藥分 第四章 藥物的含量測(cè)定方法與驗(yàn)證

第四章

藥物的含量測(cè)定

方法與驗(yàn)證

第一節(jié)

定量分析的項(xiàng)目原料藥的含量測(cè)定制劑的含量測(cè)定定量檢查：雜質(zhì)定量溶出度含量均勻度釋放度

容量分析法：

準(zhǔn)確度高，專屬性差光譜法：靈敏度高，準(zhǔn)確度較高，專屬性稍差色譜法：靈敏度高，專屬性強(qiáng)含量測(cè)定方法的選擇原料藥：容量法制劑：光譜法復(fù)方制劑：色譜法雜質(zhì)：色譜法溶出度，含量均勻度，釋放度：光譜法一.容量分析法（一）容量分析法的特點(diǎn)

相對(duì)誤差

≤0.2％操作簡(jiǎn)便、快速專屬性較差:原料藥第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)指每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。

1.*滴定度：例：

維生素C的含量測(cè)定：每1ml碘滴定液（0.05moL/L)相當(dāng)于8.806mg的維生素C。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

a——被測(cè)藥物的摩爾數(shù)

b——滴定液摩爾數(shù)

m—滴定液的摩爾濃度

M—被測(cè)藥物的毫摩爾質(zhì)量

2.滴定度（T）的計(jì)算：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)T’＝T×F

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)3.含量計(jì)算（1）直接滴定法：W——供試品質(zhì)量；mg；V——消耗的滴定液體積，ml；T——藥典規(guī)定的滴定度，mg/ml；F——校正因數(shù)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)（2）間接滴定法1）生成物滴定法

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

例葡萄糖酸銻鈉的測(cè)定Ch.P（2010）

2）剩余量滴定法（回滴定法）

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)TA─滴定液A的滴定度，mg/ml；VA─定量加入的滴定液A的體積，mL；VB─滴定液在回滴定中消耗的體積，mL；FA─滴定液A的濃度校正因數(shù)；FB─滴定液B的濃度校正因數(shù)；W─供試品質(zhì)量；mg；無(wú)空白時(shí)司可巴比妥鈉的含量測(cè)定

取本品約0.1g，精密稱定，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：TA─滴定液對(duì)被測(cè)物的滴定度，mg/ml；V0B─空白消耗回滴定液體積，mL；VSB─回滴定液體積，mL；FB─回滴定液的濃度校正因數(shù)；W─供試品質(zhì)量；mg；有空白時(shí)已知：M=260.23，司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)的摩爾比為1：1；

W=0.1022g，

F=1.038；

VS:15.73mlVO:23.21ml第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

二、光譜分析法（一）紫外-可見(jiàn)分光光度法

200nm—760nm1.朗伯-比耳定律

A=ECL第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)2.特點(diǎn)儀器價(jià)廉，操作簡(jiǎn)單；靈敏度高：10-4g/ml～10-7g/ml準(zhǔn)確度較高：SD為2％～5％；專屬性較差：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)制劑含量測(cè)定及定量檢查3.對(duì)溶劑的要求溶劑置1cm石英比色池中，以空氣為空白測(cè)定吸光度。溶劑和吸收池的吸光度：

220～240nm≤0.40；

241～250nm≤0.20；

251～300nm≤0.10；在300nm≤0.05第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

4.測(cè)定法

同批溶劑為空白對(duì)照供試品溶液的吸光度，應(yīng)減去空白讀數(shù)A應(yīng)在0.3—0.7之間的誤差較小。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

（1）對(duì)照品比較法

供試品溶液A供

對(duì)照品溶液100％±10％A對(duì)

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)A供＝E1%1cm×l×C供A對(duì)＝E1%1cm×l×C對(duì)D—稀釋倍數(shù)；W—供試品取樣量

稱取苯巴比妥0.1585克，加pH9.6緩沖溶液稀釋至100ml，精密量取5ml,同法稀釋至200ml，搖勻，濾過(guò)，再取續(xù)濾液25.0ml稀釋至100.0ml作為供試品溶液；第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：苯巴比妥的含量測(cè)定另精密量取苯巴比妥對(duì)照品適量，同法稀釋制成10.1μg/ml的溶液作為對(duì)照品溶液。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：苯巴比妥的含量測(cè)定取上述兩種溶液，照分光光度法，在240nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)得供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度分別為0.427和0.438，試計(jì)算苯巴比妥的含量。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：苯巴比妥的含量測(cè)定W平為單位制劑的平均重量（或裝量）B為制劑的標(biāo)示量固體制劑

V平為單位制劑的標(biāo)示裝量

V為供試品的量取體積

B為制劑的標(biāo)示量標(biāo)

液體制劑（2）吸收系數(shù)法供試品溶液：A

已知

計(jì)算含量維生素B2含量測(cè)定取本品約75mg，精密稱定，置燒杯中，加冰醋酸1ml與水75ml，加熱溶解后，加水稀釋，放冷，移置500ml量瓶中，再加水稀釋至刻度，搖勻；第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)維生素B2含量測(cè)定精密量取10ml，置100ml量瓶中，加1.4%醋酸鈉溶液7ml，并用水稀釋至刻度，搖勻，第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)維生素B2含量測(cè)定照分光光度法在444nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按維生素B2的吸收系數(shù)為323計(jì)算，求含量？A=0.4923W=76.28mg第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)（3）計(jì)算分光光度法：不宜做含量測(cè)定雙波長(zhǎng)分光光度法解線性方程組法三波長(zhǎng)法導(dǎo)數(shù)光譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)（4）比色法供試品加入適當(dāng)?shù)娘@色劑后進(jìn)行測(cè)定的方法。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

三、色譜分析法

特點(diǎn)高靈敏度:10-12～10-15g/ml高專屬性：選擇性檢測(cè)高效能、高速度：10～30min,多組分復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)（一）高效液相色譜法1.對(duì)儀器的一般要求：RP-HPLC固定相：C18流動(dòng)相:甲醇(乙腈)-水(緩沖液)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

正文中：固定相種類流動(dòng)相組成檢測(cè)器類型不能變2.*系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱的理論板數(shù)（n)(2)分離度:

R＞1.5第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)(3)重復(fù)性：5次相對(duì)偏差≤2.0%(4)拖尾因子T：

0.95～1.05第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)3.測(cè)定法（1）▲內(nèi)標(biāo)法

計(jì)算校正因子

測(cè)定含量

第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求：原樣品中不含有的組分

t內(nèi)≈t供，R≥1.5

純度合乎要求的純物質(zhì)含量已知第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)

內(nèi)標(biāo)法以內(nèi)標(biāo)為標(biāo)竿，對(duì)比測(cè)定待測(cè)組分的含量的方法優(yōu)點(diǎn)：定量結(jié)果與進(jìn)樣量無(wú)關(guān)第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)地塞米松的HPLC法測(cè)定：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：取本品精密稱定，質(zhì)量為0.0135g，置50ml量瓶中，加30ml乙醇溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中。加0.2mg/ml甲基睪丸素液5.0ml，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20μl進(jìn)樣，地塞米松的HPLC法測(cè)定：例：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)測(cè)得地塞米松的峰面積為13130，甲基睪丸素的峰面積為10320，質(zhì)量校正因子為1.05，求其含量。地塞米松的HPLC法測(cè)定：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)例：(2)外標(biāo)法以供試品的對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照物質(zhì)，相比較以求得供試品的含量。第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)復(fù)習(xí)題和思考題1.藥物含量的容量、光譜和色譜分析法的計(jì)算2.滴定度的定義和計(jì)算3.色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的內(nèi)容，要求及相關(guān)計(jì)算。4.總結(jié)含量測(cè)定方法選擇的原則。參考p405.查找文獻(xiàn)《化學(xué)藥物質(zhì)量分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》，預(yù)習(xí)對(duì)象：含金屬或鹵素、硫、磷、硒等有機(jī)藥物。第二節(jié)樣品分析的前處理方法方法：1、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法2、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法一、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

對(duì)象：含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的鹵素等藥物水解法還原法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法目的：有機(jī)結(jié)構(gòu)部分完全破壞待測(cè)元素?zé)o機(jī)離子方法濕法破壞干法破壞第二節(jié)樣品分析的前處理方法（一）濕法破壞

含氮有機(jī)藥物分析的前處理

生物制品：N、P、C9H9HgNaO2S、

NaCl測(cè)定法的前處理

生物樣品:測(cè)定金屬元素時(shí)去除生物基質(zhì)二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法第二節(jié)樣品分析的前處理方法方法

硫酸-硝酸法硫酸-高氯酸法硫酸-硫酸鹽法硝酸-高錳酸鉀法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（一）濕法破壞分解劑輔助分解劑凱氏定氮法應(yīng)用范圍：

氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物含量

撲米酮

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（一）濕法破壞（二）干法破壞含鹵素、硫、磷等有機(jī)藥物的前處理

高溫?zé)胱品?/p>

氧瓶燃燒法第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1.高溫?zé)胱品ǖ诙?jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞有機(jī)藥物（鹵素、磷）高溫?zé)胱破茐臒o(wú)機(jī)元素可溶性無(wú)機(jī)鹽2.氧瓶燃燒法oxygenflaskcombustionmethod含鹵素或硫、磷等元素有機(jī)藥物鑒別、限量檢查或含量測(cè)定

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞

原理

第二節(jié)樣品分析的前處理方法二、（二）干法破壞有機(jī)藥物（鹵素、硫、磷）氧瓶中燃燒CO2、H2O氧化物或無(wú)氧酸吸收液第三節(jié)

藥品分析方法驗(yàn)證

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求目的需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；5.溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。準(zhǔn)確度精密度:專屬性檢測(cè)限、定量限線性、范圍耐用性*驗(yàn)證內(nèi)容

一、準(zhǔn)確度（accuracy）測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度

原料藥制劑第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度例：A注射液中A的測(cè)定A含量(mg/支）加入量（mg）測(cè)得量（mg）回收率（%）2.101.003.0595.0%第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度（二）雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。另一成熟的方法進(jìn)行比較。一、準(zhǔn)確度第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證（三）數(shù)據(jù)要求

三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次濃度：80%100%120%一、準(zhǔn)確度第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證

二、精密度（precision）

指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差：RSD或CV第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度（一）驗(yàn)證內(nèi)容重復(fù)性：

在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度批內(nèi)精密度或日內(nèi)精密度（一）驗(yàn)證內(nèi)容制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次；

100%水平的供試品溶液，測(cè)6次第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度2.中間精密度

同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間不同分析人員

不同設(shè)備第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度2.中間精密度

同一分析人員用同一設(shè)備在不同時(shí)間測(cè)定所得結(jié)果的中間精密度第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度批間精密度或日間精密度

3.重現(xiàn)性

不同實(shí)驗(yàn)室，

不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度（二）數(shù)據(jù)要求標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差可信限

第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證二、精密度

三、專屬性（specificity）

第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性（一）鑒別反應(yīng)

含被測(cè)成分的供試品+

不含被測(cè)成分的供試品-

結(jié)構(gòu)相似的化合物-第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證三、專屬性（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定

色譜法代表性圖譜第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證三、專屬性

四、檢測(cè)限：靈敏度（limitofdetection，LOD）試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。

第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證（一）常用方法1．目視法

用已知濃度的被測(cè)物，目視確定能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證四、檢測(cè)限藥物中雜質(zhì)檢查的LOD：5ug/ml10ug/ml20ug/ml50ug/ml100ug/ml雜質(zhì)斑點(diǎn)點(diǎn)樣原點(diǎn)TLC檢查雜質(zhì)LOD的確定四、檢測(cè)限

2．信噪比法：儀器法

S/N=3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證四、檢測(cè)限

3．標(biāo)準(zhǔn)偏差法

儀器法

LOD=f·3S空=C樣/A樣×3S空

f為校正因數(shù)

C樣為低濃度樣品溶液的濃度值

A樣為低濃度樣品溶液的吸光度值第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證四、檢測(cè)限（二）數(shù)據(jù)要求

測(cè)試圖譜說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。第三節(jié)藥品分析方法驗(yàn)證四、檢測(cè)限五、定量限（1imitofquanti