南寧無創(chuàng)產(chǎn)前檢測(NIPT)會(huì)議課件 NIPT質(zhì)量控制技術(shù)審核

NIPT的室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)、性能驗(yàn)證保持和改善、技術(shù)能力審核周向陽廣西壯族自治區(qū)臨床檢驗(yàn)中心室內(nèi)質(zhì)控檢測的重復(fù)性，反映重復(fù)性的指標(biāo)目前需要探討（陰陽符合是起碼）明確結(jié)果的樣本監(jiān)控同批檢測全過程，提供同批檢測的把握度（需要合理的問題檢出能力）。實(shí)驗(yàn)測定是否有效，報(bào)告能否發(fā)出的參考。陰陽性對(duì)照并不完全等同于室內(nèi)質(zhì)控其他手段的質(zhì)量保證措施也是室內(nèi)質(zhì)控技術(shù)細(xì)節(jié)

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境是好的：溫濕度、可能存在的干擾（分區(qū)、灰塵、電磁、振動(dòng)等）

儀器設(shè)備狀態(tài)是好的：維護(hù)保養(yǎng)、定期校準(zhǔn)

試劑是好的：性能驗(yàn)證、質(zhì)檢

實(shí)驗(yàn)室人員是有能力的：培訓(xùn)和授權(quán)問題

SOP：實(shí)驗(yàn)室最優(yōu)操作的固化（仍需要持續(xù)改進(jìn)），遵守SOP

過程監(jiān)控：關(guān)鍵質(zhì)控和室內(nèi)質(zhì)控

不確定樣本的進(jìn)一步分析處理：增加檢測的把握度

疑難檢驗(yàn)案例的處理

針對(duì)差錯(cuò)、失控等分析原因采取措施的質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)血漿游離DNA提取生物信息分析樣本收集文庫構(gòu)建上機(jī)測序形成報(bào)告高效富集胎兒來源的游離DNA，提高胎兒濃度外周血采集和運(yùn)輸規(guī)范優(yōu)化的接頭序列，提高連接效率測序質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)質(zhì)控報(bào)告質(zhì)控樣本接收規(guī)范樣本數(shù)量樣本狀態(tài)運(yùn)輸時(shí)間樣本儲(chǔ)存檢測安排及時(shí)性檢測方法準(zhǔn)確提取數(shù)量雙重質(zhì)控；陰性質(zhì)控品陽性質(zhì)控品數(shù)據(jù)質(zhì)量數(shù)據(jù)產(chǎn)量儀器狀態(tài)下機(jī)數(shù)據(jù)發(fā)放數(shù)量報(bào)告到達(dá)率提取質(zhì)量參考依據(jù)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室—質(zhì)量和能力的專用要求》(ISO15189)《NGS臨檢實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)方針》

美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)(ACMG)《NGS臨檢標(biāo)準(zhǔn)化體系》

美國疾病控制與預(yù)防中心(CDC)《孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范》《測序技術(shù)的個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測應(yīng)用技術(shù)指南》《國家衛(wèi)生計(jì)生委對(duì)高通量測序試點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的要求》從NIPT標(biāo)本采集、運(yùn)送、到cf-DNA提取，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注哪些技術(shù)細(xì)節(jié)？檢測全過程中，NIPT檢測假陰性的原因有哪些？道理是什么？NIPT生物信息學(xué)分析中的重要質(zhì)量關(guān)注點(diǎn)？NIPT檢測到底會(huì)不會(huì)基因污染？若污染只導(dǎo)致假陽性嗎？綜合性實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)或改造生化

病理

分子

傳染病

。。。。。。

控制污染和交叉污

各區(qū)獨(dú)立

注意通風(fēng)

方便工作

科研不影響臨床室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（ExternalQualityAssessment，EQA）EQA是外部質(zhì)量工具，其實(shí)質(zhì)是與眾多同行比對(duì)。實(shí)驗(yàn)室能力水平的綜合反映，實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)問題和改進(jìn)的機(jī)會(huì)。有時(shí)也反映某一檢測系統(tǒng)的不足，便于廠家改進(jìn)。室間質(zhì)評(píng)體系需要共同完善其科學(xué)性、公正性、有效性。不僅限于標(biāo)本檢測，還可以評(píng)估分析系統(tǒng)。NIPT檢測體系的性能NIPT檢測系統(tǒng)的性能是否優(yōu)良既是各研發(fā)公司也是檢測實(shí)驗(yàn)室的共同關(guān)注和追求。如何知道一個(gè)NIPT檢測系統(tǒng)性能是否優(yōu)良呢？公司評(píng)估的性能不等同于在某一具體實(shí)驗(yàn)室表現(xiàn)的性能。人員設(shè)備培訓(xùn)、考核、操作習(xí)慣、操作手法等儀器狀態(tài)、檢定校準(zhǔn)、維護(hù)保養(yǎng)性能確認(rèn)環(huán)境試劑溫度、濕度、污染物、氣壓等運(yùn)輸條件、保存狀態(tài)方法SOP、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)?如何在現(xiàn)有技術(shù)水平上進(jìn)一步提高檢出，改善檢出特異性是公司研發(fā)的任務(wù)?達(dá)到所用的具體系統(tǒng)的應(yīng)有性能是實(shí)驗(yàn)室的事。否則系統(tǒng)待優(yōu)化。所有的指標(biāo)都要做性能驗(yàn)證嗎？NIPT檢測試劑性能驗(yàn)證

重復(fù)性:最基礎(chǔ)。三次以上，陰陽性符合。其他指標(biāo)（如Z值、胎兒濃度、數(shù)據(jù)量、T-score分布圖等）一致，作為參考。有一定挑戰(zhàn)性的標(biāo)本更好（但要注意待測物的穩(wěn)定）。

準(zhǔn)確性:參考品檢測、室間質(zhì)評(píng)、與金標(biāo)準(zhǔn)（染色體核型分析）方法比。與權(quán)威實(shí)驗(yàn)室交換樣本檢測。包括陰陽性和挑戰(zhàn)性標(biāo)本。

檢出限:系統(tǒng)聲明性能可檢出的低胎兒濃度樣本或參考品。

干擾:溶血、脂血、黃疸等樣本。

生物信息分析系統(tǒng)的驗(yàn)證。要驗(yàn)證多少例呢？初步驗(yàn)證和持續(xù)性能監(jiān)控與回顧分析NIPT的性能驗(yàn)證指標(biāo)7:抗干擾能力驗(yàn)證方案：選擇本實(shí)驗(yàn)室已檢測并已知核型的樣品，取5例樣品，覆蓋陽性（包含T21、T18和T13）及陰性樣品，將每例樣品平均分成4份例，形成4組：第1組加一定量的陰性溶血樣品使血紅蛋白最終濃度達(dá)到0.3mg/ml；第2組加一定量的陰性高膽紅素樣品使膽紅素最終濃度達(dá)到2.5μmol/ml；第3組加一定量的陰性高脂血樣品使甘油三酯最終濃度達(dá)到4mg/ml；第4組不作處理作為對(duì)照驗(yàn)證通過標(biāo)準(zhǔn)：每組符合率為100%為抗干擾能力驗(yàn)證通過NIPT的質(zhì)量控制指標(biāo)《孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范》國衛(wèi)辦婦幼發(fā)（2016）45號(hào)本規(guī)范主要包括開展孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)的基本要求、適用范圍、臨床服務(wù)流程、檢測技術(shù)流程以及質(zhì)量控制指標(biāo)等內(nèi)容。關(guān)鍵點(diǎn)：?

停止試點(diǎn)工作，將NIPT納入常態(tài)化管理；?

建立以產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)為核心，以產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)為采血點(diǎn)，以具備能力的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所和其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)為技術(shù)支撐的技術(shù)服務(wù)網(wǎng)絡(luò)。NIPT技術(shù)能力審核?

新建實(shí)驗(yàn)室：需要臨檢中心審核?

有PCR技術(shù)審核合格證的新增NIPT檢測：擴(kuò)項(xiàng)申請(qǐng)—審核—證書上增加NIPT項(xiàng)?

技術(shù)能力審核依據(jù)：

國家衛(wèi)計(jì)委《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和《孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范》。?

審核方式：有能力的專家，現(xiàn)場樣本檢測，現(xiàn)場看場地設(shè)施，現(xiàn)場查看提問人員技術(shù)能力，看適應(yīng)癥掌握，看標(biāo)本質(zhì)控，看過程關(guān)鍵質(zhì)量指標(biāo)，看是否規(guī)范，看細(xì)節(jié)，看報(bào)告，出報(bào)告和報(bào)告審核嚴(yán)不嚴(yán)謹(jǐn)，看疑難問題應(yīng)對(duì)措施和處理能力，看質(zhì)量保證體系靠不靠譜看持續(xù)改進(jìn)體系。充分考慮NIPT的特點(diǎn)，講道理，不教條。一些問題?

不遵守相關(guān)PCR規(guī)范。與其他項(xiàng)目混用（未評(píng)估是否合適）?

溫濕度控制不好；生物安全問題。?

人員培訓(xùn)不足，知識(shí)和技能掌握不足?