優(yōu)質(zhì)課微生物的實驗室培養(yǎng)詳解演示文稿

優(yōu)質(zhì)課微生物的實驗室培養(yǎng)詳解演示文稿目前一頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點優(yōu)選優(yōu)質(zhì)課微生物的實驗室培養(yǎng)目前二頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點一.培養(yǎng)基微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、藍藻等酵母菌、霉菌、食用菌等真菌：原生生物：草履蟲、變形蟲等病毒是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱．關(guān)于微生物的類群目前三頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)基的概念人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)——培養(yǎng)基思考：微生物“吃”什么？目前四頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點一、培養(yǎng)基的成分：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)⑴碳源（提供碳元素的物質(zhì)）無機碳源：有機碳源CO2、碳酸鹽自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源（提供氮元素的物質(zhì)）無機氮源：有機氮源：：（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等）牛肉膏、蛋白胨等NH4＋、NO3-N2目前五頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點(3).不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)(5)另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣等的要求。

(4).不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽——基本成分目前六頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點（1）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類（2）按培養(yǎng)基的功能分：基礎(chǔ)（通用）培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（3）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基目前七頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點二、無菌技術(shù)1.概念無菌技術(shù)又稱無菌操作，泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。因此，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵目前八頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點消毒

使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。2.消毒與滅菌滅菌使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅(1)定義目前九頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：2.常用的消毒與滅菌的方法目前十頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：目前十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點二、無菌技術(shù)（1）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。（3）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。（4）實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括以下幾個方面目前十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點思考：1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？思考：2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手

無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。目前十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點練習(xí)細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌（）A.接種針、手、培養(yǎng)基B.高壓鍋、手、接種針C.培養(yǎng)基、手、接種針D.培養(yǎng)基、手、高壓鍋C目前十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點變形題培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是（）①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥B.①②③④⑤⑥C.⑥②③④①⑤D.③④②①⑥⑤A目前十五頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：（根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計算配制100ML的培養(yǎng)基時，各種的成分的用量）物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.稱量

三、實驗操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)分屬于哪種？原因？含有幾種基本營養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？準(zhǔn)確稱取各種成分，注意事項：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋。目前十六頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點

3.溶化：

4.滅菌：

5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時，在酒精火焰附近倒平板。注意：溶化后應(yīng)該調(diào)節(jié)PH（在滅菌前）目前十七頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點?思考3①溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

②加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑目前十八頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點思考4

①在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？?在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用目前十九頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點倒平板:目前二十頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點1).培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2).為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。目前二十一頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點3).平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4).在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。目前二十二頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點四、純化大腸桿菌

微生物接種方法常見的有平板劃線法和稀釋涂布平板法。（1）.平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體稱菌落。目前二十三頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點學(xué)科網(wǎng)目前二十四頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)_______在_______旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞將試管口通過火焰.將已______的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃__________條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。.將試管通過火焰，并塞上棉塞火焰冷卻三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的_______開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。末端燒紅將平板_____放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

倒置目前二十五頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點

思考：1、為什么在操作的第一步要灼燒接種環(huán)？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；思考：2、每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？

每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。思考：3、在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？

劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。目前二十六頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點思考：3、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種思考：4、在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。目前二十七頁\總數(shù)二十九頁\編于十六點平板劃線法的要點接種前，每次劃線前及接種后都要灼燒接種環(huán)