第三章生物物證常見技術(shù)

第三章生物物證常見技術(shù)第1頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)電泳技術(shù)電泳是指在電場中的帶電粒子向電性相反方向發(fā)生位移的現(xiàn)象。是蛋白質(zhì)、核酸分析鑒定的主要技術(shù)之一。第2頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三電泳原理在同一電泳條件下，不同帶電顆粒因其分子大小和帶電量的不同具有不同的泳動速度。因此電泳一定時(shí)間，就能相互分開。第3頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三電泳的分類

自由界面電泳：電泳可以直接將樣品放在緩沖液中進(jìn)行。區(qū)帶電泳：將樣品放在固體支持物上進(jìn)行電泳，因待測樣品各組分的泳動率不同被分離成不同的區(qū)帶。第4頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三區(qū)帶電泳分類（一）據(jù)電場強(qiáng)度分：高壓；常壓；低壓。（二）據(jù)支持物種類分：濾紙；醋酸纖維薄膜；瓊脂糖凝膠；聚丙烯酰胺凝膠。（三）據(jù)支持物形狀分：水平板；垂直板；柱狀；圓盤；U形管；毛細(xì)管。（四）據(jù)原理分：等速；免疫；等電聚焦。（五）據(jù)方向分：單向；雙向。（六）據(jù)目的分：分析；制備。（七）據(jù)緩沖液pH分：連續(xù)pH；非連續(xù)pH。第5頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三電泳槽電泳儀第6頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第7頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第8頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三電泳步驟電泳的一般操作程序包括支持物的準(zhǔn)備、加樣、電泳、固定、染色、脫色、定性觀察及定量測定等過程。請觀看視頻第9頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三1、高壓電極槽與進(jìn)樣機(jī)構(gòu)

2、填灌清洗機(jī)構(gòu)

3、毛細(xì)管

4、檢測器

5、鉑絲電極

6、低壓電極槽

7、恒溫機(jī)構(gòu)

8、記錄/數(shù)據(jù)處理第10頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第11頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)層析法所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相，另一是流動相。當(dāng)待分離的混合物隨流動相通過固定相時(shí)，由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量比）不同，且隨流動相向前移動，各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達(dá)到將各組分分離的目的。第12頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第13頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第14頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三層析操作第15頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第16頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第17頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第18頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第19頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第20頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第三節(jié)比色技術(shù)分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。第21頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三比色技術(shù)分類光譜分析技術(shù)可分為發(fā)射光譜、吸收光譜和散射光譜三大類?；诎l(fā)射光譜分析的方法有火焰光度法、原子發(fā)射光譜法和熒光光譜法，基于吸收光譜分析的方法有紫外-可見光分光光度法，原子吸收分光光度法和紅外光譜法；基于散射光譜分析的方法有比濁法。第22頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三

A=abc式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm3)，a為吸光系數(shù)。當(dāng)固定溶液層厚度l和吸光系數(shù)a時(shí)，吸光度A與溶液的濃度成線性關(guān)系。第23頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三比色儀器紫外分光光度計(jì)，可見分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。第24頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三722第25頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第四節(jié)離心技術(shù)離心技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室常采用的技術(shù)，主要是利用離心力將懸浮液中的懸浮微?？焖俪两?，借以分離比重不同的各種物質(zhì)成分的方法。第26頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三F

＝重力－浮力＝

VPg

－

Vδg

＝

Vg

（

p

－

δ

）式中:

F

——下沉力；V

——微粒體積；P

——微粒密度；δ

——介質(zhì)密度；g

——重力加速度。當(dāng)

P

＞

δ

時(shí)，微粒下沉；

P

與

δ

差值越大，微粒下沉速度越快。因此，加大離心機(jī)轉(zhuǎn)速可加快離心微粒的沉降速度第27頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三離心機(jī)分類（一）根據(jù)轉(zhuǎn)速分類1、常速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速少于5000r/min，用于一般液體可沉淀顆粒的分離，或制備一般的組織勻漿。2、高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000-25000r/min，用于細(xì)胞器的分離和生物大分子的制備。3、超速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速超過25000-85000r/min

，多用于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分離和生物大分子的制備。

第28頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三（二）根據(jù)溫度分類1、常溫離心機(jī)：室溫（25℃）下工作。常速離心時(shí)使用。2、低溫離心機(jī)：在4℃下工作。高速離心時(shí)使用。3、冷凍離心機(jī)：在0～－25℃工作。超速離心時(shí)使用。第29頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三（三）根據(jù)體積大小和放置方式分類1、臺式離心機(jī)：體積小，放在操作臺上，用于微量物質(zhì)的提取。2、落地式離心機(jī)：體積大，放在地面上，用于大量物質(zhì)的提取。第30頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三（四）根據(jù)供能方式分類1、自動式離心機(jī)：設(shè)置程序后，電腦程序控制離心速度和時(shí)間。2、電動式離心機(jī)：由操作者接通電源、利用旋鈕控制離心速度和時(shí)間的離心機(jī)。3、手動式離心機(jī)：第31頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三第五節(jié)顯微鏡技術(shù)第32頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三一、發(fā)明最早的顯微鏡是16世紀(jì)末期在荷蘭制造出來的。發(fā)明者可能是札恰里亞斯·詹森（眼鏡商）或漢斯·利珀希（科學(xué)家），他們用兩片透鏡制作了簡易的顯微鏡，但并沒有用于觀察。第一個使用者是伽利略。第二個是荷蘭商人安東尼·凡·列文虎克。1931年，恩斯特·魯斯卡研制了電子顯微鏡，1986年他被授予諾貝爾獎。第33頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三二、分類（一）光學(xué)顯微鏡：通常皆由光學(xué)部分、照明部分和機(jī)械部分組成。目前光學(xué)顯微鏡主要有明視野顯微鏡（普通光學(xué)顯微鏡）、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡、偏光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡。（二）電子顯微鏡：有與光學(xué)顯微鏡相似的基本結(jié)構(gòu)特征，但它將電子流作為一種新的光源，使物體成像?？砂盐矬w放大到200萬倍。種類有掃描電鏡、分析電鏡、超高壓電鏡等。第34頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三三、顯微鏡的使用方法

1.對光：

（1）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。

（2）撥動反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無陰影。反光鏡有平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。

（3）將待觀察的標(biāo)本置載物臺上，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器的同時(shí)，須俯身在鏡旁仔細(xì)觀察接物鏡與標(biāo)本之間的距離。

（4）左眼于接目鏡觀察，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時(shí)即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。

第35頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三2．

接物鏡的使用及光線的調(diào)節(jié)：

顯微鏡一般具有三個接物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)換盤孔中。觀察標(biāo)本時(shí)，先使用低倍接物鏡，此時(shí)，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較小。后高倍接物鏡放大的倍數(shù)較大，能觀察微小的物體或結(jié)構(gòu)。再使用油鏡觀察，一般加一滴油后直接將油鏡頭浸入油滴中進(jìn)行鏡檢觀察。

第36頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三3．

低倍、高倍、油鏡頭的識別：

（1）標(biāo)明放大倍數(shù)10×，40×，100×，或10/0.25，40/0.65，100/1.30。

（2）低倍鏡最短，高倍鏡較長，油鏡最長。

（3）鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。

（4）油鏡頭上?？逃泻谏h(huán)圈，或“油”字。

第37頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三

4．（1）光線對好后，移動推進(jìn)器尋找需要觀察的標(biāo)本。

（2）如標(biāo)本的體積較大，不能清楚查見其構(gòu)造因而不能確認(rèn)時(shí)，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。

（3）旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。

（4）調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象達(dá)到最清晰的程度。

第38頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三

5．

油鏡的使用方法：

（1）原理：油鏡的透氣孔最小，這樣進(jìn)入的光線就少，物體不易看清楚。同時(shí)又因自玻片透過的光線，由于發(fā)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線就更少，物體更看不清楚。采用一種和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏油，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線不通過空氣，這樣射入鏡頭的光線就較多，物象就看得清楚。第39頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三（2）油鏡的使用：

a．將光線調(diào)至最強(qiáng)（聚光器提高，光圈開放）。

b．轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小滴于接物鏡正下方標(biāo)本上。

c．轉(zhuǎn)動接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。

d．俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。

第40頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三e．慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見到標(biāo)本的物象為止。

f．轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清的程度。

g．左手徐徐移動推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。

h．標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。

第41頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三

6．

注意事項(xiàng)：

（1）使用顯微鏡之前，應(yīng)熟悉顯微鏡的各部名稱及使用方法，特別應(yīng)掌握識別三種接物鏡之特征。

（2）觀察無色和顏色較淺的標(biāo)本時(shí)，必須注意光線的調(diào)節(jié)。

（3）新鮮標(biāo)本觀察時(shí)，須加蓋玻片，以免標(biāo)本因蒸發(fā)而干燥變形或污染侵蝕接物鏡，同時(shí)可使標(biāo)本表面勻平，光線得以集中，有利于觀察。第42頁，共44頁，2023年，2月20日，星期三四、顯微鏡的保養(yǎng)1．顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實(shí)習(xí)臺上或裝

入木箱內(nèi)。

2．顯微鏡放到實(shí)習(xí)臺上時(shí)，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時(shí)與臺面接觸，這樣震動過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。

3．顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時(shí)，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許