史上最強(qiáng)生物課件動(dòng)物細(xì)胞工程- XXXX

1.為什么要培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞？2.要培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，對(duì)取材有何要求？實(shí)驗(yàn)材料，藥性、毒性檢測(cè)，提取細(xì)胞分泌物等選擇胚胎細(xì)胞或幼年動(dòng)物組織，因?yàn)槠浞至言鲋衬芰?qiáng)。3.培養(yǎng)基是用液體的還是固體的？培養(yǎng)基中的成分有何特點(diǎn)？培養(yǎng)基是液體的，成份與動(dòng)物內(nèi)環(huán)境相似。

動(dòng)物血清4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件有何特點(diǎn)？體溫和PH都應(yīng)與動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境相似。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。5.培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞需要哪些條件？液體、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（血清）、PH、溫度、氣體、無(wú)菌等動(dòng)物組織塊細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞幼齡動(dòng)物的器官組織；動(dòng)物胚胎細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)加入培養(yǎng)液用胰蛋白酶等處理貼壁細(xì)胞適宜條件不死性細(xì)胞電激處理使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎卵母細(xì)胞采集、培養(yǎng)MⅡ期卵母細(xì)胞供體牛供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞代孕母牛克隆牛體細(xì)胞培養(yǎng)去核卵母細(xì)胞去核胚胎移植體細(xì)胞核移植過(guò)程

（體細(xì)胞克隆動(dòng)物）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題（1）成功率非常低（2）克隆動(dòng)物以表現(xiàn)早衰、生理缺陷等健康問(wèn)題1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)著名的實(shí)驗(yàn)：人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子是運(yùn)動(dòng)的。人—鼠細(xì)胞是怎樣實(shí)現(xiàn)融合的？動(dòng)物細(xì)胞融合有什么實(shí)踐意義呢？三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體1.細(xì)胞融合：是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合為一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。⑴自然發(fā)生：

受精卵⑵人工誘導(dǎo)：

利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合

誘導(dǎo)因素：聚乙二醇、滅活的病毒或電激等。

仙臺(tái)病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）①什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。②滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞正在融合的雞血細(xì)胞⑶動(dòng)物細(xì)胞融合的原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性

把兩個(gè)不同的動(dòng)物細(xì)胞放在一起，用滅活的病毒處理細(xì)胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進(jìn)而形成雜交細(xì)胞。融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過(guò)有絲分裂后仍能形成兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞2.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用：

⑴突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；⑵為制造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑

使用相應(yīng)的抗體檢測(cè)乙肝病毒——抗原3.單克隆抗體的制備

醫(yī)院一般怎樣檢測(cè)人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？乙肝病毒模式圖

凡能夠引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。⑴什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有時(shí)自身的組織或細(xì)胞也會(huì)成為抗原，如癌細(xì)胞等?？乖瓫Q定簇：抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團(tuán)，能決定抗原特異性，是免疫細(xì)胞識(shí)別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇?cái)?shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。

⑵什么是抗體？由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?起何作用？

當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激劑后由效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白——抗體。

抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合

抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?血清抗體（也稱(chēng)多克隆抗體）由血清中提取的抗體是由不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬(wàn)種以上，稱(chēng)為多克隆抗體。特點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏?？乖患兛贵w不純

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體

每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體。如果利用單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖（克?。?，形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體——單克隆抗體。問(wèn)題：怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體呢？在體外榜培養(yǎng)的耐條件下氏，一個(gè)B淋巴細(xì)恨胞能無(wú)撐限增殖護(hù)形成細(xì)堅(jiān)胞群?jiǎn)狳c(diǎn)？什么樣的倘細(xì)胞能夠狹在體外無(wú)讓限增殖呢愚？——腫瘤細(xì)胞級(jí)！科勒米爾斯掛坦榮獲198召4年諾貝六爾生理逐學(xué)或醫(yī)饅學(xué)獎(jiǎng)如果把墾一種B淋巴細(xì)艱胞與能巨在體外推大量增砍殖的骨蹦髓瘤細(xì)忽胞進(jìn)行驅(qū)融合，佳所得到健的融合細(xì)萬(wàn)胞既能大量筐增殖，又蒼能產(chǎn)生足稈夠數(shù)量的臣特定抗體滴。⑵如何誘沾導(dǎo)融合甜？加入聚械乙二醇（PEG）⑴如何得到B淋巴細(xì)睜胞？3.制備單克隆抗伙體的過(guò)程⑶細(xì)胞兩兩宜融合后，聲有哪些類(lèi)礙型？B-BB-瘤(雜交瘤細(xì)啟胞)瘤-瘤⑷如何篩匆選出雜聾交瘤細(xì)拾胞？單克隆抗貧體制備過(guò)影程中，總誼共有兩次墻篩選，第清一次篩選輩出雜交瘤樹(shù)細(xì)胞，第晌二次篩選紹出能產(chǎn)生掃特異性抗搞體的雜交命瘤細(xì)胞，乘兩次篩選喪的原理和話方法是不毫相同的。①首先用欣選擇培養(yǎng)尋基篩選出妨雜交瘤細(xì)詳胞①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑啄，其中D途徑能被揉氨基嘌呤外阻斷。②人淋巴細(xì)敲胞中有這崗兩種DNA的合成悉途徑，洲但一般摘不分裂蛋增殖。③鼠骨髓瘤佛細(xì)胞中只炊有D途徑，餓沒(méi)有S途徑，可慚是能不斷慮分裂增殖知。你想到篩住選雜交瘤君細(xì)胞的方顧案了么？小資料：在培養(yǎng)東液中加督入氨基擔(dān)蝶呤，賴(lài)收集增路殖細(xì)胞余！加入氨次基嘌呤英后，使D合成途碰徑阻斷姐，僅有D合成途定徑的骨檢髓瘤細(xì)紙胞及其值彼此融筆合的細(xì)效胞就不爽能增殖恥，但人淋巴泛細(xì)胞和骨悔髓瘤細(xì)胞忍融合后的礎(chǔ)雜種細(xì)胞廟因?yàn)榭梢詳D利用淋巴尤細(xì)胞中的S途徑合逆成DNA而增殖閑。通常采用有限工稀釋克隆索細(xì)胞的方政法，將雜圾交瘤細(xì)自胞多倍濃稀釋?zhuān)ソ臃N在羅多孔細(xì)換胞培養(yǎng)滴板上培間養(yǎng)，使斷每孔細(xì)途胞不超啞過(guò)一個(gè)鑄，再由這說(shuō)些單細(xì)煎胞克隆四生長(zhǎng)，然后檢算測(cè)各孔竟上清液至中細(xì)胞唇分泌的宇抗體，訓(xùn)那些上醒清液可牌與特定議抗原結(jié)價(jià)合的培污養(yǎng)孔為屑陽(yáng)性孔枯。最終選獵出分泌肅預(yù)定特境異抗體爹的雜交港細(xì)胞株皮進(jìn)行擴(kuò)令大培養(yǎng)弄。②再篩選出能分泌所郊需抗體的盡雜交瘤細(xì)活胞陽(yáng)性孔方法——抗原-抗體雜脂交法在單克隆也抗體制備常過(guò)程中，辨兩次篩選目的原理和籃方法是不環(huán)相同的。⑻如何得宿到大量倒的單克慰隆抗體隸？體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆偉抗體——化學(xué)性質(zhì)爆單一、特維異性強(qiáng)抗體抗原應(yīng)答抗體倚的不純估性動(dòng)物細(xì)銹胞受到辦抗原刺株激,引起免糕疫反應(yīng)添產(chǎn)生的雨球蛋白.不是自己斯的而又能筑引起免疫晉應(yīng)答反應(yīng)賽的物質(zhì)就缺是抗原.一種抗陳原有多沫種不同歇的決定釘簇,刺激的委是多種B細(xì)胞,作用于不鑒同的B細(xì)胞后,會(huì)產(chǎn)生勸多種抗倘體,這是多伐克隆的,故不純!1.制備單克貌隆抗體的內(nèi)思路抗原

B細(xì)胞漿細(xì)胞抗體

刺激怎么才這能得到純腸的抗體?光純還不眠行,還要大弦量.怎么辦?但，有問(wèn)題:找，什蕉么細(xì)胞產(chǎn)能無(wú)限游繁殖呢?思路就怎出來(lái)了:要想獲單派一的純抗鵝體,就必須從革一個(gè)B細(xì)胞出發(fā).讓B細(xì)胞大量供繁殖(克隆)就可以產(chǎn)插生大量抗母體了.B細(xì)胞是可不能無(wú)姜限繁殖鍛的.怎么辦?癌!只有癌字細(xì)胞.但它不能土產(chǎn)生抗體.癌細(xì)胞能談無(wú)限繁殖,但不能產(chǎn)豎生抗體.B細(xì)胞能產(chǎn)瀉生抗體,但不能大歐量繁殖.融合呀!只要將兩范個(gè)細(xì)胞融榴合即可互懇補(bǔ).2.技術(shù)思路治的重點(diǎn)雜交瘤細(xì)胞

HAT篩選McAb大量培養(yǎng)PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合免疫B

脾礦物油骨髓瘤瘤問(wèn)題:在培養(yǎng)體導(dǎo)系中,有4種細(xì)胞.B細(xì)胞、瘤嶼細(xì)胞,和雜交細(xì)過(guò)胞。我們還是成拿不到McA浸b,怎么辦?篩選！篩駕出雜交瘤佩細(xì)胞。怎菊么篩?又是一個(gè)站思路問(wèn)題灶。關(guān)鍵一步單克隆抗正體篩選雜交細(xì)蔑胞雜交瘤細(xì)蓬胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜吐交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)瞧胞系提取經(jīng)過(guò)免吩疫的B淋巴細(xì)砍胞動(dòng)物細(xì)胞駛?cè)诤霞夹g(shù)動(dòng)物細(xì)胞歪培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗握體的制備色過(guò)程：特點(diǎn)：雅既能產(chǎn)征生專(zhuān)一躬抗體又星能大量作繁殖特點(diǎn)：稍特異性串強(qiáng)靈敏耽度高可融大量制著備注射抗原免疫4、單抗隆葉抗體的應(yīng)論用①作為診斷遵試劑②定位診滔斷腫瘤齡、心血途管畸形氧等疾病用于體千外診斷愧人類(lèi)和民動(dòng)植物非疾病及般病原鑒咐定，純度高、磚特異性強(qiáng)，具有準(zhǔn)確、高輛效、簡(jiǎn)易赴、快速的優(yōu)點(diǎn)。③用于治草療疾病筒和運(yùn)載揀藥物利用同乒位素標(biāo)版記單抗探，在特掛定組織甲成像制成生物導(dǎo)風(fēng)彈，將藥瀉物定向兵帶到癌彈細(xì)胞所春在的位聚置，在閉原位殺郵死癌細(xì)胖胞，療和效高、粗副作用壯小。單克隆抗紡體的優(yōu)點(diǎn)鳳：特異性強(qiáng)誓，靈敏度歪高，并可枕以大量制嶄備。

⑵用于桶治療疾正病和運(yùn)狗載藥物①特異著性強(qiáng)、繡靈敏度曬高生物導(dǎo)彈——單克隆慈抗體＋冶抗癌藥遇物②療效高笛、毒副作謙用小結(jié)合同位素的單抗-----生物導(dǎo)彈結(jié)合同位賴(lài)素的單抗---遼--生物導(dǎo)彈單抗放射性同衡位素項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性融合前提分散成單個(gè)細(xì)胞去除細(xì)胞壁誘導(dǎo)方法聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、結(jié)果獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙動(dòng)物細(xì)艱胞工程協(xié)小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞希培養(yǎng)：原理、添營(yíng)養(yǎng)、演條件、川過(guò)程、呼細(xì)胞生察長(zhǎng)特點(diǎn)蹤蝶、結(jié)果諷、應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞鍛融合：原理、誘絡(luò)導(dǎo)方法、冊(cè)過(guò)程、應(yīng)辦用單克隆叉抗體的灶制備：原理、過(guò)牌程、特點(diǎn)任、應(yīng)用核移植梢與克隆往動(dòng)物：供體、怒受體、隸核移植差方法、帖克隆動(dòng)咬物的方塵法、克盾隆動(dòng)物慘的遺傳戶特性、緊應(yīng)用動(dòng)、植蠻物細(xì)胞冷工程的斑比較：植物組培都技術(shù)與動(dòng)巧物細(xì)胞培漢養(yǎng)技術(shù)、墨植物體細(xì)涂胞雜交技扎術(shù)與動(dòng)物攏細(xì)胞融合袋技術(shù)⑶圖中B為_(kāi)__喝___準(zhǔn)__過(guò)程，常用____搜____目_作為誘導(dǎo)需劑，該細(xì)茂胞繼承____時(shí)____唉___的遺傳游特性，朵既能____醬____虹__,又能____料____介_(kāi)__。B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC1.下圖為某府同學(xué)根據(jù)繭雜交瘤技磁術(shù)的方法密，設(shè)計(jì)的信生產(chǎn)破傷禮風(fēng)桿菌的串抗體實(shí)驗(yàn)膛方案⑴該實(shí)驗(yàn)方押案的目是；⑵A是從小仗鼠的脾巴臟中取支得____炒___,該細(xì)胞能遷夠產(chǎn)生；制備單臥克隆抗敏體B細(xì)胞專(zhuān)一抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌專(zhuān)六一抗體無(wú)限增殖單克隆車(chē)抗體的帥制備1、怎樣獲左得能分泌袖專(zhuān)一抗體臣的B淋巴細(xì)估胞？2、從何才處獲得看較多的B淋巴細(xì)勁胞？3、用什么明方法可以角使B淋巴細(xì)胞猶與骨髓瘤若細(xì)胞融合垂？4、怎樣存篩選出產(chǎn)雜交瘤犬細(xì)胞？5、篩選出攝的雜交瘤抱細(xì)胞產(chǎn)生縣的抗體都霧一樣嗎？6、怎樣獲惰得只產(chǎn)生撞特異性抗谷體的雜交嚴(yán)瘤細(xì)胞？7、怎樣裳獲得大縣量的單逮一抗體某？反復(fù)注尾射特定令的抗原恥，免疫箱小鼠。小鼠的舒脾臟PEG、滅活的躍病毒等利用HAT選擇培渠養(yǎng)基培建養(yǎng)，篩悶選否用多孔問(wèn)細(xì)胞培油養(yǎng)板培攏養(yǎng)，稀竭釋度要保證每個(gè)望孔內(nèi)不多動(dòng)于一個(gè)細(xì)沙胞?？乖贵w禾雜交法檢設(shè)測(cè)——呈陽(yáng)性反卸應(yīng)體內(nèi)或懸體外大曲量培養(yǎng)悶特異的用雜交瘤肢細(xì)胞，嚼從中提吹取單一月抗體。單克隆公抗體篩選雜交細(xì)治胞雜交瘤導(dǎo)細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜邪交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)鎮(zhèn)胞系提取經(jīng)過(guò)免雀疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)虜胞融合麻技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞偵培養(yǎng)技術(shù)單克隆高抗體的斤制備過(guò)蠟程：特點(diǎn)：伴既能產(chǎn)鏟生專(zhuān)一姐抗體又槳能大量惠繁殖特點(diǎn)：六特異性右強(qiáng)靈敏并度高可館大量制暫備注射抗原免疫197謊5年Koh館ler和Mil拴ste失in的單克抽隆抗體屑技術(shù)在籌生產(chǎn)和川使用抗博體方面胡開(kāi)創(chuàng)了盆新紀(jì)元毯，圖10示單克隆粉抗體制備飽流程階段類(lèi)示意圖。至請(qǐng)據(jù)圖回招答下列問(wèn)飲題：圖10（1）該技咬術(shù)是在胳動(dòng)物細(xì)樸胞培養(yǎng)村技術(shù)和技術(shù)的基徒礎(chǔ)上發(fā)展滴起來(lái)的。（2）圖10中細(xì)胞A體外培養(yǎng)輕不具有分裂能復(fù)力，但就能分泌，細(xì)胞B體外培辛養(yǎng)能夠。（3）動(dòng)物素細(xì)胞融水合常用夢(mèng)的方法是。圖10（1）動(dòng)物共細(xì)胞融逐合（2）分泌毀特異性悲抗體原、無(wú)限暈增殖（3）PEG（滅活刷的病毒撕、電刺靜激）（4）細(xì)胞融飽合是隨機(jī)乳的過(guò)程，現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基威中培養(yǎng)隊(duì)，要篩附選出細(xì)胞。在退細(xì)胞培養(yǎng)距過(guò)程中，賄為了促進(jìn)計(jì)細(xì)胞攝取撞葡萄糖，瞞常向培養(yǎng)跟液中加入（激素）竹。（5）培養(yǎng)2周后，即傅測(cè)定培養(yǎng)堪細(xì)胞的特征，犁篩選出細(xì)胞置于丈不同孔錄內(nèi)（如效圖所示鎖）培養(yǎng)搖。此操作前痰要將培養(yǎng)乞細(xì)胞稀釋克到7～10個(gè)細(xì)胞/ml，每孔滴很入0.1浩ml細(xì)胞稀釋完液，其目華的是。（6）要獲得儲(chǔ)大量的單彎克隆抗體忙，可對(duì)獲敬得的雜孩交瘤細(xì)亮胞進(jìn)行培養(yǎng)。（4）雜交米瘤、胰詠島素（5）特異性炊分泌抗X蛋白抗經(jīng)體的、享保證每部個(gè)孔內(nèi)收不多于駛一個(gè)細(xì)蓋胞，達(dá)弦到單克他隆培養(yǎng)垃的目的藍(lán)（單一斑細(xì)胞培鐵養(yǎng)以保點(diǎn)證抗體伙的純度斗）、（6）體外或忌體內(nèi)⑴寫(xiě)出痰ａ、牽ｂ所指常的細(xì)胞江工程各雄稱(chēng)：ａｂ。⑵實(shí)施細(xì)惕胞工程ａ收時(shí)，所需賭的受體細(xì)切胞大多采今用動(dòng)物卵線細(xì)胞的原腎因是：香。⑶多莉捎面部的羅毛色是，判斷故依據(jù)是：。⑷繼植物航組織培養(yǎng)趙之后，克蔑隆綿羊培腹育成功，教證明動(dòng)物當(dāng)細(xì)胞也具茄有。⑸請(qǐng)舉例剛說(shuō)明克隆榨綿羊培育票成功的實(shí)爺際意義：。2.世界上第繞一只克隆范綿羊“多你莉”的培分育等程序霧如圖所示解。請(qǐng)仔細(xì)姻看圖后回丙答問(wèn)題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生核移植胚胎移植卵細(xì)胞體胸積大，易翅于操作，趙卵細(xì)胞中鉗有啟動(dòng)核求基因表達(dá)懸的物質(zhì)白色多利的核貿(mào)基因全部先來(lái)自白面葉綿陽(yáng)全能性保存瀕危塊物種，繁倉(cāng)殖優(yōu)良品位種，醫(yī)學(xué)涼上克隆器周官3.科學(xué)家用泛小鼠骨髓鞋癌細(xì)胞與朝某種細(xì)胞捎融合，得窗到雜交細(xì)可胞，經(jīng)培心養(yǎng)可產(chǎn)生館大量的單示克隆抗體古，與骨髓檢癌細(xì)胞融惕合的是A.經(jīng)過(guò)免梢疫的B淋巴細(xì)插胞B.不經(jīng)過(guò)皺免疫的T淋巴細(xì)蘇胞C.經(jīng)過(guò)免疫襯的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過(guò)裳免疫的B淋巴細(xì)散胞A4.科學(xué)家將廊雌黑鼠乳爭(zhēng)腺細(xì)胞的挖細(xì)胞核移主入白鼠去礦核的卵細(xì)振胞內(nèi)，待禾發(fā)育成早挨期胚胎后阿移植入褐變鼠的子宮諸，該褐鼠故產(chǎn)下小鼠急的體色和誤性別分別灑是A.黑、雌B.褐、雌C.白、雄D.黑、雄A5.將小鼠骨槍髓瘤細(xì)胞恢與一種B淋巴細(xì)企胞融合藥，可使拴融合的誓細(xì)胞經(jīng)度培養(yǎng)產(chǎn)蘇生單克餓隆抗體敬，其依凍據(jù)是A.B淋巴細(xì)胞土可以產(chǎn)生涌抗體，但群不能無(wú)限蘿增殖B.B淋巴細(xì)胞拉只有與骨交髓瘤細(xì)胞動(dòng)融合后才軌能產(chǎn)生抗槍體C.骨髓瘤細(xì)憲胞可以無(wú)艇限增殖，極但不能產(chǎn)謊生抗體D.骨髓瘤邊細(xì)胞可濕以產(chǎn)生化抗體，慎但不能枝增殖（多選）ACC4．單克隆欠抗體是指A、單個(gè)瞇骨髓瘤頭細(xì)胞增果殖產(chǎn)生寨的抗體B、單個(gè)B淋巴細(xì)胞到增殖產(chǎn)生陜的抗體C、單個(gè)雜鞏交瘤細(xì)胞諷增殖產(chǎn)生炕的抗體D、單個(gè)套抗體通對(duì)過(guò)克隆筐化，產(chǎn)剖生大量種抗體5.下列哪五一項(xiàng)屬砍于克隆幟？A.將雞的某福個(gè)DNA片段整狗合到小敢鼠的DNA分子中B.將抗藥撒菌的某盾基因引智人草履遷蟲(chóng)的細(xì)吳胞內(nèi)C.將鼠骨髓怎瘤細(xì)胞與宅經(jīng)過(guò)免疫蔽的脾細(xì)胞斜融合成雜邊交瘤細(xì)胞D.將某腫防瘤細(xì)胞嘴在體外名培養(yǎng)繁若殖成一岔個(gè)細(xì)胞否系D6.一只羊的枕卵細(xì)胞核也被另一只機(jī)羊的體細(xì)摘胞核置換樓后，這個(gè)罰卵細(xì)胞經(jīng)促過(guò)多次分渠裂，再植財(cái)入第三只頓羊的子宮底內(nèi)發(fā)育，悔結(jié)果產(chǎn)下秀一只羊羔辰。這種克領(lǐng)隆技術(shù)具辮有多種用厚途，但是糕不能A．有選擇毀地繁殖某笛一性別的遇家畜B.繁殖家畜啊中的優(yōu)秀魄個(gè)體C．用于保明存物種D.改變動(dòng)物嘆的基因型D7.在動(dòng)物細(xì)參胞融合和駛植物體細(xì)夠胞雜交的護(hù)比較中，悟正確的是屠（觸）A.結(jié)果是相托同的B.雜種細(xì)攤胞的形蹲成過(guò)程六基本相納同C.操作過(guò)程到中酶的作船用相同D.誘導(dǎo)融合雁手段的手視段相同B8.已知細(xì)胞睛合成DNA有D和S兩條途溪徑，其臺(tái)中D途徑能橫被氨基面嘌呤阻鏡斷。人淋巴唉細(xì)胞中晴有這兩監(jiān)種DNA的合成途皇徑，但一法般DNA不分裂增詞殖。鼠骨者髓瘤細(xì)胞葛中盡管沒(méi)蝦有S途徑，慌但能不億斷分裂桌增殖，厚將這兩叫種細(xì)胞放在試管奶中混合殘，加聚執(zhí)乙二醇媽促融，鳴獲得雜位種細(xì)胞質(zhì)。請(qǐng)回耳答：⑴試管中脹除融合你的雜種菜細(xì)胞外幼，還有種融合祖細(xì)胞2⑵設(shè)計(jì)一方作法（不考態(tài)慮機(jī)械方桑法），從漏培養(yǎng)液中旦分離出雜擴(kuò)種細(xì)胞，畏并說(shuō)原理廊。培養(yǎng)液驕中加入寸氨基嘌食呤，收姓集增殖異的細(xì)胞零。加入氨基裂嘌呤后，執(zhí)使D合成途徑釘阻斷，僅掏有D合成途擁徑的骨寒髓瘤細(xì)屑胞及其鑰彼此融率合的細(xì)血胞就不承能增殖曾，但人結(jié)淋巴細(xì)改胞和骨恒髓瘤細(xì)創(chuàng)胞融合甚后的雜筐種細(xì)胞折因?yàn)榭赡Ｒ岳瞄_(kāi)淋巴細(xì)稼胞中的S途徑合迅成DNA而增殖面。制備單介克隆抗廉體1、常規(guī)抗獵體獲得的爽方法及其駐特點(diǎn)2、單克隆局抗體制備宇的原理◆利用產(chǎn)生特它異性抗濾體的功聾能。◆利用無(wú)限增殖好的特性?！衾眉夹g(shù)將榜兩種細(xì)多胞融合瀉獲得雜交瘤細(xì)辭胞?！衾眉夹g(shù)大量勝培養(yǎng)雜交悉瘤細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)員胞動(dòng)物細(xì)胞典融合動(dòng)物細(xì)胞挨培養(yǎng)3、單克隆抗橫體的制備4、單克隆思抗體的應(yīng)兆用（1）融合雪后的雜永種細(xì)胞曲容易成匙活嗎？（2）制備濱單克隆食抗體的稠過(guò)程應(yīng)圖用了哪攀些細(xì)胞腹工程技森術(shù)手段袖？（3）在整個(gè)桑制備的摸過(guò)程中啟要經(jīng)過(guò)嫩幾次篩吩選？思考：細(xì)胞的溫同源性谷越近，患融合形方成的雜突種細(xì)胞升越易成丸活細(xì)胞融合翻技術(shù)、細(xì)戴胞培養(yǎng)技頌術(shù)Ⅰ.篩選得到伏雜交瘤細(xì)鈔胞，Ⅱ.篩選先般在多孔墾培養(yǎng)板揉上，在抓每孔只念有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞下培養(yǎng)篩辨選出特異呆抗體的細(xì)書(shū)胞群⑷怎樣篩稼選出B淋巴細(xì)往胞和骨帳髓瘤細(xì)拳胞間融妙合所形鏟成的能輸產(chǎn)生特碧定抗體番的雜交腔瘤細(xì)胞機(jī)？用抗體娃檢測(cè)和慈克隆化煎培養(yǎng)得勾到能分族泌所需毅抗體的抖雜種細(xì)伶胞——專(zhuān)一抗體精檢測(cè)。18.如何利用挪雜交瘤細(xì)寸胞來(lái)大量廊生產(chǎn)單克院隆抗體？①將雜交稿瘤細(xì)胞在體外大規(guī)旨模培養(yǎng)，從細(xì)遼胞培養(yǎng)搶液中就頁(yè)能提取唉大量的群?jiǎn)慰寺∪f(wàn)抗體；②把雜交枝瘤細(xì)胞注凍射到小鼠腹捷腔內(nèi)增絞殖，再?gòu)膫?cè)小鼠腹頑腔中提量取單克谷隆抗體師。⑸如何進(jìn)行花雜交瘤細(xì)染胞的抗體鹽檢測(cè)及克孝隆化培養(yǎng)魚(yú)？融合后爪的細(xì)胞努經(jīng)選擇宮性培養(yǎng)土基培養(yǎng)面后，能地存活的轟細(xì)胞就睡是雜交蘋(píng)瘤細(xì)胞蜓。但這賊些雜交蘇瘤細(xì)胞念并非都眉是能分陽(yáng)泌所需郊抗體的蛙細(xì)胞，艘通常用篩“有限輸稀釋法覆”來(lái)選泊擇。將雜交瘤細(xì)細(xì)胞稀釋拜，用多孔濾細(xì)胞培養(yǎng)壘板培養(yǎng)，堅(jiān)使每孔細(xì)紀(jì)胞不超過(guò)幻玉一個(gè)，通煉過(guò)培養(yǎng)讓損其增殖。血然后檢測(cè)謙各孔上清濁液中細(xì)胞亦分泌的抗醫(yī)體（常用掛酶聯(lián)免疫滿吸附試驗(yàn)茶法），那掃些上清液且可與特定倉(cāng)抗原結(jié)合驗(yàn)的培養(yǎng)孔散為陽(yáng)性孔段。陽(yáng)性孔中進(jìn)的細(xì)胞還楚不能保證棚是來(lái)自單記個(gè)細(xì)胞，寄挑選陽(yáng)性哈孔的細(xì)胞緣瑞繼續(xù)進(jìn)行搬有限稀釋際，一般需晶進(jìn)行3～4次，直蝴至確信贏每個(gè)孔塑中增殖自的細(xì)胞徒為單克倡隆細(xì)胞忽。該過(guò)廉程即為典雜交瘤揉細(xì)胞的臥克隆化藏培養(yǎng)。第二次篩筋選的原理反和方法：在實(shí)際免躬疫過(guò)程中弟，由于采鄰用連續(xù)注其射抗原的捎方法，且腥一種抗原唱決定簇刺戲激機(jī)體形準(zhǔn)成相對(duì)應(yīng)蛙的一種效串應(yīng)B淋巴細(xì)若胞，因抗此，從冠小鼠脾據(jù)臟中取蜂出的效嘩應(yīng)B淋巴細(xì)胞倆的特異性短是不同的象，經(jīng)HAT培養(yǎng)液轎篩選的底雜交瘤華細(xì)胞特冊(cè)異性也溝存在差掙異，所牽以必須管從雜交涌瘤細(xì)胞頌群中篩偽選出能?chē)槷a(chǎn)生針促對(duì)某一拋預(yù)定抗鑰原快定約簇的特挎異性雜諷交瘤細(xì)右胞。通常采用鼻有限稀釋包克隆細(xì)胞弱的方法，閃將雜交瘤球細(xì)胞多倍奮稀釋?zhuān)游卜N在多孔惜的細(xì)胞培粥養(yǎng)板上，麗使每一孔袋含一個(gè)或夏幾個(gè)雜交僚瘤細(xì)胞（很理論上30%的孔中細(xì)介胞數(shù)為0時(shí)，才癢能保證嫩有些孔據(jù)中是單肢個(gè)細(xì)胞謠），再義由這些品單細(xì)胞孕克隆生郵長(zhǎng)，最共終選出媽分泌預(yù)括定特異秤抗體的造雜交細(xì)妨胞株進(jìn)繭行擴(kuò)大乞培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)紹程要解疏決的問(wèn)斑題：1、如何青使機(jī)體港產(chǎn)生能幅分泌抗圍體的B淋巴細(xì)驚胞？2、從實(shí)驗(yàn)京動(dòng)物的什識(shí)么部位提捐取B淋巴細(xì)胞跑？3、機(jī)體內(nèi)袋什么細(xì)胞需能無(wú)限增云殖？3、用什么邪方法誘導(dǎo)駁細(xì)胞融合禁？4、雜交羅瘤細(xì)胞墳有幾種晉類(lèi)型？溜制備單爐克隆抗杠體需要鞭哪種類(lèi)住型？5、如何志篩選雜上交瘤細(xì)宿胞？根據(jù)下檔面植物擇體細(xì)胞底雜交技潑術(shù)流程獻(xiàn)圖回答社相關(guān)問(wèn)退題：（1）若運(yùn)用設(shè)傳統(tǒng)有性葵雜交（即拉用番茄、售馬鈴薯雜衣交）能否雀得到雜種厭植株？為陣什么？___疾___慢___聞___笛___藏___濟(jì)___媽___砍___晚___諒______黨___青___戲___畢___煙___注___污___泥___螺___形___郵