動物實驗基本操作

最新版--動物實驗基本操作動物實驗基本操作一（固定、性別判定、標識）【實驗目的】在做動物試驗時，為確保給藥、實驗順利進行，防止被動物咬傷、準確辨別動物性別、準確標識動物，要學會用正確方法捉拿實驗動物、掌握辨別動物性別的方法以及掌握標識動物的方法?！緦嶒瀸ο蟆縎D大鼠，KM小鼠，雌雄各半，體重180-250g。【實驗器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細繩、防護手套藥品：苦味酸80%~90%酒精飽和溶液、20%烏拉坦【實驗步驟】一、小鼠的捉拿1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時，小鼠前肢緊緊抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夾住小鼠背部皮膚，無名指壓住小鼠尾根部，將其固定于手中。右手可行注射或其它操作。2、固定器固定：尾靜脈注射或給藥時，將小鼠放進固定器中或者大小和重量適當?shù)娜萜鳎ㄈ鐭?，只露出尾巴，該類容器能夠壓住尾部，避免其活動。勿固定過緊造成窒息死亡。進行腹腔手術或心臟采血時，先準備一個15-20cm的方木板，邊緣釘入五顆釘子。將小鼠四肢分別用20-30cm的線繩捆綁，線的另一頭分別綁在方木板的釘子上，并且在頭部上顎切齒牽引一根線繩，也固定在釘子上，達到完全固定。二、大鼠的捉拿

4-5周內的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，則：1、首先戴好防護手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。3、左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三、性別判定小鼠、大鼠性別判定（1）幼鼠外生殖器與肛門間隔短的是♀，外生殖器與肛門間隔長的是♂。（2）成年動物可直接肉眼辨認，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動物有陰道口。四、動物的標記小鼠的短期標記法：苦味酸80%~90%酒精飽和溶液（黃色），標出屬于自己的編號【注意事項】1、實驗人員要有精神準備：掌握方法，膽大心細，做好防護。2、動物興奮的時候不要抓取，待其安靜下來。3、根據(jù)受試動物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定。4、固定時把握好力度，過分用力會使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，若用力過輕頭部能反轉過來咬傷實驗者的手?！舅伎碱}】1.在固定實驗動物時如何才能快、準、穩(wěn)？動物實驗基本操作二（給藥途徑、采血）【實驗目的】在做動物試驗時，為確保給藥、采血實驗順利進行，要掌握根據(jù)不同的情況進行動物給藥以及采血的正確方法?！緦嶒瀸ο蟆縎D大鼠（180-250g），KM小鼠（18-22g），雌雄各半?！緦嶒炂鞑暮退幤贰科鞑模菏蠡\、大小鼠固定器、方木板、長釘、細繩、防護手套,灌胃針，注射器（1ml,5ml）、棉球，剪毛剪、手術剪、手術刀、采血管、彎頭鑷子藥品：生理鹽水、75％酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實驗步驟】給藥途徑1、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃針并已吸好藥物)，將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線，輕輕轉動針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動物掙扎厲害，退出灌胃針，待動物安靜下來，重新插入。灌胃針前端達到膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說明已進入胃內。如不通暢，且動物掙扎厲害，須拔出重新操作。2、皮下注射左手拇指和食指輕輕提起動物皮膚，右手持注射器，將注射針刺入皮下，若針頭容易擺動則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，稍微用手指壓片刻針刺部位，以防藥物外漏。3、肌肉注射選用肌肉發(fā)達，無大血管經(jīng)過的部位，如臀部或股部。（肌肉注射比皮下和腹腔注射用得較少，但當給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，常采用肌肉注射）4、腹腔注射A、左手抓取并固定好動物，將腹部朝上。B、右手持注射器將針頭在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進針3-5mm。C、再使針頭與皮膚呈45°角斜穿過腹肌，當針尖穿過腹肌進入腹腔時，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動，回抽，無回血，無腸液、尿液，便可緩緩推入藥液。5、靜脈注射（尾靜脈注射）A、大、小鼠尾靜脈共有3根(左、中、右)，一般常選用兩側的靜脈。注射前，先把動物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內(可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替).B、拔去尾部靜脈走向的毛，用75％酒精棉球反復擦拭鼠尾，以達到消毒、血管擴張及軟化表皮角質的目的。C、盡量從靜脈的遠心端刺入血管，回一下血，將藥液緩慢注入。D、注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。二、采血1、心臟采血將動物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區(qū)部位的被毛，消毒。在左側第3-4肋間，用左手食指摸到心搏處，右手持注射器選擇心搏最強處穿刺。當針穿刺入心臟時，血液由于心臟搏動的力量自動進入注射器。如不需保留動物存活時，也可麻醉后切開動物胸膛，直接用注射器刺入心臟內采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。2、摘眼球采血用左手抓住動物頸部皮膚，并將動物輕壓在實驗臺上，稍微側臥，左手拇指盡量將動物眼周圍皮膚往眼后壓，使動物眼球突出并充血，用彎頭鑷子迅速摘除眼球，眼眶內很快流出血液。3、眶靜脈叢（竇）采血將動物麻醉，采用側眼向上固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大（?。┦箢i部。取血時，左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血?！咀⒁馐马棥?、掌握方法，膽大心細，做好防護。2、常用灌胃量：小鼠：0.2～1ml,大鼠1～4ml3、摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%的血液量?！舅伎碱}】1.如何熟練掌握大小鼠的給藥途徑和采血方法？ 動物實驗基本操作三（安樂死）【實驗目的】在科學應用和教學實驗中，因實驗終結、研究所需提供血液或其他組織臟器、不適合繁殖或者是當動物的疼痛與窘迫程度超過預期等情況下，需要我們以人道的方式使動物死亡，使動物在最低程度的疼痛、恐懼，并在最短的時間內失去知覺和痛覺?！緦嶒瀸ο蟆縆M小鼠，雌雄各半，體重18-22g?！緦嶒炂鞑暮退幤贰科鞑模菏蠡\、大小鼠固定器、注射器（1ml）、棉球，剪毛剪、手術剪、手術刀、采血管、彎頭鑷子、燒杯100ml、方木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑、75％酒精棉球【實驗步驟】1、頸椎脫臼法用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾（鼠尾根部），用力往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動物立即死亡。醉藥。麻醉效果判定：可以通過觀察動物呼吸平穩(wěn)深慢、角膜反射遲鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來判定是否達到理想的麻醉效果家兔的氣管與動脈插管1、仰臥固定：頭部用一根粗棉線拉住兔的兩只門齒后栓在兔板的鐵柱或固定于鉤上。兩前肢平直放在胸腰部兩側,用粗棉繩的一端縛扎腕關節(jié)以上部位,縛繩從背后左右交叉穿過,壓在對側前肢的前臂上,再緊扎于兔板兩側的木鉤上,兩后肢左右分開,縛繩扎踝關節(jié)以上部位,另一端分別固定于兔板后兩側的木鉤上，如下圖2。氣管插管操作要點用手術刀時，先用手或器械使兩側組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開，不要作刮削的動作。氣管插管術操作要點（）：①頸部正中切開皮膚，鈍性分離暴露氣管、穿線備用。②于氣管中段第三或第四軟骨環(huán)上向頭端作一縱向倒“T”形切口。③將氣管導管由切口向胸部方向插入氣管腔內。④在氣管軟骨環(huán)之間進行結扎，并將棉線固定于插管分叉處。3、動脈插管操作要點①于氣管一側小心分離頸總動脈約3cm穿兩線備用。②遠心端結扎、近心端用動脈夾夾緊。③用眼科剪與血管呈45℃的角度從遠心端開始在向心一側剪開管壁的1/3。④插管前導管和壓力換能器的肝素化。⑤插管后結扎固定。注意事項1、麻醉動物時,注射速度先快后慢,邊注射邊觀察動物麻醉指征。如麻醉過淺,動物掙扎時可適量追加麻醉藥,切忌麻醉過深引起家兔死亡；2、手術過程中操作應輕柔,盡量避免不必要的損傷和出血；3、手術時,切開頸部皮膚后,盡量鈍性分離,以免損傷血管；4、氣管插管前，應注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；5、動脈導管的插入端要光滑，不能過尖，以防刺破動脈壁，引起大出血。6、未扎緊動脈插管前不要松動動脈夾。實驗三、實驗性肺水腫【實驗原理與目的】肺水腫是臨床上常見的危重癥之一，肺水腫是指過多的液體積聚在肺間質或溢入肺泡腔內的病理狀態(tài)。當肺毛細血管流體靜脈壓增高、血漿膠體滲透壓降低，肺微細管壁通透性增高、肺淋巴回流障礙等因素的某個或多個同時或相繼作用，一般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質性肺水腫，然后發(fā)展為肺泡性肺水腫。肺水腫發(fā)生后，可引起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調（如果氣道內存在水腫液，還會引起通氣障礙），最終導致呼吸功能不全。大劑量腎上腺素可引起機體血液重新分布，外周血管廣泛收縮，血液由體循環(huán)急速轉移到肺循環(huán)，使左心房壓力和肺毛細血管有效濾過壓增高，液體流入肺間質增多而出現(xiàn)肺水腫。本實驗的目的是用大劑量腎上腺素復制肺水腫模型，觀察急性肺水腫的表現(xiàn)，分析發(fā)病機理?！緦嶒瀸ο蟆縎D大鼠，雌雄不限，體重180-250g?！緦嶒炂鞑暮退幤贰科鞑模簭椈砂醭?，電子天平，手術器械1套，2ml,5ml注射器，聽診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水，0.1%鹽酸腎上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液(烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用)?！緦嶒灢襟E和觀察指標】1.取180-250g左右體重相近的大鼠兩只，做好標記（甲鼠、乙鼠），稱重，觀察動物的一般情況、呼吸和膚色。2.甲鼠腹腔注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液1.5~2ml；乙鼠腹腔注射同體積生理鹽水。觀察動物變化如活動情況、呼吸、膚色并做肺部聽診肺呼吸音，注意口鼻有無泡沫液體流出。如動物死亡，記錄時間；若注射藥物20min后動物未死亡，可按0.3%戊巴比妥鈉溶液1ml/100g腹腔注射，帶麻醉成功后剪斷動脈快速放血處死。3.解剖尸體，止血鉗夾住氣管后取出心肺，然后將心臟分離（注意不要損