-Time圖會(huì)在圖像數(shù)據(jù)獲取結(jié)束的時(shí)刻停止記錄（即使輸液泵還沒(méi)有停 PartIII.常用的注射方式包括腹膜內(nèi)注射，皮射和靜脈注射，目前，前兩種方式應(yīng)用較廣泛。將一定量的底組織內(nèi)而不在腹腔內(nèi)，這種情況尤其在患有嚴(yán)重疾病以及瘦弱的小鼠身上發(fā)生。這常常會(huì)導(dǎo)致得到注射底物的挽回方法是等待2-3小時(shí)候熒光素被完全代謝后再次注射。正是由于此原因，許多人采用后頸部皮射，掌握正確的注射方法后能夠顯著降低注射失敗率。有關(guān)皮射與腹膜內(nèi)注射Inoueet.al.,2009,Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging36:771–779.尾靜脈注射底物，al.2003BioTechniques34:1184-1188很好的比較了原位側(cè)位腫瘤與腦腫瘤。結(jié)果顯示，一旦底物到達(dá)靶組織，熒光素酶的量會(huì)影響到檢測(cè)限并可以使底物濃度曲線改變。對(duì)于每個(gè)新得到的細(xì)胞系，通采用如下操作得到所需代謝曲線：注意—代謝曲線的建立不需要大量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通常3-5只即可滿足。選擇設(shè)置合適的靈敏度。Autoexposure能夠給出合適的時(shí)間防止過(guò)度，同時(shí)建議使用默認(rèn)設(shè)置Mediumbinning和F/Stop1為最初的圖像獲取參數(shù)。在圖像獲取過(guò)程中時(shí)間會(huì)根據(jù)所需的count值進(jìn)行調(diào)節(jié)。SequenceEditorAdd鍵，設(shè)置好參數(shù)的圖像會(huì)被添加SequenceEditorNumberofSegments的勾選框，輸入間鐘，相當(dāng)于總獲取數(shù)據(jù)時(shí)間為60分鐘。當(dāng)點(diǎn)擊AcquireSequence后開(kāi)始獲取第一片。時(shí)，可能需要超過(guò)1min的時(shí)間才能夠得到我們需要的count值。那么我們建議將時(shí)間設(shè)置縮短5s，這5s留給圖像和電機(jī)發(fā)動(dòng)。設(shè)置方法為子中，我們的最大時(shí)間設(shè)置為175秒。的底物溶液100μL。Burgosetal2003BioTechniques34:1184-118中一個(gè)比較好的例子。典型的底物代謝曲線首先會(huì)10-20分鐘。為了得到最優(yōu)的定量結(jié)果通常會(huì)選用曲線的平臺(tái)期進(jìn)行圖像 PerkinElmer可以領(lǐng)先熒光素是在各種不同的可生物發(fā)光微生物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種化學(xué)物質(zhì)。當(dāng)熒光素在熒光素酶和TP的催化氧化作用下可以產(chǎn)生藍(lán)綠色的熒光。由于該反應(yīng)需要TP的存在，這可以讓研究者確定是否有能量或生命的存在。由光可以被光度計(jì)或閃爍計(jì)數(shù)器檢熒光素也可以應(yīng)用于PerkinElmer胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)熒光

成的低分子量有機(jī)化合物。熒光素被發(fā)現(xiàn)于螢火蟲(chóng)和其它熒光生TP小鼠經(jīng)過(guò)lux細(xì)菌熒光素酶轉(zhuǎn)染后不需要底物熒細(xì)菌中，整個(gè)底物子穩(wěn)定存在于上。PerkinElmer的生物發(fā)光細(xì)菌模型不需要注注射PerkinElmer的底物。Visualizinggeneexpressioninlivingm usingabioluminescentreporter.ContagC.H.,SpilmanS.D.,ContagP.R.,OshiroM.,EamesB.,DenneryP.,StevensonD.K.andBenaronD.A.DepartmentofPediatrics,StanfordUniversitySchoolofMedicine,CA94305,USA.PhotochemistryandPhotobiology,October1997,Vol.66,pp.523-531.Evolutionofbeetlebioluminescence:theoriginofbeetleluciferin.DayJ.C.,TisiL.C.andBaileyM.J.CentreforEcologyandHydrology(CEH)-Oxford,MansfieldRoad,OxfordOX13SR,Luminescence,January-February2004,Vol.19,Oxyluciferin,aluminescenceproductoffireflyluciferase,isenzymaticallyregeneratedintoluciferin.GomiK.andKajiyamaN.ResearchandDevelopmentDivision,KikkomanCorporation,Noda-shi,Chiba278-0037,Japan.JBiolChem,September282001,Vol.276,

Bioluminescenceimagingoflymphocytetraffickinginvivo.HardyJ.,EdingerM.,BaannM.H.,NegrinR.S.,FathmanC.G.andContagC.H.DepartmentofPediatrics,StanfordUniversitySchoolofMedicine,Stanford,CA,USA.ExpHematol,December2001,Vol.29,pp.CelluptakeandtissuedistributionofradioiodinelabelledD-luciferin:implicationsforluciferasebasedgeneimaging.LeeK.H.,ByunS.S.,PaikJ.Y.,LeeS.Y.,SongS.H.,ChoeY.S.andKimB.T.DepartmentofNuclearMedicine,SamsungMedicalCenter,SungkyunkwanUniversitySchoolofMedicine,Seoul,Korea.NuclMedCommun.,September2003,Vol.24,pp.1003-1009.Inuterodeliveryofadeno-associatedviralvectors:intraperitonealgenetransferproduceslong-termexpression.LipshutzG.S.,GruberC.A.,CaoY.,HardyJ.,ContagC.H.andGaenslerK.M.DepartmentofSurgery,UniversityofCalifornia,SanFrancisco,SanFrancisco,CA94143,USA.MolecularTherapy,March2001,Vol.3,pp.Rapidandtativeassessmentofcancertreatmentresponseusinginvivobioluminescenceimaging.RehemtullaA.,StegmanL.D.,CardozoS.J.,GuptaS.,HallD.E.,ContagC.H.andRossB.D.TheCenterforMolecularImagingandtheDepartmentofRadiationOncology,UniversityofMichiganMedicalSchool,AnnArbor,MI48109,USA.Neosia,November-December2000,Vol.2,pp.491-495Visualizingthekineticsoftumor-cellclearancelivinganimals.SweeneyT.J.,MailanderV.,TuckerA.A.,OlomuA.B.,ZhangW.,CaoY.,NegrinR.S.andContagC.H.DepartmentofMedicine,StanfordUniversitySchoolofMedicine,Stanford,CA94305, atlAcadSciUSA,October1999,Vol.96,體 體材 材#xr-1001)D-100mM30mg/ml將D-Lucirerin溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中成濃度為150μg/ml的工作配置工作液(終濃度150μg/mL)。

—D-熒光素，鉀鹽，1.0克/瓶(Xenogen xr-1001)(15mg/mL)，0.2um濾膜過(guò)濾除菌。10uL/g150mg/kg熒光μl工作液，被給予1.5mg熒光素。）*需要對(duì)每個(gè)動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力注意：小鼠可以耐受1ml無(wú)刺激的腹腔注射劑向下移動(dòng)在下腹四分之一部位形成一個(gè)空腔。注射點(diǎn)用75%的乙醇。D-熒光素底物，并在對(duì)側(cè)一個(gè)位點(diǎn)再注入另一半。然而，如果注射位點(diǎn)比較合成1%戊巴比妥鈉溶液。麻醉劑量為0.08-0.1ml戊巴比妥鈉溶液/10g小鼠體重。%,備注T150細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入5ml）。公司，產(chǎn)品貨號(hào)#E1741）和pCI-neo哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，可以對(duì)腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用不含、蛋白或抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)4.5μg(4.5μl)的pGL3熒光素酶報(bào)告載體和0.5μg(0.5μl)的pCI-neo哺乳動(dòng)物表達(dá)載體進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尯蟮目傮w積為150μl；混合后離心數(shù)秒將向上述DNA溶液中加入20μl的Superfect轉(zhuǎn)染試劑，通過(guò)移液器吸吹5次或振蕩器振蕩10秒進(jìn)行混向轉(zhuǎn)染混合物中加入1ml含和抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液器吸吹2次進(jìn)行混合，之后立即將上述混合液加入60mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中。建議做一系列表型測(cè)試，以驗(yàn)證這些細(xì)胞的確被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并且它們?cè)谛袨楸硇蜕先越咏溆H本細(xì)胞系（有時(shí)使用熒光素酶轉(zhuǎn)染后的腫瘤細(xì)胞會(huì)變得更具性）。例如：通過(guò)皮下快速融化200X的熒光素母液，使用完全細(xì)胞培養(yǎng)基按照1:100的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)ㄅ涑?X熒光素細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至100,000細(xì)胞/ml（10,000細(xì)胞/100μl）使用多通道移液器從#1孔吸100μl細(xì)胞液至孔#2中并混合均勻，按上述1:2比例的稀釋方法從#2孔吸100μl細(xì)胞液至#3孔中；同樣方法進(jìn)行梯度稀釋至#10#10孔稀釋并且混合后吸棄100μl使用無(wú)的細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行，去除可能抑制胰蛋白酶消化作用的殘余蛋白（T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加7ml，T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加10ml，T-162/T-225細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加15ml）。之后使用無(wú)菌移液管吸棄培養(yǎng)基（或PBS）。向含貼壁細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶*，1mMEDTA胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，打開(kāi)培養(yǎng)瓶，加入適當(dāng)體積的完全細(xì)胞培養(yǎng)基（T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加5ml，T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加10ml，T-162/T-225細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加20ml）。使用移液器反復(fù)吹打細(xì)胞懸液（移液器用―快速‖檔）以打散細(xì)胞聚團(tuán)（推薦使用10ml的移液管；避免移液繼續(xù)每隔2分鐘拍一片（創(chuàng)建一個(gè)成像序列），一直拍攝約60分鐘，從而得到一條針對(duì)該實(shí)螢火蟲(chóng)熒光素酶底物D-Luciferin，鉀鹽，1.0g/管PerkinElmer122796)DPBS,不含Mg2+和Ca2+針頭式過(guò)濾器0.2熒光素溶液注射劑量為10μl/g動(dòng)物體重，對(duì)應(yīng)著每千克小鼠體重注射150mg的熒光素（例如：對(duì)于10g體重的小鼠，注射100μl熒光素溶液，對(duì)應(yīng)于1.5mg的熒光素）。注射劑量：150毫克熒光素/千克動(dòng)物體重,通常注射150μl(溶液濃度15注射劑量依舊是150mg/kg，靜脈注射時(shí)，注射溶液的體積過(guò)動(dòng)物血容量的10%（如小鼠不超過(guò)200μl）。建議：配制熒光素溶液濃度為15mg/ml，注射劑量為150mg/kg（對(duì)應(yīng)于10ml/kg）。靜脈注射時(shí)一般使用1ml量程、26號(hào)針頭的注射器。使用10mlDPBS細(xì)胞兩次（注意貼著管壁緩緩加入DPBS，輕彈管壁讓細(xì)胞均勻混合；記住先加入2mlDPBS并混合細(xì)胞，之后再加入8mlDPBS）。3x106細(xì)胞/100μl;2x106細(xì)胞/100μl。細(xì)胞重懸后離心管置于冰上以待來(lái)，使用DPBS進(jìn)行細(xì)胞重懸，重懸后的細(xì)胞濃度為1x105-1x106細(xì)胞/50-100μl。/使用鑷子輕輕捏起小鼠皮膚，皮下插入針頭（25x5/8‖號(hào)針頭）。松開(kāi)鑷子，輕輕地注入細(xì)胞，圖像獲取時(shí)，建議使用counts單位，這樣可以調(diào)節(jié)相機(jī)設(shè)置以優(yōu)化信號(hào)。信號(hào)強(qiáng)度應(yīng)高于背景噪聲>100counts）且低于飽和值（65535counts）。在使用ROI進(jìn)行信號(hào)定量和不同圖像間信號(hào)比較時(shí)，建議使用―photons‖單位。在該單位模式下，定量和圖像展示時(shí)都會(huì)自動(dòng)考慮不同時(shí)間，binning值，光圈大小和成像視野因素的影響。5-7周的小鼠購(gòu)自CharlesRiver公司 A.來(lái)，使用DPBS進(jìn)行細(xì)胞重懸，重懸后的細(xì)胞濃度為1-5x105細(xì)胞/100μl。第0天，使用25x5/8‖號(hào)針頭向雄性C57BL/6白化小鼠（JacksonLaboratory公司）腹腔注射螢火蟲(chóng)熒光素（150mg/kg）。小鼠通體麻醉（3%異氟烷）或使用25x5/8‖號(hào)針頭肌肉注射（120mg/kg）/甲苯噻圖像獲取時(shí)，建議使用count‖單位，這樣可以調(diào)節(jié)相機(jī)設(shè)置以優(yōu)化信號(hào)。信號(hào)強(qiáng)度應(yīng)高于背景噪聲>100counts）且低于飽和值（65535counts）。在使用ROI進(jìn)行信號(hào)定量和不同圖像間信號(hào)比較時(shí)，建議使用―photon‖單位。在該單位模式下，定量和展示時(shí)都會(huì)自動(dòng)考慮不同時(shí)間，binning值，光圈大小和成像視野因素的影響。 (VetEquip公司,向蒸發(fā)器中灌注異氟烷，灌注時(shí)蒸發(fā)器的旋鈕應(yīng)處于―O‖調(diào)節(jié)氧氣流量為1升/鹽酸(Ketaset)(FortDodgeAnimalHealth公司將(100mg/ml)和甲苯噻嗪(20mg/ml)按4:1比例配成混合制劑肌肉注射劑量為(120mg/kg)和甲苯噻嗪(6mg/kg)每20g小鼠體重注射0.03ml（每10g小鼠體重注射15μl）使用IVISLuminaIVISSpectrumIVIS100200系列獲取圖像：確認(rèn)激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片分別被設(shè)置為B‖和Oen備注：在成像前可以先拍一張明場(chǎng)（去掉―unecn或―luoen的勾選框，―Photogaphc‖和―Auto‖勾選框內(nèi)打勾，點(diǎn)擊―cquie‖進(jìn)行拍照），用于觀察動(dòng)物在成像倉(cāng)內(nèi)的狀態(tài)。點(diǎn)擊cquie―Acquie‖按鈕變成―SopStop‖按鈕。濾光片鎖定（FilterLock）模式下，從激發(fā)濾光片下拉條中選擇激發(fā)濾光片，軟件會(huì)自動(dòng)選擇適備注：在成像前可以先拍一張明場(chǎng)（去掉―unecn或―luoen的勾選框，―Photogaphc‖和―Auto‖勾選框內(nèi)打勾，點(diǎn)擊―cquie‖進(jìn)行拍照），用于觀察動(dòng)物在成像倉(cāng)內(nèi)的狀態(tài)。點(diǎn)擊cquie―Acquie‖按鈕變成―SopStop‖按鈕。在ROI中，從拉條中選擇eauee ROI‖ (同時(shí)進(jìn)行反射成像，可以看出使用PerkinElmer小鼠剃毛器處理后能顯著降低背景熒光。XGI－8的氧氣，可以看到閥門(mén)處于打開(kāi)位置，流量計(jì)指示氧氣已隨時(shí)觀察ISOFLURANE的水平線，注意不要超過(guò)最大允許線。ISOFLURANE達(dá)到玻璃指示窗上的最大標(biāo)線時(shí)，表明蒸發(fā)器已灌注滿。此時(shí)應(yīng)停止，不要過(guò)分感應(yīng)箱1.5公升每分鐘，進(jìn)行小鼠預(yù)麻醉。IVIS分支管流量計(jì)和感應(yīng)箱流量計(jì)的指示球下降到指示管的底部說(shuō)明XGI－8減壓完畢。RC2+力應(yīng)顯示為“6PSI+/-0.5PSI一只為Rhodamine皮射用小鼠，剩下一只小鼠備用，實(shí)驗(yàn)前一天完成小鼠剃毛，小鼠禁食限責(zé)任公司，白色粉末，產(chǎn)品純度>99%(高純級(jí))，分子量248.26雙蒸水（Doubledistilled7515ml50ml1.5mlEppendorfIVISSpectrumIVISLuminaRhodamine0.04gRhodamine50ml40solution包好并標(biāo)記上濃度和配制日期等信息，置于4℃冰箱中；使用1.5mlEppendorf小0.033μg/mlworkingsolutionworkingsolution1%戊巴比妥鈉溶液，但劑量一般不超過(guò)0.1ml。0.033μ/ml的RhodaminewrkingsoluioVISLumnaIII0.05μg/ml和0.04μg/ml的RhodamineworingslutioRhodamieorkingsoution1ml02ml的空氣以待用，注射器的針管上用記號(hào)筆寫(xiě)好濃度信息以免；對(duì)于小鼠實(shí)驗(yàn)操作新手，注射時(shí)建議左手持鑷子，輕輕鑷起小鼠注射處的表皮，右手持針，針頭斜面朝上，順著鑷子表皮提2~3mm0.1抽針時(shí)一定要慢；抽針時(shí)如果有少量滲出，可用干紗布或棉球輕輕吸去，避免用力檫拭或按壓射倘誤小沾多建只。成像：將IVISSpectrum/IVISLuminaIII開(kāi)機(jī)后，進(jìn)行初始化；取黑色底不透96孔板，向其中一孔中加入350μl的0.05μg/mlRhodamineworkingsolution；將麻醉后的空白對(duì)照小鼠置于成像倉(cāng)（ImageChamber）內(nèi)左側(cè)，皮射的小鼠置于中間，黑色底不透96孔板置于右側(cè)；對(duì)于IVISSpectrum，使用FOVC，對(duì)于IVISLuminaIII，使用FOVD，調(diào)整成像倉(cāng)中小鼠和板的選擇Fluorescence下面的SpectralUnmixing選項(xiàng)，對(duì)于LivingImage4.4軟件版本，直接選擇database中的Rhodamine即可，對(duì)于LivingImage4.3軟件版本，其database里無(wú)Rhodamine，可以選擇與其接近的tdTomato，調(diào)整filterspair，激發(fā)濾光片用 Labels里面對(duì)實(shí)驗(yàn)信息進(jìn)行記錄，之后對(duì)成像數(shù)據(jù)進(jìn)行保存，必要時(shí)可用格式化后的光盤(pán)將數(shù)據(jù)拷FLBackgroundSubtraction”，在“PhotoMaskSetup”中調(diào)整Threshold使小鼠體外的紫域的Rhodamine皮射區(qū)域信號(hào)肉眼可能可見(jiàn)但較模糊，建議在左側(cè)對(duì)照小鼠的耳部或口鼻處劃TissueAF，在中間小鼠的0.05μg/mlRhodamine皮射區(qū)或右側(cè)0.05μg/mlRhodamine的板中標(biāo)樣孔區(qū)域內(nèi)劃取Rhodamine信號(hào)（一般選擇中間小鼠的0.05μg/mlRhodamine皮射區(qū)進(jìn)行光譜分離效果更好，雜信號(hào)較少），劃線時(shí)建議選用“Pick”中的“Thin”，點(diǎn)擊“ComputerthepurespectrumRhodaminePurespectrumUnmix”；調(diào)整“ColorScale”使用“ContourROIAutoROIParametersThresholdROI區(qū)域進(jìn)行調(diào)節(jié)；在Units為“RadiantEfficiency”的情形下，點(diǎn)擊“MeasureROIs”，即可看見(jiàn)全部已圈選ROIs的定量結(jié)果。正常情況下，IVISSpectrumIVISLuminaIII0.05μg/mlRhodamine若實(shí)驗(yàn)時(shí)由于不確定原因（如皮射操作不熟練，入針太深），導(dǎo)致0.05μg/ml的Rhodamine信號(hào)非常微弱，可以考慮使用備用小鼠，皮射0.1μg/ml的Rhodamineworkingsolution進(jìn)對(duì)于有毛小鼠（如ICR鼠、鼠、C57鼠等），我們強(qiáng)烈建議在成像實(shí)驗(yàn)的前一天進(jìn)行脫毛，ICR（白毛）465nm圖右是胃腸中食物熒光信號(hào)的3D透射成像圖。 當(dāng)濃度的/標(biāo)準(zhǔn)樣品（信號(hào)強(qiáng)度與目標(biāo)信號(hào)強(qiáng)度同一級(jí)別，不能過(guò)高以免干擾目標(biāo)信號(hào)），如下圖。96PartIV.在腫瘤細(xì)胞皮射的當(dāng)天即可靈敏的觀測(cè)到由5個(gè)被標(biāo)記腫瘤細(xì)胞發(fā)出的光信號(hào)。定量分析顯示，利用傳統(tǒng)卡尺皮射7天即可觀測(cè)到腫瘤的生長(zhǎng)，并對(duì)隨后的發(fā)展變化進(jìn)行長(zhǎng)期觀測(cè)。瘤的生長(zhǎng)情況，在注射后27天觀測(cè)到其他部位的轉(zhuǎn)移信號(hào)。B.體外組織成像進(jìn)一步驗(yàn)證轉(zhuǎn)移的發(fā)生。IVIS3D光學(xué)成像（橙色），QuantumFXuCT3D解剖學(xué)成像（骨架），并將3D光學(xué)功能性結(jié)果與3D解剖學(xué)結(jié)果進(jìn)行影像融合，而確定腫瘤的骨轉(zhuǎn)移。重要的作用。全球各大制藥企業(yè)均已采用光學(xué)成像技術(shù)開(kāi)展抗腫瘤新藥的研發(fā)，其中已有6種藥物獲得FDA認(rèn)證，另有8種藥物處于臨床測(cè)試階段。Docetax（應(yīng)用IVIS成像系統(tǒng)長(zhǎng)期觀測(cè)3種藥物對(duì)腎包膜移植瘤肺部轉(zhuǎn)移的抑制效果，并進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示30mg/kgDocetaxel（TXT）對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制效果最好。Sutent的部分研究結(jié)果，研究人員首先利用卡尺測(cè)量腫瘤體積的方映藥物治療效果。憑借光學(xué)成像的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，SutentFDA除了應(yīng)用生物發(fā)光技術(shù)研究藥物對(duì)于腫瘤的治療效果之外，熒光成像技術(shù)同樣可以應(yīng)用于此類(lèi)研究，主要方式為通過(guò)外源注射功能性熒光試劑觀測(cè)藥物對(duì)于腫瘤某一方面的治療情況，如利用反映血管生成的熒光試劑觀測(cè)藥物對(duì)于腫瘤血管新生的抑制情況，又如利用反映細(xì)胞凋亡的熒光試劑觀測(cè)由于藥物治療而誘發(fā)的腫瘤細(xì)胞凋亡情況。FMTAngioSense750CT322藥物在抑制腫瘤血管新生方面的作用效果，結(jié)果表明CT322可以通過(guò)抑制腫瘤血管新生進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)。對(duì)HER2陽(yáng)性的人癌SKOV3具有良好靶向性。排斥、藥物毒性問(wèn)題等。因此，構(gòu)建新型藥物載體也是目前藥物研究的熱點(diǎn)之一，應(yīng)用小動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)同樣可以在這一領(lǐng)域發(fā)揮作用。如下圖所示為研究人員通過(guò)小動(dòng)物光學(xué)成像技術(shù)觀測(cè)一種放組分、熒光結(jié)合位點(diǎn)等。結(jié)果表明，通過(guò)應(yīng)用新型納米給藥載體可以有效提升藥物的靶向治療效少。PerkinElmer的FMT小動(dòng)物熒光斷層成像系統(tǒng)可以很好的滿足此類(lèi)應(yīng)用需求。應(yīng)用FMT成像系不同時(shí)間點(diǎn)不同BSA分布的定量結(jié)果。應(yīng)用熒光成像技術(shù)進(jìn)行藥物分布的觀測(cè)目前主要局限于對(duì)生物大分子藥物的研究，而對(duì)天然或分子量的熒光標(biāo)記小分子藥物，則熒光本身即會(huì)對(duì)小分子藥物在體內(nèi)的分布代謝產(chǎn)生影響，因像系統(tǒng)可以觀測(cè)到放射性核素在小鼠體內(nèi)發(fā)出的光學(xué)信號(hào)，其所依據(jù)的是切輻射（CherenkovRadiation）原理，由此拓展了光學(xué)成像技術(shù)的應(yīng)用范疇，即利用光學(xué)成像系統(tǒng)觀測(cè)經(jīng)放射性核系統(tǒng)進(jìn)行切輻射成像，觀測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)[18F]FDG在腫瘤部位的代謝；C.應(yīng)用PET系統(tǒng)成像，觀測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)[18F]FDG在腫瘤部位的代謝，結(jié)果與B一致。p53是調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生命活動(dòng)的一種重要，控制著細(xì)胞周期的啟動(dòng)。p53也同時(shí)被認(rèn)為是一種重要的抑癌，在人類(lèi)50%以上的腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了p53的突變，這是腫瘤中最常見(jiàn)的遺傳學(xué)改變，說(shuō)明該的改變很可能是人類(lèi)腫瘤產(chǎn)生的主要發(fā)病因素。下圖所示是于2007年Nature雜(?tet-off‘)及四環(huán)素依賴性p53shRNA的逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體與熒光素酶質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染從小鼠胚胎提取強(qiáng)力霉素（doxycycline）p53p53的表達(dá)能夠子機(jī)理目前還不完全清楚。LSD1是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的組蛋白去甲基化酶，理論上對(duì)轉(zhuǎn)錄起廣泛調(diào)控LSD1只參與一些特異的細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控而且與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展高度移，從而揭示了LSD1這一表觀調(diào)控因子在抑制轉(zhuǎn)移中的重要作用，并為轉(zhuǎn)移的干預(yù)提供了新的分子靶點(diǎn)。上述結(jié)果于2009年Cell。細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移的影響。上圖左：應(yīng)用IVIS系統(tǒng)進(jìn)行生物發(fā)光成像結(jié)果；上圖右：光學(xué)定量結(jié)果。（CancerTumorStemell,CSCTSC對(duì)腫瘤細(xì)胞的外界理化因素不敏感，導(dǎo)致腫瘤往往在常規(guī)治療方法消滅大部分普通腫瘤細(xì)胞后一段時(shí)間復(fù)發(fā)。因此，如果能夠?qū)ふ业侥[瘤干細(xì)胞特異性治療靶標(biāo)，將為腫瘤治療開(kāi)辟新的路徑。OCT4是參與調(diào)控胚胎干細(xì)胞自我更新和維持其全能性的最重要的轉(zhuǎn)錄因子之，因此，OCT4可能是腫瘤干細(xì)胞的潛在靶點(diǎn)之一。下述實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用IVIS系統(tǒng)觀測(cè)OCT4在細(xì)胞成瘤中的作用。研究者將帶有OCT4的載體轉(zhuǎn)染經(jīng)熒光素酶標(biāo)記的鼠源細(xì)胞株4T1-luc，并分選出高表達(dá)及低表達(dá)OCT4的細(xì)胞株，分別原位接種于小鼠胸部乳腺脂肪墊，觀測(cè)結(jié)果顯示OCT4高表達(dá)細(xì)胞株具有更高的成瘤性。特異性表達(dá)、腫瘤周邊血管的新生、腫瘤組織局部缺氧等，通過(guò)觀測(cè)這些分子能夠判斷