經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)

現(xiàn)代免疫分析技術(shù)

經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)免疫分析技術(shù)的發(fā)展多元免疫技術(shù)免疫沉淀免疫凝集補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)經(jīng)典免疫學(xué)方法化學(xué)發(fā)光膠體金酶免疫免疫熒光放射免疫PCR-免疫分析時(shí)間分辨熒光分析Chapteroutline沉淀反應(yīng)（Precipitation）凝集反應(yīng)（Agglutination）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)概念：沉淀反應(yīng)又稱免疫沉淀反應(yīng)，是指可溶性抗原（如細(xì)菌浸出液、含菌病理浸出液或血清以及其他來源的蛋白質(zhì)、多糖、類脂質(zhì)體等）與相應(yīng)抗體在液相或凝膠中特異性結(jié)合后，形成的免疫復(fù)合物在一定條件下出現(xiàn)的蛋白質(zhì)析出現(xiàn)象。

A.

Precipitation

原理：蛋白質(zhì)表面—極性分子—水膜

適量電解質(zhì)+比例適合的抗原抗體=沉淀

A.

Precipitation

沉淀反應(yīng)的類型溶液中沉淀反應(yīng)凝膠中沉淀反應(yīng)絮凝沉淀試驗(yàn)，環(huán)狀沉淀試驗(yàn)，免疫比濁法，免疫沉淀技術(shù)，免疫共沉淀技術(shù)

單(雙)向免疫擴(kuò)散，免疫電泳，對(duì)流免疫電泳，火箭免疫電泳，交叉免疫電泳，免疫固定電泳，免疫印記技術(shù)1.溶液中的免疫沉淀反應(yīng)Negativetest

PositivetestUsesfineparticlesofantigentodetectantibodyinpatient’sserum.1.1絮凝試驗(yàn)(Flocculation)抗原抗體比例是關(guān)鍵！稀釋法、方陣滴定法。梅毒的檢測(cè)1902年，Ascoli建立。早期用途：獸類內(nèi)臟、皮毛浸液等標(biāo)本中的炭疽桿菌抗原。

1.2環(huán)狀沉淀試驗(yàn)(ringprecipitationtest)抗血清抗原37℃與絮凝實(shí)驗(yàn)相比：減少了反應(yīng)體積；提高了反應(yīng)靈敏度?？捎糜谳^少量的抗原檢測(cè)，如血跡分析、病原昆蟲的流行病學(xué)分析。原理：抗原抗體充分反應(yīng)后，所形成的絮狀或顆?？乖贵w復(fù)合物會(huì)增加反應(yīng)體系的濁度。特點(diǎn)：現(xiàn)代光學(xué)技術(shù)與自動(dòng)分析技術(shù)相結(jié)合，提高了靈敏度和易操作性。分類：透射比濁法、散射比濁法（靈敏度高）

1.3免疫比濁法(Immunoturbidimetry)YYY光線穿透待測(cè)溶液時(shí)，會(huì)受到抗原抗體復(fù)合物的作用而發(fā)生散射，散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量以及散射夾角成正比，因此可以通過測(cè)定散射光強(qiáng)度的變化來推測(cè)抗原抗體反應(yīng)的情況。LightsourceDetector1.反應(yīng)動(dòng)力學(xué)測(cè)定2.快速、敏感、精確度高（ng）3.儀器價(jià)格昂貴、對(duì)抗體要求高散射比濁法(Nephelometry)利用抗原抗體的特異性結(jié)合作用，使靶蛋白（抗原）形成抗原抗體復(fù)合物并最終從溶液中沉淀出來。第一階段改進(jìn)：改變反應(yīng)條件促進(jìn)抗原抗體多聚物形成，使其更加容易沉淀。第二階段改進(jìn)：加入二抗，促進(jìn)更大的抗原抗體網(wǎng)絡(luò)形成。第三階段（20世紀(jì)70年代）改進(jìn)：采用固相載體提高對(duì)靶蛋白的沉淀。細(xì)菌蛋白質(zhì)A，細(xì)菌蛋白質(zhì)G。1.4免疫沉淀法(immunoprecipitation)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是利用抗體將相應(yīng)蛋白沉淀的同時(shí)，與該分子特異性結(jié)合的其他分子同時(shí)被沉淀出來。通過進(jìn)一步與其他技術(shù)結(jié)合，如SDS，Westernblot可以進(jìn)一步對(duì)靶蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。1.5免疫共沉淀法(co-immunoprecipitation)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，保持了蛋白質(zhì)的天然活性；蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響；可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物?？赡軝z測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；如用westernblot檢驗(yàn)，必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇最后檢測(cè)的抗體，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)2.凝膠中的免疫沉淀反應(yīng)2.趟1單向與免疫岡擴(kuò)散(Si棕ng克leIm漁mu聲no蝕di先ff編us殊io次n)凝膠隊(duì)中抗勵(lì)原或激抗體增其中豎之一句保持抄相對(duì)冷靜止冶，通擠過對(duì)農(nóng)應(yīng)的膜抗原析或抗勿體分戰(zhàn)子的按運(yùn)動(dòng)虎而在披合適甘的位是置上然形成要沉淀意?？蓡斡糜诳乖蚩寡w的忌定量散。2.筋2雙向搜免疫慕擴(kuò)散(D角ou萬bl框e挎Im渠mu堪no額di愈ff購us咽io烤n/促Ou精ch悉te姜rl位on劍y全Me巨th贊od彎)Te鍵st答in勤g謠pe猜rf屬or絹me雖d她in圓a選ga壟r自ge嬌l.An偽ti鑒ge膝n丑is皆p許la依ce狂d軟in園o罪ne濾w物el跨l.An臨ti他bo桃dy陵i譜s哄pl腰ac遍e憶in堡o獻(xiàn)th按er殊w飯el狠l.Ea眉ch常d冷if課fu昨se曬s榴th拋ro孤ug哲h荷ge聽l.If簽a哥nt哲ib耗od被y戚is壓s用pe盯ci劫fi檔c惠to股t鉛ha哪t載an駝ti提ge架n,調(diào)a駐p孝re脫ci額pi幅ti吩n編li粥ne之w箭il方l渾fo肌rm坡w戚he什re閘t刺he鴉2投m船ee盞t.Ag01/4Ab1/2Ab1/1Ab1/16Ab1/8Ab2.勿3免疫布電泳(I象mm棉un粉oe她le廣ct瞇ro鬧ph劃or售es蹦is池)瓊脂平板電泳+雙向擴(kuò)散2.勺4火箭瞇免疫奶電泳(R五oc可ke罷t醉im悶mu橫no鋸el猜ec載tr央op險(xiǎn)ho么re冠si稍s)單向擴(kuò)散+水平瓊脂電泳pH條件灰：抗體暴分子待不帶廳電荷鴉，抗原吹分子獨(dú)帶負(fù)測(cè)電荷霞。2.蜂5交叉陪免疫耳電泳(R腥oc翁ke職t墨im表mu塌no臂el嚷ec異tr脹op牛ho液re擦si飄s)雙向板火箭唱電泳農(nóng)（電蠶場(chǎng)方陶向垂雖直的旋兩次濤電泳仍）抗原冬根據(jù)新不同叉遷移液率分例離抗原系抗體拖復(fù)合梨物形表成火灣箭峰2.勢(shì)6免疫熔固定恰電泳(I雖mm棒un跑of色ix復(fù)at惹io運(yùn)n芳El逃ec也tr揀op剝ho熟re巧si桐s)與免襖疫電趨泳原堂理相趟同。電泳緒后直標(biāo)接將拋抗體五加于裕蛋白蓄質(zhì)區(qū)軍帶表罪面，物形成勸的復(fù)段合物芝嵌于璃固相蘿支持百物中黎。洗去功游離州的抗斃原抗習(xí)體后謠，染絞色觀叉察被若固定廉的區(qū)規(guī)帶。An著od遺ePa鐘ti黃en游t罪se哲ru編mCa汪th能od士e(+繡e遲le歸ct館ro船de啊)貝(廈-腔el辨ec悲tr謝od則e)Ap休pl纖ic沿at癢io盯n嗚po鼠in冰tWe凈st等er稀n燥bl溪ot徹ti場(chǎng)ng(I惱m(xù)m糊un腔ob濕lo眨tt議in留g)19撫79，Re鼻ba捆rt磨&T事ow鑼bi肝n--次-筆Id估en死ti猛fi秩ca懼ti塔on勸o漫f沃pr謎ot碑ei疊n腸an柏ti廊ge陳n蒜fo躬ll衡ow厲in監(jiān)g跳SD京S-夜PA組GE2.照7免疫祥印記(I懼mm拴un踢ob妖lo憐tt缸in章g)WesternblottingSDSIFE（固免）?高分溉辨率?操作京簡單?高特胡異性?高靈丈敏度Se勿pa之ra紅te訊p華ro稱te神in債s跪by量S頑DS迷P潛AG曲ETr博an齒sf禾er備p兆ro絲式te支in封s滑to到m蛾em受br秧an街es踐(筍i.的e.罰N怠it敞ro邀ce騎ll李ul姓os變e)Bl襲oc壯k廚no飛n-忽sp倆ec造if墾ic蛋s貸it簽es哀o往n就me米mb黨ra安neIn值cu睬ba尸te撥w幅it達(dá)h賢pr諒im逮ar牽y覺an依ti超bo頃dy紛,過wa濤shIn若cu滿ba徒te忙w緣瑞it犯h資se覽co銹nd內(nèi)ar怠y之a(chǎn)n封ti葵bo熔dy撞,膊wa剛shDe貞te裁ct舒s旗ec耐on鐘da容ry委a北nt瘦ib紹od葵y2.擔(dān)7免疫其印記(I細(xì)mm智un她ob詳lo耗tt暴in喘g)2.菌7免疫洞印記(I劣mm盾un再ob舉lo威tt屠in銀g)顆粒尼型抗分原或細(xì)胞研型抗如原與相合應(yīng)抗彈體結(jié)絨合后甩，在苗有適櫻當(dāng)電繪解質(zhì)株存在潮下，莖抗原頂與抗馬體充秋分反疤應(yīng)，楊相互飲聚集予，形循成肉眼羅可見的凝報(bào)集塊吐團(tuán)。B.凝集反應(yīng)Agglutinogen

抗原尤性質(zhì)激，反液應(yīng)方皆式，夜實(shí)驗(yàn)燈目的---直接霜凝集裹反應(yīng)屠（Di丟re靠ct釋ag脈gl土ut酷in扇at稿io展n）--摟-間接械凝集晴反應(yīng)渾（In結(jié)di乎re泊ct勞a撕gg怎lu竟ti柏na白ti坊on）--此-血凝葬和血況凝抑蛙制反辱應(yīng)（In姜hi執(zhí)bi治ti胡on今o逆f麗Ag眉gl公ut顆in斷at辮io槐n）細(xì)菌柱、螺撿旋體妨或紅足細(xì)胞達(dá)與其蚊相應(yīng)銜抗體余直接絡(luò)混合雹，經(jīng)姻一定哭時(shí)間宋，形躍成細(xì)醋菌或光紅細(xì)數(shù)胞凝陜集。Of林te嚼n繼pe炎rf犧or葵me慣d邪at露r彈oo線m轟te棒mp伯er掩at于ur折e.Ma姜y裙us誤e補(bǔ)ce悠nt爺ri宰fu音ga配ti省on突t燒o滅br贏in曠g廁an語ti榆ge交n積an網(wǎng)d縱an乏ti振bo嚴(yán)dy鉆i劫nt歸o加cl凝os捉er雪p聲r(shí)o暮xi咳mi辱ty蝕.某些虜病原掏菌感港染的展檢測(cè)著（傷斜寒、含副傷悲寒）洲。Cl綢ic請(qǐng)k旁on清i田ma忙ge污a尺t蜘ri擊gh傘t掠wa經(jīng)it殲f蒸or證a世ni耽ma青ti啞on福t歡o刑be漏gi謝n.1直接癢凝集Di勾re息ct石A壩gg棒lu圈ti徹na昨ti淡on載體弊種類：血細(xì)問胞聚苯困乙烯熄膠乳梨顆粒央（羧棚化）2間接陰凝集Pa縫ss匠iv兩e銳Ag綱gl捧ut桶in匙at幻玉io匙n與直仔接凝跟集不催同，歐間接輕凝集勁反應(yīng)陡中的擇可溶路性抗刊原或渡抗體靜需要鑰吸附吉或偶云聯(lián)在讀一種與免暈疫無惱關(guān)的、具栽有一高定大躺小的坑不溶冰性顆竿粒物破的表豪面，萌使其欲成為致敏獵載體。間接阻血凝交試驗(yàn)呀，膠饑乳凝茂集試買驗(yàn)，謊活性乖碳粒閘試驗(yàn)正向冤間接槳凝集護(hù)反應(yīng)隔，反茶向間嘴接凝奸集反季應(yīng)An羅ti非ge光nson舉a靠c獨(dú)ar檔ri調(diào)er胖m榨ol判ec斗ul簡e,楊s扎uc忌h魯as寒l須at恩ex賠,榜co搜mb基in策e言wi帥th姻p瞞at書ie敬nt剖’s騙s蟲am至pl購e亭fo板r海an海ti甚bo婆dy居d緒et士ec茂ti進(jìn)on臣.Cl水ic袖k計(jì)on武i償ma豬ge鏡a揀bo車ve盒w續(xù)ai盯t笑fo罰r跌an眠im守at役io荷n咬to薪b雖eg車in悠.2.槍1正向構(gòu)間接貫?zāi)疐o揚(yáng)rw怪ar勉d槐Pa醬ss孕iv哥e痕Ag車gl誦ut鏟in民at明io舞nAn癥ti弄bo朽dyis堡b毫ou樹nd女t兩o呢th焦e盈ca穿rr無ie聞r豬mo獵le萍cu許le植,也wh鋤ic達(dá)h梢is憐t跑he格n之mi支xe依d草wi忌th傭p鞠at擔(dān)ie撓nt撤’s平s占am毯pl惑e蝕to誼d稱et窩ec暴t所an濱ti對(duì)ge趴n.Cl著ic郊k買on炸i制ma芽ge園a祥bo項(xiàng)ve監(jiān)w殘ai祝t挺fo置r映an喊im繞at挺io情n泊to尚b品eg繞in做.2.峽2反向霸間接燃凝集描試驗(yàn)Re勤ve溜rs夜e逗Pa于ss救iv拋e貝Ag旱gl饒ut凝in歡at切io茄n提高了單純抗原抗體反應(yīng)的靈敏度對(duì)微量抗原（真菌毒素）檢測(cè)具有一定優(yōu)勢(shì)An溉ti至bo譜dy落r趣ea政ge滅nt賓i極s嗚co鄉(xiāng)豐mb撥in宅ed融w劈燕it部h疲pa妨ti淋en沸t’它s輝sp密ec聰im灑en罷.If紛p羽at塔ie妄nt常’s指s楚pe鏈ci矩me鉤n墨co午nt可ai覆ns界t材he隆a護(hù)nt雜ig嶺en蔑f戴or橋t物ha波t反an剩ti舞bo鞏dy句,仰th細(xì)ey穩(wěn)w脾il必l姑re晴ac策t.Er魚yt尚hr撐oc腿yt辜e（紅獄細(xì)胞影）is矮a膠dd錄ed肌.Apo遺si奪ti倡vere醋ac川ti剛on脅w卻il擊l誘sh命owno荒a開gg羨lu汽ti費(fèi)na輛ti裹on.Ane球ga侵ti螺vere糞ac土ti惠on至s作ho邁wsag濤gl需ut附in隙at夸io文nbe露tw乞ee閘n殖re元ag妨en袋t東an尺ti犧bo肅di叼es開a拍nd然a紛nt辱ig僻en用.YYYYYY3血凝和抑制丈反應(yīng)In痕hi渾bi湖ti效on息o非f箱Ag避gl蠻ut宵in遭at襪io地n+-含血生凝素桑（HA）的倍病毒霸能凝諷集人肥或動(dòng)云物紅普細(xì)胞夠，稱舉為血專凝現(xiàn)色象！Ju膚le課s騰Bo栗rd支et（18兼70如-1修96粉1）Di象sc懲ov克er佳er啟o雜f支co按mp白le膜me緊nt19世紀(jì)衫末概念榮：新鮮收血液揚(yáng)中含阿有的欲一種讀不耐烤熱成傳分，掘可輔需助和政補(bǔ)充隆特異增性抗汪體介膊導(dǎo)的犁免疫科溶菌童、溶唯血作養(yǎng)用；特點(diǎn)辨：補(bǔ)體往的激俱活沒賭有抗腿原抗桶體特鴿異性截；原理胃：作為賺一種液通用閉試劑貫來檢爺測(cè)反曠應(yīng)體憲系中罵抗原警抗體嶺復(fù)合斤物的照存在象，并落利用足補(bǔ)體丈對(duì)紅塘細(xì)胞剪的裂截解作和用，偏通過深紅細(xì)冒胞的讀變化噴可以刮很容敲易的抬對(duì)反尊應(yīng)進(jìn)那行示役蹤。

C.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)補(bǔ)體徒結(jié)合各試驗(yàn)儀原理受檢規(guī)系統(tǒng)指示奮系統(tǒng)溶血境反應(yīng)補(bǔ)體費(fèi)結(jié)合載試驗(yàn)1.僅有你抗原柔或抗美體補(bǔ)體紅細(xì)畢胞溶血拔素陽性陰性2.抗原跌抗體羅反應(yīng)紅細(xì)沈胞溶血稱素陰性陽性抗原抗體補(bǔ)體抗原/抗體

D.中和反應(yīng)中和