腫瘤生物治療進(jìn)展

一、腫瘤生物治療概念的演變手術(shù)治療、放射治療（放療）、化學(xué)治療（化療）是應(yīng)用機(jī)械、物理和化學(xué)的原理來(lái)治療腫瘤.

生物治療是應(yīng)用生物大分子（細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)和肽）或調(diào)節(jié)生物反應(yīng)的小分子化合物來(lái)治療腫瘤。目前一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴(kuò)散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導(dǎo)致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory目前二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Coley采取了大膽的行動(dòng)!注射活的鏈球菌治療沒(méi)有治愈希望的、不能手術(shù)的肉瘤患者腫瘤完全消退!目前三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對(duì)1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖目前四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)干擾素上市?？共《究鼓[瘤目前五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達(dá)調(diào)控失常，腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路與正常細(xì)胞的信號(hào)通路存在一定的差異。目前六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)

生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋白、細(xì)胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號(hào)通路為主要作用靶點(diǎn)，發(fā)展腫瘤選擇性強(qiáng)、毒副反應(yīng)低、高治療指數(shù)的治療技術(shù)和藥物。目前七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見(jiàn)的腫瘤，而且能延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期，改善預(yù)后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。目前八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)二、生物治療技術(shù)和藥物分類(lèi)目前已用于臨床的生物治療技術(shù)和藥物主要包括：

細(xì)胞因子單克隆抗體免疫效應(yīng)細(xì)胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點(diǎn)的非細(xì)胞毒性小分子藥物目前九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：結(jié)核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲(chóng)：絳蟲(chóng)瘧原蟲(chóng)蠕蟲(chóng)攻擊防御目前十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)免疫系統(tǒng)---人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來(lái)異物；消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會(huì)變成癌細(xì)胞)。對(duì)于健康的人來(lái)說(shuō)，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時(shí)清除突變的癌細(xì)胞。目前十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞相互作用的結(jié)果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期目前十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)對(duì)于癌癥病人來(lái)說(shuō)，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識(shí)別、殺滅癌癥細(xì)胞;另一方面，癌癥細(xì)胞的大量增殖會(huì)進(jìn)一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細(xì)胞有多種機(jī)制來(lái)逃脫免疫細(xì)胞的識(shí)別與殺傷。目前十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1.什么是免疫？我們生存在一個(gè)充滿(mǎn)復(fù)雜感染源的、敵對(duì)的世界里，我們的機(jī)體可以利用許多機(jī)制來(lái)防御外來(lái)微生物的侵襲，保護(hù)機(jī)體健康，這種防御能力被稱(chēng)為免疫。

目前十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)免疫的類(lèi)型天然免疫反應(yīng)：先天就具備的對(duì)某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機(jī)體抵御病原體侵襲的第一道防線(xiàn)；

獲得性免疫反應(yīng)：后天獲得、具有針對(duì)性、具有免疫記憶性。

目前十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)2.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官：骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等；免疫組織：消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無(wú)被膜的淋巴組織；免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞等免疫分子：補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子等目前十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)3.免疫系統(tǒng)分布目前十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)免疫系統(tǒng)功能目前十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)4.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞免疫分子目前十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)天然免疫系統(tǒng)：肥大細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、中性/嗜堿性粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞；特異性免疫細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞目前二十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。作為清道夫細(xì)胞清除機(jī)體死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片。巨噬細(xì)胞（M）目前二十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)在不同組織中其名稱(chēng)不同目前二十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)粒細(xì)胞:

中性粒細(xì)胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲(chóng)，與過(guò)敏反應(yīng)有關(guān)。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時(shí)釋放并殺滅病原體。目前二十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞DC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)目前二十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

目前二十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)淋巴細(xì)胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫目前二十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無(wú)特征HE染色電鏡觀察無(wú)功能活性---初始淋巴細(xì)胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。

目前二十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)B-細(xì)胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細(xì)胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細(xì)胞記憶性T細(xì)胞記憶性B細(xì)胞目前二十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞---CD8+T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞為其它細(xì)胞的活化和功能提供必須的信號(hào)---CD4+T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制其它淋巴細(xì)胞的活性并協(xié)助控制免疫應(yīng)答效應(yīng)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)殺傷目前二十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)自然殺傷細(xì)胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應(yīng)答之前對(duì)控制病毒感染非常重要；在外周血單個(gè)核細(xì)胞中占10%-15%，淋巴結(jié)和組織中較少。目前三十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。目前三十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員目前三十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？目前三十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)免疫系統(tǒng)識(shí)別“自我”與“非我”腫瘤細(xì)胞表達(dá)腫瘤抗原目前三十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細(xì)胞上表達(dá);腫瘤相關(guān)性抗原(TAA):在某些腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，也在某些正常細(xì)胞上表達(dá)。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中新出現(xiàn)或過(guò)度表達(dá)的抗原物質(zhì)。目前三十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為：①基因突變；②細(xì)胞癌變過(guò)程中使原本不表達(dá)的基因被激活；③抗原合成過(guò)程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時(shí)期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過(guò)度表達(dá)；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達(dá)。

目前三十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1．感應(yīng)階段：

1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)答的基本過(guò)程目前三十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)APC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+T目前三十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)抗原遞呈功能MHC限制性APCAPC目前三十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)B細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）輔助性T細(xì)胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應(yīng)細(xì)胞目前四十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;Th細(xì)胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)中起重要的作用。目前四十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細(xì)胞結(jié)合CTL細(xì)胞質(zhì)重排目前四十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細(xì)胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)，故稱(chēng)為體液免疫。目前四十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)抗體的抗腫瘤機(jī)制?目前四十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞目前四十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)跨膜孔道目前四十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)B.抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)目前四十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細(xì)胞結(jié)合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞抗體目前四十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)D.抗體的封閉作用細(xì)胞惡變后其表面可過(guò)表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。針對(duì)這些受體的抗體可通過(guò)封閉腫瘤細(xì)胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。目前四十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)E.抗體改變腫瘤細(xì)胞的粘附特性

抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。目前五十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)抗腫瘤抗體雖然能夠通過(guò)上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細(xì)胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用目前五十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)3.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細(xì)胞（NK）NK是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，對(duì)于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。目前五十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒:NK細(xì)胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。NK靶細(xì)胞目前五十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN-,TNF-/,GM-CSF,IL-12。干擾素(IFN-)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。目前五十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)C.抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)目前五十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)（2）巨噬細(xì)胞（M)活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過(guò)溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細(xì)胞；目前五十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)活化的M還可分泌TNF、NO等細(xì)胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細(xì)胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細(xì)胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴(lài)氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補(bǔ)體成分纖維蛋白結(jié)合蛋白凝血因子其它因子目前五十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)M還可通過(guò)ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞目前五十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋巴細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞（M）抗原肽T淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體MHC-抗原肽復(fù)合物目前五十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)五、過(guò)繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過(guò)繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉(zhuǎn)輸體外培養(yǎng)、修飾的效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞，治療疾病。細(xì)胞治療可以被認(rèn)為是利用自體或異體細(xì)胞，替換、修復(fù)或增強(qiáng)受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。目前六十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)目前六十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)ACI治療腫瘤：具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，清除術(shù)后和化療后的殘留腫瘤細(xì)胞；

預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。目前六十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)I.非特異性免疫細(xì)胞NK細(xì)胞巨噬細(xì)胞DCsLAKsCIKsTLR激動(dòng)劑刺激免疫細(xì)胞II.抗原特異性T細(xì)胞CTLTILACI的類(lèi)型：目前六十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)I.非特異性免疫細(xì)胞目前六十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1.NK細(xì)胞用于過(guò)繼轉(zhuǎn)輸目前六十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞

目前六十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)腫瘤可以發(fā)展多種機(jī)制逃逸NK細(xì)胞的攻擊或者誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能缺陷

NK細(xì)胞在腫瘤患者中功能低下JBiomedicineandBiotechnology,2011免疫監(jiān)視功能缺陷免疫抑制目前六十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Systemadministration細(xì)胞因子自體NK細(xì)胞(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,typeIIFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)體內(nèi)活化NK細(xì)胞治療腫瘤的策略

抗體(anti-HER-2MAb;anti-CD20MAb;anti-EGFRMab)InfusionADCC目前六十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):486In1980目前六十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)目前七十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Rituximab:anti-CD20;Trastuzumab:anti-HER2;Daclizumab:anti-IL-2Ra目前七十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Exvivo自體NK細(xì)胞單倍體相合的NK細(xì)胞細(xì)胞因子(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,type-1IFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)通過(guò)細(xì)胞因子刺激,腫瘤患者的本身的NK細(xì)胞難于有效回復(fù)抗腫瘤功能

自身免疫細(xì)胞在體外活化目前七十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用(1)原代NK細(xì)胞通過(guò)免疫磁珠的方法純健康供體NK細(xì)胞,這些NK細(xì)胞具有正常的細(xì)胞表面標(biāo)志、胞內(nèi)細(xì)胞因子、穿孔素和顆粒酶B。目前七十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)供者患者目前七十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)過(guò)繼轉(zhuǎn)輸原代NK細(xì)胞原代NK細(xì)胞在體外擴(kuò)增和活化13-21天,大大提高轉(zhuǎn)移的腎細(xì)胞癌患者的臨床反應(yīng)。目前七十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK細(xì)胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；產(chǎn)生高純度的、大量的自體或異基因活化NK細(xì)胞非常難，并費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；每個(gè)患者或者供者的NK的差異性對(duì)臨床常規(guī)治療帶來(lái)困難。

障礙/困難目前七十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)YT,

NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG(2)NK細(xì)胞系JapanEBV-positiveWesterncountriesChina目前七十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK-92cellsNK-92cell:CD56brightCD16-高效廣譜抗腫瘤作用，表達(dá)大量活化型受體；高水平表達(dá)與細(xì)胞凋亡途徑有關(guān)的分子及細(xì)胞毒效應(yīng)分子；對(duì)惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、白血病淋巴瘤等都具有高效的殺傷活性。目前七十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)NK-92細(xì)胞容易大量擴(kuò)增，適合標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗(yàn)，是目前最強(qiáng)的、適于臨床應(yīng)用的NK細(xì)胞系。目前七十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系目前八十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)2.淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK）1980年,Rosenberg及其同事建立了一種IL-2刺激產(chǎn)生大量的淋巴細(xì)胞的新方法,這些淋巴細(xì)胞可以殺傷新鮮的、沒(méi)有培養(yǎng)的、原代轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。LAK細(xì)胞是細(xì)胞毒性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細(xì)胞和NK抵抗的腫瘤細(xì)胞系,在功能上與NK細(xì)胞不同。目前八十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)LAK細(xì)胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時(shí)間重復(fù)輸注，以保持一定數(shù)量的新鮮的LAK細(xì)胞。1984年,Rosenberg及其同事被FDA批準(zhǔn)，IL-2和LAK用于治療25例腫瘤患者，包括腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、肺癌或結(jié)腸癌。目前八十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)LAK細(xì)胞的制備：腫瘤患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）在體外擴(kuò)增，IL-2刺激，培養(yǎng)約5天。培養(yǎng)后的LAK是異質(zhì)性的，含有CD3-CD56+,CD3+CD56+和CD3+CD56-細(xì)胞；其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用。目前八十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)臨床研究證明,LAK細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤如腎細(xì)胞癌和黑色素瘤有一定療效。目前八十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)LAK/IL-2的主要限制是其毒性：

全身應(yīng)用IL-2通常是造成副作用的主要原因，包括煩躁,發(fā)熱,寒冷,頭痛,惡心,嘔吐,皮疹,水腫，25%患者可以發(fā)生副反應(yīng)。男性呼吸道窘迫綜合征、肝臟毒性和脈管炎有報(bào)道。目前八十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)3.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）CIK是通過(guò)培養(yǎng)外周血淋巴細(xì)胞(PBL)，培養(yǎng)第一天在培養(yǎng)基中加入IFN-1000u/ml,24小時(shí)后加入抗CD3抗體50ng/ml和IL-2300IU/ml。定期加入IL-2,培養(yǎng)基常規(guī)性換液，培養(yǎng)21–28天。目前八十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)患者淋巴細(xì)胞體外患者自體CIK目前八十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)CIK細(xì)胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD3+CD8+(64.2%);CD3?CD56+NK細(xì)胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時(shí)，37.7%為CD3+CD8+CD56+的

自然殺傷T(NKT)細(xì)胞，是CIK中最強(qiáng)的細(xì)胞毒性細(xì)胞。與LAK細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)；CIK細(xì)胞在識(shí)別和殺傷靶細(xì)胞時(shí)是非MHC限制性的。目前八十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)CIK的第一例臨床試驗(yàn)是在1999年，由Schmidt-Wolf等在德國(guó)進(jìn)行，自體CIK細(xì)胞轉(zhuǎn)入IL-2基因，轉(zhuǎn)述給10例腫瘤患者，包括轉(zhuǎn)移性腎癌、結(jié)腸癌和淋巴瘤。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。除了3例患者有發(fā)熱的癥狀外，沒(méi)有嚴(yán)重的副反應(yīng)。目前八十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)一項(xiàng)來(lái)自中國(guó)的報(bào)道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受1–4個(gè)療程自體CIK細(xì)胞輸注聯(lián)合化療的患者中,73.4%在隨后的4年中維持持續(xù)緩解,只作化療的患者僅為27.3%。作為免疫治療方式,CIK治療腫瘤量較小的患者有效或者作為輔助治療,不適合用于治療腫瘤量較大的患者。目前九十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)CIK的機(jī)制:釋放炎癥因子,如IFN,TNF,穿孔素,顆粒酶B殺傷腫瘤細(xì)胞;通過(guò)Fas-FasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CIK已經(jīng)成功用于臨床治療胃癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤、白血病等。

目前九十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)目前九十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)II.抗原特異性T細(xì)胞目前九十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)T細(xì)胞在抗腫瘤的免疫應(yīng)答中細(xì)胞免疫起著主要作用，特別是CTL，它是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，故也應(yīng)是用于過(guò)繼免疫治療的最佳細(xì)胞。目前九十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)T細(xì)胞活化抗原遞呈細(xì)胞腫瘤細(xì)胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達(dá)識(shí)別與殺傷腫瘤細(xì)胞抗原的識(shí)別與遞呈淋巴結(jié)CD8+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞血液循環(huán)腫瘤血管遷移目前九十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強(qiáng)于LAK和NK，且能特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞。目前九十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)實(shí)驗(yàn)顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)量，但到一定水平時(shí)候，體內(nèi)的CTL到達(dá)平穩(wěn)期而不再增加，這主要是由于體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTL的擴(kuò)增。所以，利用細(xì)胞因子或免疫刺激劑直接活化腫瘤患者體內(nèi)CTL受到限制。目前九十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞。目前九十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)轉(zhuǎn)輸抗原特異性T細(xì)胞因?yàn)槟[瘤相關(guān)抗原TAA是“自身”抗原，免疫系統(tǒng)難于識(shí)別；腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對(duì)腫瘤應(yīng)答的T細(xì)胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。目前九十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)4.腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞(TIL)1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。之后很快在1988年首次報(bào)道了利用TIL治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤能夠誘導(dǎo)腫瘤緩解。目前一百頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)如何制備TIL?大約需要5–6周目前一百零一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)TIL增殖:粘附的腫瘤細(xì)胞死亡或被淋巴細(xì)胞殺死而消失生長(zhǎng)2–4周鑒定TIL殺傷腫瘤的活性直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中快速擴(kuò)增:

抗CD3抗體,IL-2和滅活的同種異體PBMCs飼養(yǎng)細(xì)胞，2周轉(zhuǎn)輸患者挑選應(yīng)答最強(qiáng)的細(xì)胞克隆目前一百零二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失清除淋巴細(xì)胞，減少與

TIL競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞因子,如IL-7和IL-15;清除內(nèi)源性Treg.目前一百零三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)

六、TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì)

什么是TLR？Toll-likereceptor，Toll樣受體。是一類(lèi)模式識(shí)別受體，能夠識(shí)別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線(xiàn)，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。目前一百零四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細(xì)胞膜內(nèi)體目前一百零五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)TLR1廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、NK細(xì)胞；TLR2/4/5主要分布于除T、B、NK細(xì)胞以外的免疫細(xì)胞；TLR3主要表達(dá)于未成熟的DC等；TLR7-TLR9主要表達(dá)于單核細(xì)胞、DC細(xì)胞核巨噬細(xì)胞。目前一百零六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)目前一百零七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)TLRs與腫瘤免疫治療目前一百零八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)

腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激分子缺失促凋亡分子目前一百零九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)通過(guò)活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導(dǎo)的免疫抑制狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用。作為腫瘤生物治療的關(guān)鍵問(wèn)題是打破腫瘤導(dǎo)致的免疫耐受狀態(tài)！目前一百一十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)TLR配體已經(jīng)通過(guò)多種途徑應(yīng)用外用乳膏

靜脈注射

口服

瘤內(nèi)注射

皮下注射

目前一百一十一頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)TLR3,4,7/8和TLR9激動(dòng)劑被列入美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強(qiáng)大的抗腫瘤潛力。目前一百一十二頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)1.TLR-7激動(dòng)劑(1)天然ssRNA及其衍生物:

通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，然后與TLR-7相互作用。TLR7ssRNA：?jiǎn)捂淩NA目前一百一十三頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細(xì)胞，產(chǎn)生IFN-并增強(qiáng)細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)TLR-7激動(dòng)劑ssRNA機(jī)制:目前一百一十四頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)(2)合成的TLR7激動(dòng)劑Imiquimod(咪喹莫特):HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤

(淺表性基底細(xì)胞癌

sBCC),III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為79–82%；癌變前的光線(xiàn)性角化病治療。外用乳膏

目前一百一十五頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)機(jī)制:誘導(dǎo)細(xì)胞因子如IFN-γ和IL-12產(chǎn)生;增強(qiáng)腫瘤特異性CTLs的活化；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。目前一百一十六頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)

有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗(yàn)有10項(xiàng)。目前一百一十七頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)PolyI:C(多聚肌苷酸-胞苷酸),合成的病毒dsRNA類(lèi)似物誘導(dǎo)I型IFNs的產(chǎn)生分子式:(C10H13N4O8P)x.(C9H14N3O8P)x2.TLR3激動(dòng)劑dsRNA：雙鏈RNA目前一百一十八頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)成熟DC,其活化抗原特異性T細(xì)胞的能力增強(qiáng),CD4+T細(xì)胞向Th1方向分化，分泌大量IFN。目前一百一十九頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)Ovariancancerpatients目前一百二十頁(yè)\總數(shù)一百三十四頁(yè)\編于點(diǎn)在人類(lèi),TLR9主要表達(dá)于B細(xì)