中藥活性成分的研究有效成分的結(jié)構(gòu)測定

中藥活性成分的研究

-有效成分的結(jié)構(gòu)測定中藥化學技術

（一）純度檢驗

檢查純度的方法：外觀、顏色、形態(tài)是否均一。測定各種物理常數(shù)，如熔點、沸點、比旋光度、折光率等.如果可能是已知物，用已知結(jié)構(gòu)的對照品進行對照測定或測定它們的共熔點等。薄層色譜、紙色譜（三種展開系統(tǒng)均呈單一斑點）氣相色譜、高效液相色譜。（二）結(jié)構(gòu)研究的主要程序?qū)ξ粗烊换衔锏慕Y(jié)構(gòu)研究程序初步推斷化合物類型1.注意觀察試樣在提取分離過程中的行為。2.測定有關理化常數(shù)、如不同pH、不同溶劑中的溶解度及色譜行為、灼燒試驗、化學定性反應等。3.結(jié)合文獻調(diào)研。步驟具體方法步驟方法分子式測定可采用以下方法（1）元素定量分析配合分子量測定；（2）同為豐度比較法；（3）HR-MS。計算不飽和度（1）官能團定性及定量分析（2測定并解析化合物的有關光譜學數(shù)據(jù)，如UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR。）結(jié)合文獻調(diào)研（1）綜合分析光譜學數(shù)據(jù)及官能團定性、定量分析結(jié)果。（2）與已知化合物進行比較或化學溝通（化學降解、衍生物制備或人工合成）。測定分子式，計算不飽和度確定分子中含有的官能團、結(jié)構(gòu)片段、基本骨架常用方法（1）測定CD或ORD譜。（2）測定NOE譜或2D-NMR譜。（3）進行X射線衍射分析。（4）進行人工合成。推斷并確定分子的主體結(jié)構(gòu)（構(gòu)型、構(gòu)象）步驟方法（三）結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法1、確定分子式，計算不飽和度①分子量測定有機化合物的元素大多由C、H、O、N等組成，對組成元素的種類和比例的分析，可以通過元素分析的方法確定。分子量的測定方法目前最常用的是質(zhì)譜法。②同位素豐度比法有機化合物的主要元素均由相對豐度比一定的同位素組成，且質(zhì)量相差1～2。③高分辨質(zhì)譜法（HR-MS）可將物質(zhì)的質(zhì)量精確測定到小數(shù)點后3位，通過比較精確質(zhì)量可區(qū)分分子量相同的不同化合物。

1、質(zhì)譜①作用：用于確定分子量；求算分子式。

提供結(jié)構(gòu)信息，推測未知物結(jié)構(gòu)。②特點：

應用范圍廣，進行同位素及化合物分析。分析速度快，可與色譜聯(lián)用。靈敏度高，樣品用量少（只需5-10g）（四）常用的幾種波譜簡介③常用質(zhì)譜技術及特點電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）：樣品氣化后，氣態(tài)分子受一定能量的電子沖擊，使分子電離或裂解產(chǎn)生各種陽離子。場解析質(zhì)譜（FD-MS）：試樣稀液涂于鎢絲上作陽極，對面加陰極，通高壓，使電離。特點：1、樣品需加熱氣化，離子化，得到M+2、難氣化、易熱解的成份測不到M+，如糖、苷、氨基酸、肽、蛋白、核酸、抗生素等。特點：1、難氣化、易熱解的成份，可得到

2、分子離子相關峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+3、逐個脫去糖基的碎片峰：[M＋H-162]+、[M＋H-162-146]+4、苷元的碎片離子相對少快速原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）：離子槍發(fā)射高能離子與另一中性粒子碰撞，交換電荷，形成高速中性粒子，與樣品碰撞，使其電離。電噴霧質(zhì)譜（ESI-MS）：強靜電場使試樣電離特點：1、難氣化、易熱解的成分，可得到

2、分子離子相關峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+3、可得到苷元的碎片特點：1、難氣化、易熱解、大分子、小分子，均可得到

2、分子離子相關峰：[M＋H]+、[M＋Na]+、[M＋K]+

2、紅外光譜（IR）原理：分子吸收紅外線后引起化學鍵的振動或轉(zhuǎn)動能級躍遷而形成的吸收譜圖（4000～625cm-1）作用：特征頻率區(qū)（functionalgroupregion）

4000～1500cm-1————確定官能團類型指紋區(qū)（fingerprintregion）

1500～600cm-1————構(gòu)象、構(gòu)型、取代模式等表：紅外光譜的九個重要區(qū)段序號峰位對應主要基團１3750～3000cm-1-OH,-NH２3300～3000cm-1≡CH,=CH,Ar-H３3000～2700cm-1飽和CH,-CHO４2400～2100cm-1-C≡C,-C≡N５1900～1650cm-1C=O６1675～1500cm-1C=C,C=N７1475～1300cm-1CH８1300～1000cm-1C-O(酚、醇、醚）９1000～650cm-1=CH3、紫外-可見吸收光譜電子由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)（、n）在紫外可見光區(qū)引起的吸收譜圖測定范圍：200～700nm之間作用：對含有共軛雙鍵、α,β-不飽和羰基、芳香化合物的結(jié)構(gòu)鑒定有重要價值特定的吸收譜特征——骨架類型的判斷如：黃酮、香豆素、蒽醌加診斷試劑前后譜圖的規(guī)律性變化——取代情況的推斷如：黃酮、香豆素生色團：產(chǎn)生紫外吸收的不飽和基團，如C=C，C=O，O=N=O等；助色團：其本身是飽和基團（常含有雜原子），它連到生色團上時，能使后者吸收波長變長或吸收強度增加，如-OH，-NH2，-Cl等；紅移（redshift）：由于基團取代或溶劑效應，最大吸收波長變長。藍移（blueshift）：由于基團取代或溶劑效應，最大吸收波長變短。4、核磁共振譜1H－NMR測定中通過化學位移（δ）、譜線的積分面積以及裂分情況（重峰數(shù)及偶合常數(shù)Ｊ）可以提供分子中的1H的類型、數(shù)目及相鄰原子或原子團的信息。

（1）化學位移（chemicalshiftδ）：1H核因周圍化學環(huán)境不同，其外圍電子密度以及繞核旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的磁屏蔽效應也不同。不同類型的1H核磁共振信號將出現(xiàn)在不同的區(qū)域，據(jù)此可以進行識別。化學位移范圍：在0～10ppm。⑴.氫核磁共振(1H-NMR)

具有磁距的原子核在高強度磁場作用下，可吸收適宜頻率的電磁輻射，而不同分子中原子核的化學環(huán)境不同，將會有不同的共振頻率，產(chǎn)生不同的共振譜。

（2）峰面積：因為1H－NMR譜上積分面積與分子中的總質(zhì)子數(shù)相當，當分子式已知時，就可以算出每個信號所相當?shù)?H數(shù)，積分值與氫的數(shù)目成正比。如乙醇的氫譜中CH3與CH2的譜峰積分值基本等與3:2。

（3）信號的裂分及偶合常數(shù)Ｊ：已知磁不等同的兩個或兩組1H核在一定距離內(nèi)會因相互自旋偶合干擾而使信號發(fā)生分裂，表現(xiàn)不同裂分，如：s,d,t,q,m等。裂分間的距離為偶合常數(shù)（J，Hz）用以表示相互干擾的強度，其大小取決于間隔鍵的距離。

與氫譜一樣，核磁共振碳譜也是采用相對值來表示化學位移，通常使用四甲基硅烷（TMS）作為13C化學位移的零點。有機化合物的13C共振化學位移范圍是0～200ppm，碳譜的化學位移范圍較氫譜廣得多，能夠提供更多的信息。⑵.核磁共振碳譜

13C－信號的化學位移：脂肪碳：小于50連雜原子碳（C-O，C-