坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第1頁目標(biāo)和原理蛙類一些基礎(chǔ)生命活動(dòng)和生理功效與哺乳類動(dòng)物有相同之處，而且其離體組織生活條件比較簡(jiǎn)單，易于控制和掌握，起源也較豐富，由此在生理學(xué)試驗(yàn)，尤其是細(xì)胞生理學(xué)一些試驗(yàn)中，常見蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)原來觀察神經(jīng)肌肉興奮性、刺激與反應(yīng)規(guī)律及肌肉收縮特點(diǎn)等。制備含有正常興奮收縮功效蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本是生理學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)操作技術(shù)之一。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第2頁材料牛蛙；蛙板、金屬探針、粗剪刀、細(xì)剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、瓷碗、鋅銅弓、任氏液。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第3頁步驟1．毀腦脊髓取牛蛙一只，用左手握住，以示指壓其頭部前端使其盡可能前俯，右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入，抵達(dá)椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側(cè)不停攪動(dòng)，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側(cè)，捻動(dòng)探針使逐步刺入整個(gè)椎管內(nèi)，搗毀脊髓。此時(shí)牛蛙下頜呼吸運(yùn)動(dòng)應(yīng)消失，四肢松軟，即成為一毀腦脊髓牛蛙）。不然須按上法再行搗毀。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第4頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第5頁2．剪除軀干上部及內(nèi)臟用粗剪刀在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍脊柱，右手將粗剪刀沿兩側(cè)（避開坐骨神經(jīng)）剪開腹壁。此時(shí)軀干上部及內(nèi)臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內(nèi)臟組織，棄于垃圾袋中。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第6頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第7頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第8頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第9頁3．剝皮避開神經(jīng)，用左手持圓頭鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時(shí)，如阻力較大，可先剝下一側(cè)，再剝另一側(cè)。將全部皮膚剝除后，將標(biāo)本置于盛有任氏液培養(yǎng)皿中。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第10頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第11頁4、分離兩腿：避開坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側(cè)剪去骶骨，然后沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開（為確保兩側(cè)坐骨神經(jīng)完整，應(yīng)防止剪時(shí)偏向一側(cè)）。將已分離標(biāo)本浸入盛有任氏液培養(yǎng)皿中。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第12頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第13頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第14頁5、游離坐骨神經(jīng)：取腿一條，先用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后用大頭針將標(biāo)本背位固定于潔凈蛙板上。再用玻璃分針循股二頭肌和半膜肌之間坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿個(gè)別，直至分離至腘窩脛神經(jīng)分叉處。然后剪斷股二頭肌腱、半腱肌和半膜肌肌腱，并繞至前方剪斷股四頭肌腱。自上向下剪斷全部坐骨神經(jīng)分支。將連著3～4節(jié)椎骨坐骨神經(jīng)分離出來。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第15頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第16頁6、完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本：將已游離坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關(guān)節(jié)周圍向上剪除并刮凈全部大腿肌肉，在距膝關(guān)節(jié)約1cm處剪斷股骨。棄去上段股骨，保留個(gè)別即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第17頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第18頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第19頁試驗(yàn)二

骨骼肌收縮特征和收縮形式觀察坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第20頁【試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)】

1．觀察不一樣刺激強(qiáng)度對(duì)肌肉收縮影響；了解閾刺激、閾上刺激和最大刺激概念；了解收縮張力對(duì)刺激強(qiáng)度曲線形成機(jī)理。

2．觀察不一樣刺激頻率對(duì)肌肉收縮影響，了解強(qiáng)直收縮機(jī)理。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第21頁【試驗(yàn)原理－1】一條坐骨神經(jīng)干是由許多興奮性不一樣神經(jīng)纖維所組成。保持足夠刺激時(shí)間不變，剛能引發(fā)其中興奮性較高神經(jīng)纖維產(chǎn)生興奮，表現(xiàn)為受這些神經(jīng)纖維支配肌纖維發(fā)生收縮，此時(shí)刺激強(qiáng)度即為這些神經(jīng)纖維閾強(qiáng)度，含有此強(qiáng)度刺激叫閾刺激。伴隨刺激強(qiáng)度不停增加，有較多神經(jīng)纖維興奮，肌肉收縮反應(yīng)也對(duì)應(yīng)逐步增大，強(qiáng)度超出閾值刺激叫閾上刺激。當(dāng)閾上刺激強(qiáng)度增大到某一值時(shí)，神經(jīng)中全部纖維均產(chǎn)生興奮，此時(shí)肌肉做最大收縮。再繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，肌肉收縮反應(yīng)不再繼續(xù)增大。將引發(fā)肌肉最大收縮最小刺激強(qiáng)度稱為最適刺激強(qiáng)度。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第22頁【試驗(yàn)原理－2】刺激頻率較低，每次刺激時(shí)間間隔超出肌肉單次收縮連續(xù)時(shí)間，則肌肉反應(yīng)表現(xiàn)為一連串單收縮。若刺激頻率逐步增加，刺激間隔逐步縮短，肌肉收縮反應(yīng)能夠融合，肌肉開始表現(xiàn)為不完全強(qiáng)直收縮，以后成為完全強(qiáng)直收縮。

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第23頁【試驗(yàn)對(duì)象】牛蛙

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第24頁【試驗(yàn)器材】

蛙類解剖手術(shù)器械、蛙板、任氏液、鐵支架、微調(diào)固定器、張力換能器、計(jì)算機(jī)、生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第25頁【方法和步驟】

1．制備在體坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本

2．試驗(yàn)裝置（如圖）

3．儀器設(shè)置

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第26頁

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第27頁（1）不一樣刺激強(qiáng)度對(duì)腓腸肌收縮影響逐步增大刺激強(qiáng)度，找出剛能引發(fā)肌肉出現(xiàn)微小收縮刺激強(qiáng)度（閾強(qiáng)度）。繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，觀察肌肉收縮反應(yīng)是否也對(duì)應(yīng)增大。繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，直至肌肉收縮曲線不能繼續(xù)升高為止。找出剛能引發(fā)肌肉出現(xiàn)最大收縮最小刺激強(qiáng)度，即最適刺激強(qiáng)度。坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第28頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第29頁選取最大刺激強(qiáng)度刺激，使刺激頻率按1Hz、2Hz、4Hz、6Hz、8Hz、12Hz、16Hz逐步增加，分別統(tǒng)計(jì)不一樣頻率時(shí)肌肉收縮曲線，觀察不一樣頻率刺激時(shí)肌肉收縮（曲線）改變，從而引導(dǎo)出單收縮、不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮。（2）不一樣刺激頻率對(duì)腓腸肌收縮影響

坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第30頁坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第31頁1．統(tǒng)計(jì)下不一樣刺激強(qiáng)度值對(duì)肌肉收縮幅度值，繪制不一樣刺激強(qiáng)度與腓腸肌收縮張力關(guān)系曲線。

2．分別統(tǒng)計(jì)下引發(fā)肌肉單收縮，不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮時(shí)刺激頻率和收縮幅度（張力）。試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備第32頁注意事項(xiàng)

1．在制備離體神經(jīng)肌肉標(biāo)本以及試驗(yàn)操作過程中，要適時(shí)滴加任氏液，以防標(biāo)本干燥而喪失正常生理活性。