藥分 第四章 藥物的含量測定方法與驗證

第四章

藥物的含量測定

方法與驗證

第一節(jié)

定量分析的項目原料藥的含量測定制劑的含量測定定量檢查：雜質(zhì)定量溶出度含量均勻度釋放度

容量分析法：

準(zhǔn)確度高，專屬性差光譜法：靈敏度高，準(zhǔn)確度較高，專屬性稍差色譜法：靈敏度高，專屬性強(qiáng)含量測定方法的選擇原料藥：容量法制劑：光譜法復(fù)方制劑：色譜法雜質(zhì)：色譜法溶出度，含量均勻度，釋放度：光譜法一.容量分析法（一）容量分析法的特點

相對誤差

≤0.2％操作簡便、快速專屬性較差:原料藥第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

（二）容量分析法的有關(guān)計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點指每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量。

1.*滴定度：例：

維生素C的含量測定：每1ml碘滴定液（0.05moL/L)相當(dāng)于8.806mg的維生素C。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

a——被測藥物的摩爾數(shù)

b——滴定液摩爾數(shù)

m—滴定液的摩爾濃度

M—被測藥物的毫摩爾質(zhì)量

2.滴定度（T）的計算：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點T’＝T×F

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點3.含量計算（1）直接滴定法：W——供試品質(zhì)量；mg；V——消耗的滴定液體積，ml；T——藥典規(guī)定的滴定度，mg/ml；F——校正因數(shù)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點（2）間接滴定法1）生成物滴定法

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

例葡萄糖酸銻鈉的測定Ch.P（2010）

2）剩余量滴定法（回滴定法）

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點TA─滴定液A的滴定度，mg/ml；VA─定量加入的滴定液A的體積，mL；VB─滴定液在回滴定中消耗的體積，mL；FA─滴定液A的濃度校正因數(shù)；FB─滴定液B的濃度校正因數(shù)；W─供試品質(zhì)量；mg；無空白時司可巴比妥鈉的含量測定

取本品約0.1g，精密稱定，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：TA─滴定液對被測物的滴定度，mg/ml；V0B─空白消耗回滴定液體積，mL；VSB─回滴定液體積，mL；FB─回滴定液的濃度校正因數(shù)；W─供試品質(zhì)量；mg；有空白時已知：M=260.23，司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)的摩爾比為1：1；

W=0.1022g，

F=1.038；

VS:15.73mlVO:23.21ml第一節(jié)定量分析方法的分類與特點第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

二、光譜分析法（一）紫外-可見分光光度法

200nm—760nm1.朗伯-比耳定律

A=ECL第一節(jié)定量分析方法的分類與特點2.特點儀器價廉，操作簡單；靈敏度高：10-4g/ml～10-7g/ml準(zhǔn)確度較高：SD為2％～5％；專屬性較差：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點制劑含量測定及定量檢查3.對溶劑的要求溶劑置1cm石英比色池中，以空氣為空白測定吸光度。溶劑和吸收池的吸光度：

220～240nm≤0.40；

241～250nm≤0.20；

251～300nm≤0.10；在300nm≤0.05第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

4.測定法

同批溶劑為空白對照供試品溶液的吸光度，應(yīng)減去空白讀數(shù)A應(yīng)在0.3—0.7之間的誤差較小。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

（1）對照品比較法

供試品溶液A供

對照品溶液100％±10％A對

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點A供＝E1%1cm×l×C供A對＝E1%1cm×l×C對D—稀釋倍數(shù)；W—供試品取樣量

稱取苯巴比妥0.1585克，加pH9.6緩沖溶液稀釋至100ml，精密量取5ml,同法稀釋至200ml，搖勻，濾過，再取續(xù)濾液25.0ml稀釋至100.0ml作為供試品溶液；第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：苯巴比妥的含量測定另精密量取苯巴比妥對照品適量，同法稀釋制成10.1μg/ml的溶液作為對照品溶液。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：苯巴比妥的含量測定取上述兩種溶液，照分光光度法，在240nm的波長處分別測得供試品溶液和對照品溶液的吸收度分別為0.427和0.438，試計算苯巴比妥的含量。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：苯巴比妥的含量測定W平為單位制劑的平均重量（或裝量）B為制劑的標(biāo)示量固體制劑

V平為單位制劑的標(biāo)示裝量

V為供試品的量取體積

B為制劑的標(biāo)示量標(biāo)

液體制劑（2）吸收系數(shù)法供試品溶液：A

已知

計算含量維生素B2含量測定取本品約75mg，精密稱定，置燒杯中，加冰醋酸1ml與水75ml，加熱溶解后，加水稀釋，放冷，移置500ml量瓶中，再加水稀釋至刻度，搖勻；第一節(jié)定量分析方法的分類與特點維生素B2含量測定精密量取10ml，置100ml量瓶中，加1.4%醋酸鈉溶液7ml，并用水稀釋至刻度，搖勻，第一節(jié)定量分析方法的分類與特點維生素B2含量測定照分光光度法在444nm的波長處測定吸收度，按維生素B2的吸收系數(shù)為323計算，求含量？A=0.4923W=76.28mg第一節(jié)定量分析方法的分類與特點（3）計算分光光度法：不宜做含量測定雙波長分光光度法解線性方程組法三波長法導(dǎo)數(shù)光譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點（4）比色法供試品加入適當(dāng)?shù)娘@色劑后進(jìn)行測定的方法。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

三、色譜分析法

特點高靈敏度:10-12～10-15g/ml高專屬性：選擇性檢測高效能、高速度：10～30min,多組分復(fù)方制劑含量測定的首選方法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點（一）高效液相色譜法1.對儀器的一般要求：RP-HPLC固定相：C18流動相:甲醇(乙腈)-水(緩沖液)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

正文中：固定相種類流動相組成檢測器類型不能變2.*系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱的理論板數(shù)（n)(2)分離度:

R＞1.5第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(3)重復(fù)性：5次相對偏差≤2.0%(4)拖尾因子T：

0.95～1.05第一節(jié)定量分析方法的分類與特點3.測定法（1）▲內(nèi)標(biāo)法

計算校正因子

測定含量

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點對內(nèi)標(biāo)物的要求：原樣品中不含有的組分

t內(nèi)≈t供，R≥1.5

純度合乎要求的純物質(zhì)含量已知第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

內(nèi)標(biāo)法以內(nèi)標(biāo)為標(biāo)竿，對比測定待測組分的含量的方法優(yōu)點：定量結(jié)果與進(jìn)樣量無關(guān)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點地塞米松的HPLC法測定：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：取本品精密稱定，質(zhì)量為0.0135g，置50ml量瓶中，加30ml乙醇溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中。加0.2mg/ml甲基睪丸素液5.0ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取20μl進(jìn)樣，地塞米松的HPLC法測定：例：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點測得地塞米松的峰面積為13130，甲基睪丸素的峰面積為10320，質(zhì)量校正因子為1.05，求其含量。地塞米松的HPLC法測定：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例：(2)外標(biāo)法以供試品的對照品或標(biāo)準(zhǔn)品作對照物質(zhì)，相比較以求得供試品的含量。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點復(fù)習(xí)題和思考題1.藥物含量的容量、光譜和色譜分析法的計算2.滴定度的定義和計算3.色譜系統(tǒng)適用性試驗的內(nèi)容，要求及相關(guān)計算。4.總結(jié)含量測定方法選擇的原則。參考p405.查找文獻(xiàn)《化學(xué)藥物質(zhì)量分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則》，預(yù)習(xí)對象：含金屬或鹵素、硫、磷、硒等有機(jī)藥物。第二節(jié)樣品分析的前處理方法方法：1、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法2、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

對象：含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的鹵素等藥物水解法還原法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法目的：有機(jī)結(jié)構(gòu)部分完全破壞待測元素?zé)o機(jī)離子方法濕法破壞干法破壞第二節(jié)樣品分析的前處理方法（一）濕法破壞

含氮有機(jī)藥物分析的前處理

生物制品：N、P、C9H9HgNaO2S、

NaCl測定法的前處理

生物樣品:測定金屬元素時去除生物基質(zhì)二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法第二節(jié)樣品分析的前處理方法方法

硫酸-硝酸法硫酸-高氯酸法硫酸-硫酸鹽法硝酸-高錳酸鉀法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（一）濕法破壞分解劑輔助分解劑凱氏定氮法應(yīng)用范圍：

氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物含量

撲米酮

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（一）濕法破壞（二）干法破壞含鹵素、硫、磷等有機(jī)藥物的前處理

高溫?zé)胱品?/p>

氧瓶燃燒法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1.高溫?zé)胱品ǖ诙?jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞有機(jī)藥物（鹵素、磷）高溫?zé)胱破茐臒o機(jī)元素可溶性無機(jī)鹽2.氧瓶燃燒法oxygenflaskcombustionmethod含鹵素或硫、磷等元素有機(jī)藥物鑒別、限量檢查或含量測定

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞

原理

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞有機(jī)藥物（鹵素、硫、磷）氧瓶中燃燒CO2、H2O氧化物或無氧酸吸收液第三節(jié)

藥品分析方法驗證

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求目的需驗證的分析項目1.鑒別試驗；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測試方法。準(zhǔn)確度精密度:專屬性檢測限、定量限線性、范圍耐用性*驗證內(nèi)容

一、準(zhǔn)確度（accuracy）測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。第三節(jié)藥品分析方法驗證（一）含量測定方法的準(zhǔn)確度

原料藥制劑第三節(jié)藥品分析方法驗證一、準(zhǔn)確度例：A注射液中A的測定A含量(mg/支）加入量（mg）測得量（mg）回收率（%）2.101.003.0595.0%第三節(jié)藥品分析方法驗證一、準(zhǔn)確度（二）雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。另一成熟的方法進(jìn)行比較。一、準(zhǔn)確度第三節(jié)藥品分析方法驗證（三）數(shù)據(jù)要求

三個不同濃度樣品各測三次濃度：80%100%120%一、準(zhǔn)確度第三節(jié)藥品分析方法驗證

二、精密度（precision）

指在規(guī)定條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。第三節(jié)藥品分析方法驗證偏差（d）：測量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差：RSD或CV第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度（一）驗證內(nèi)容重復(fù)性：

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度批內(nèi)精密度或日內(nèi)精密度（一）驗證內(nèi)容制備三個不同濃度樣品各測三次；

100%水平的供試品溶液，測6次第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度2.中間精密度

同一實驗室，不同時間不同分析人員

不同設(shè)備第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度2.中間精密度

同一分析人員用同一設(shè)備在不同時間測定所得結(jié)果的中間精密度第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度批間精密度或日間精密度

3.重現(xiàn)性

不同實驗室，

不同分析人員測定結(jié)果的精密度。第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度（二）數(shù)據(jù)要求標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差可信限

第三節(jié)藥品分析方法驗證二、精密度

三、專屬性（specificity）

第三節(jié)藥品分析方法驗證指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性（一）鑒別反應(yīng)

含被測成分的供試品+

不含被測成分的供試品-

結(jié)構(gòu)相似的化合物-第三節(jié)藥品分析方法驗證三、專屬性（二）含量測定和雜質(zhì)測定

色譜法代表性圖譜第三節(jié)藥品分析方法驗證三、專屬性

四、檢測限：靈敏度（limitofdetection，LOD）試樣中被測物能被檢測出的最低量。

第三節(jié)藥品分析方法驗證（一）常用方法1．目視法

用已知濃度的被測物，目視確定能被可靠地檢測出的最低濃度或量。

第三節(jié)藥品分析方法驗證四、檢測限藥物中雜質(zhì)檢查的LOD：5ug/ml10ug/ml20ug/ml50ug/ml100ug/ml雜質(zhì)斑點點樣原點TLC檢查雜質(zhì)LOD的確定四、檢測限

2．信噪比法：儀器法

S/N=3∶1或2∶1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量第三節(jié)藥品分析方法驗證四、檢測限

3．標(biāo)準(zhǔn)偏差法

儀器法

LOD=f·3S空=C樣/A樣×3S空

f為校正因數(shù)

C樣為低濃度樣品溶液的濃度值

A樣為低濃度樣品溶液的吸光度值第三節(jié)藥品分析方法驗證四、檢測限（二）數(shù)據(jù)要求

測試圖譜說明測試過程和檢測限結(jié)果。第三節(jié)藥品分析方法驗證四、檢測限五、定量限（1imitofquanti