動物細(xì)胞融合和單克隆抗體講義

動物細(xì)胞融合和單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體我學(xué)習(xí)我思考我應(yīng)用1970年科學(xué)家用發(fā)綠色熒光的染料標(biāo)記小鼠細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)分子，用發(fā)紅色熒光的染料標(biāo)記人細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)分子，將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合。這兩種細(xì)胞剛?cè)诤蠒r，融合細(xì)胞一半發(fā)綠色熒光，另一半發(fā)紅色熒光，在37*C下經(jīng)40min,兩種顏色的熒光均勻分布。植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞組織培養(yǎng)雜種植株去細(xì)胞壁纖維素酶、果膠酶化學(xué)法物理法動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、誘導(dǎo)方法質(zhì)融合、核融合）融合細(xì)胞動物細(xì)胞融合過程：1.誘導(dǎo)融合的方法：

2.動物細(xì)胞融合的原理：3.動物細(xì)胞融合基本過程是：生物方法：滅活的病毒。

化學(xué)物質(zhì)：如：聚乙二醇

物理方法：離心、振動、電激等

細(xì)胞膜的流動性分散成單個細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合制備單克隆抗體

4.動物細(xì)胞融合最重要的用途是：形成雜交細(xì)胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物體細(xì)胞雜交、動物細(xì)胞融合的比較方法步驟酶解法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，形成雜種細(xì)胞后培養(yǎng)成雜種植株分散成單個細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合二、單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？傳統(tǒng)制備抗體的缺陷：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差。思考：為什么有這些缺陷，B淋巴細(xì)胞有什么特點？B淋巴細(xì)胞特點３．每一個B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體。１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。

由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體

稱為單克隆抗體1、概念:大量生產(chǎn)單克隆抗體思路B淋巴細(xì)胞具產(chǎn)生抗體的功能骨髓瘤細(xì)胞具無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）注射特定抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞幾種類型？骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)克隆上述雜交瘤細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)2、單克隆抗體的制備過程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。

該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點？特異性強，靈敏度高且可大量制備

根據(jù)以下信息，設(shè)計一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細(xì)胞。已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。淋巴細(xì)胞中有這2種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。思考？方法:

將這2種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，然后在培養(yǎng)液中加入氨基喋呤。

由題意可知，細(xì)胞融合后的雜交瘤細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，且可在培養(yǎng)基上無限增殖。在培養(yǎng)基內(nèi)加入氨基喋呤，骨髓瘤細(xì)胞由于只有D途徑合成DNA，無法增殖，將其去除，剩下淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)，由于淋巴細(xì)胞不能無限增殖，培養(yǎng)一段時間后，自然去除，只剩下雜交瘤細(xì)胞，正是我們想得到的結(jié)果。

原理分析：3.單克隆抗體的應(yīng)用：

①作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合

優(yōu)點：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速②用于運載藥物：制成“生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）

A．經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B．不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞C．經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D．不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞A2、用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞