肌鈣蛋白綜述資料

肌鈣蛋白綜述資料肌鈣蛋白(Troponin,Tn)是橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白，存在于心肌和骨骼肌中，由三個(gè)亞基組成：肌鈣蛋白C(TnC)，肌鈣蛋白T(TnT)和肌鈣蛋白I(TnI)。它們和原肌球蛋白一起通過(guò)調(diào)節(jié)Ca2+對(duì)橫紋肌動(dòng)蛋白ATP酶的活性來(lái)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白的相互作用。肌鈣蛋白在循環(huán)血中的半衰期為大約數(shù)小時(shí)，由腎臟排出體外。游離cTnI在循環(huán)血中的半衰期大約為67min。TnC，分子量為18000，呈晶體結(jié)構(gòu)，是肌鈣蛋白的Ca2+結(jié)合亞基。骨骼肌和心肌中的TnC是相同的。TnT，分子量為37000，可能為不對(duì)稱蛋白結(jié)構(gòu)，是原肌球蛋白結(jié)合亞基。TnT有三種亞型：快骨骼肌亞型、慢骨骼肌亞型和心肌亞型。它們?cè)诠趋兰』蛐募≈械谋磉_(dá)分別受不同的基因調(diào)控。TnI，分子量為21000，是肌動(dòng)蛋白抑制亞基。它有三種亞型：快骨骼肌亞型、慢骨骼肌亞型和心肌亞型。這三種TnI亞型分別源于三種不同的基因。心肌亞型(cTnI)相對(duì)兩種骨骼肌亞型約有40%的不同源性。AMI后cTnI的釋放形式(游離形式還是與其他肌鈣蛋白結(jié)合成復(fù)合物，氧化形式還是還原形或迄今為止還不完全清楚。其連同肌鈣蛋白T和肌鈣蛋白C構(gòu)成結(jié)構(gòu)復(fù)合物。在心臟中的細(xì)胞間鈣信號(hào)肌動(dòng)蛋白-肌球蛋白相互作用的轉(zhuǎn)化過(guò)程中起著重要作用。I是一類調(diào)節(jié)肌肉收縮功能的蛋白，人的cTnI與骨骼肌中的形式在結(jié)構(gòu)上有所不同，它的氨基端上多了一個(gè)氨基酸殘基。使得cTnI成為一個(gè)特異性的標(biāo)志物。在心肌梗死(AMI)發(fā)生后，cTnI便迅速釋放入血液循環(huán)中。釋放的模式和CK-MB相同(在AMI發(fā)生4-6個(gè)小時(shí)以后)。然而，CK-MB的水平在36-48小時(shí)后恢復(fù)正常，cTnI可以持續(xù)升高6-10天。在正常健康人體內(nèi)，cTnI水平是非常低的，在骨骼肌受損的病人體內(nèi)也檢測(cè)不到cTnI。正常人血清中cTnI平均濃度＜0.06ng/ml。當(dāng)心肌輕微損傷時(shí)其濃度明顯升高，可達(dá)100?1300ng/ml。。近年來(lái)臨床心血管疾病研究結(jié)果表明，cTn1是心肌梗死(AMI)和不穩(wěn)定心絞痛(UAP)、圍手術(shù)期心肌損傷等疾病的高靈敏、高特異的血清學(xué)指標(biāo)。心肌肌鈣蛋白在臨床診斷中的應(yīng)用1.對(duì)心肌損傷的診斷在諸多診斷急性心肌梗死(AMI)的臨床生化指標(biāo)中，CK-MB曾一度被認(rèn)為是診斷AMI的“金標(biāo)準(zhǔn)”，已廣泛應(yīng)用多年。隨著對(duì)心肌肌鈣蛋白(cTn)深入研究，無(wú)論是對(duì)心肌的特異性還是診斷敏感性，CK-MB的地位都受到了嚴(yán)重挑戰(zhàn)。cTn被認(rèn)為是目前最好的確定標(biāo)志物，正逐步取代CK-MB成為AMI的診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”?；加懈鞣N冠狀動(dòng)脈疾患的病人必然會(huì)發(fā)生心肌細(xì)胞損傷。有些病人的臨床表現(xiàn)可能不完全符合WHO關(guān)于AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)(不穩(wěn)定心絞痛就是其中之一)，但卻伴有某些心肌損傷標(biāo)志物(如cTnT等)升高，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的組成成分滲漏入外周血循環(huán)。這使得心肌細(xì)胞損傷標(biāo)志物的檢測(cè)成為可能。cTnT和cTnI在AMI后(3?6h)血中濃度很快升高，和CK-MB(3?8h)相當(dāng)或稍早，它們測(cè)定的特異性和靈敏度明顯高于CK-MB。cTn具有相當(dāng)長(zhǎng)的診斷窗口期(cTnI7?9天，cTnT更長(zhǎng))。cTn對(duì)急性胸痛病人(無(wú)論有無(wú)骨骼肌損傷)的診斷均優(yōu)于CK-MB。研究表明：在對(duì)AMI的診斷方面cTnI和cTnT無(wú)顯著差異，都能鑒別出CK-MB所不能檢測(cè)出的心肌損傷。相對(duì)cTnT而言，cTnI顯示出較低的初始靈敏性和較高的特異性。就上升的相對(duì)值來(lái)說(shuō)，cTnT比cTnI高；在不穩(wěn)定心絞痛病人中cTnT上升的頻度比cTnI高。在AMI后30天死亡率的預(yù)報(bào)方面，cTnT優(yōu)于cTnI。無(wú)論是不穩(wěn)定心絞痛還是無(wú)Q波的心肌梗死，最初24小時(shí)的cTnT最具預(yù)后價(jià)值。對(duì)不穩(wěn)定冠狀動(dòng)脈疾患病人的隨訪發(fā)現(xiàn)，cTnT和運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)兩項(xiàng)都正常者，死亡或AMI的僅1%；若異常，死亡或AMI可達(dá)50%。對(duì)急性冠狀動(dòng)脈疾患(包括心肌梗死)病人的隨訪研究發(fā)現(xiàn)，cTnT小于0.1pg/L的病人的死亡率僅4%,相比而言，大于0.1pg/L的病人的死亡率則大3倍，發(fā)生休克的百分率大3倍，發(fā)生充血性心功能衰竭的百分率也增加1倍。對(duì)cTnI的觀察研究得到了類似的結(jié)果。不穩(wěn)定冠狀動(dòng)脈疾患病人中，cTnl大于0.1pg/L的病人死亡率較cTnl小于0.1pg/L的病人的死亡率大3倍多。因此，任何急性冠狀動(dòng)脈疾患病人同時(shí)測(cè)得cTn增高，應(yīng)視為高危險(xiǎn)性。AMI后溶栓治療的指示物靜脈注入溶栓藥物是近年來(lái)常用的AMI治療方法，在治療后判斷是否出現(xiàn)再灌注也成為臨床醫(yī)生最關(guān)注的問(wèn)題之一。在出現(xiàn)再灌注時(shí)cTnT往往有雙峰變化：第1天由于梗塞開通后，血流進(jìn)入病變部位，將游離的cTnT沖洗入血液而出現(xiàn)第1個(gè)峰；在第4天可觀察到第2個(gè)較小的峰(主要來(lái)自cTn復(fù)合物中的cTnT)。這兩個(gè)峰值的比率有助于判斷是否出現(xiàn)再灌注：如第1峰值大于第2峰值，即比值＞1.0，往往說(shuō)明出現(xiàn)再灌注。早期冠狀動(dòng)脈再灌注的指示物CK-MB、肌紅蛋白(Mgb)、cTnT和cTnl在血栓治療成功后的早期動(dòng)力學(xué)比較研究表明，四種標(biāo)志物在溶栓后釋放的早期動(dòng)力學(xué)基本相似，但是cTnT和cTnI在90min的冠狀動(dòng)脈再灌注平均指數(shù)顯著大于CK-MB和Mgb。對(duì)圍手術(shù)期心肌梗死的診斷冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)后心肌梗死的診斷在心臟手術(shù)中有重要作用。cTn是圍手術(shù)期心肌梗死的敏感和特異的標(biāo)志物，能夠鑒別出沒(méi)有達(dá)到常規(guī)圍手術(shù)期心肌梗死判斷標(biāo)準(zhǔn)的微小的圍手術(shù)期心肌損傷。對(duì)心肌炎的診斷與CK活性相比，心肌炎時(shí)cTnT因其相對(duì)較高的血清檢測(cè)值和較長(zhǎng)的上升時(shí)間而具有較高的檢測(cè)敏感性，血清cTnT可作為急性心肌炎的診斷標(biāo)志物。與腎功能衰竭的關(guān)系缺血性心臟病是晚期腎病病人發(fā)病和死亡的主要原因之一，占總死亡率的大約40%；這些缺血性心臟病中的大約25%發(fā)展為AMI。因此，在晚期腎臟病病人的臨床治療中，心血管并發(fā)癥的診斷成為至關(guān)重要的問(wèn)題。在晚期腎臟病病人血清中，cTnT和cTnI的檢測(cè)值存在著差異。晚期腎臟病病人的cTnT升高的可能原因有三：檢測(cè)方法的交叉反應(yīng)；cTnT在骨骼肌中的重表達(dá)；存在著微小心肌損傷。第二代cTnT分析法不會(huì)因?yàn)閏TnT在晚期腎臟病病人骨骼肌中的重表達(dá)而產(chǎn)生假陽(yáng)性，從而排除了分析法的交叉反應(yīng)。研究結(jié)果認(rèn)為，晚期腎臟病病人血清中cTnT的升高可能是由于存在一定程度的心肌損傷。與骨骼肌損傷的鑒別診斷心肌和骨骼肌細(xì)胞關(guān)系密切。在胚胎期，這兩種肌肉的基因表達(dá)有多處相同之處，但在最終分化時(shí)表達(dá)出現(xiàn)不同。因此骨骼肌損傷病人中的心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)的特異性令人關(guān)注。由于第二代cTnT分析法已排除了分析法的交叉反應(yīng)。因此，cTn可作為骨骼肌損傷病人的心肌損傷診斷時(shí)的較好的標(biāo)志物。甲狀腺機(jī)能減退病人心肌損傷的診斷甲狀腺機(jī)能減退導(dǎo)致了膽固醇的上升，使病人易患冠狀動(dòng)脈疾病以及AMI。同時(shí)，甲狀腺機(jī)能減退病人常有抽筋、肌痛等骨骼肌損傷癥狀。因此，這種病人的血清CK、CK-MB、都有不同程度的增高。此時(shí)，cTn是甲狀腺機(jī)能減退病人心肌損傷診斷時(shí)較好的標(biāo)志物。藥物作用觀察cTn還被用于觀察某些藥物的藥理作用與心臟的關(guān)系，了解是否改善或者加劇心肌缺血現(xiàn)象。其他如心臟移植后的排斥反應(yīng)或急性心功能衰竭時(shí)，也常常出現(xiàn)cTn增高而CK-MB無(wú)異常的現(xiàn)象。檢測(cè)方法：肌肌鈣蛋白I(cTnI)是組成心肌肌鈣蛋白復(fù)合物的亞單位之一，具有高度的心肌特異性，被認(rèn)為是診斷心肌損傷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。快速、靈敏、準(zhǔn)確測(cè)定人血中的cTnl對(duì)于診斷急性心肌梗死、急性冠狀動(dòng)脈綜合征的危險(xiǎn)分層、監(jiān)測(cè)各種因素所導(dǎo)致的心肌損傷、以及心臟事件的判斷預(yù)后等有著重要的意義。目前，測(cè)定cTnl的方法主要有放射性同位素免疫分析法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)、熒光免疫分析法(FIA)、以及金標(biāo)免疫分析法等。其中，RIA法因有放射性污染的危險(xiǎn)已基本不使用；CLIA法和FIA法靈敏度較高，但儀器價(jià)格偏高，國(guó)內(nèi)在這方面的研究相對(duì)較少；金標(biāo)免疫分析法主要應(yīng)用于制作定性分析用的免疫層析試紙條，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)各醫(yī)院多使用國(guó)外公司的產(chǎn)品，價(jià)格昂貴，國(guó)內(nèi)學(xué)者雖在這方面有不少研究，但其靈敏度不高，難以推向市場(chǎng)；目前國(guó)內(nèi)研究和應(yīng)用最多的方法是ELISA，該方法靈敏度適中，使用相對(duì)簡(jiǎn)便，儀器價(jià)格也不很高，但存在測(cè)定周期偏長(zhǎng)、靈敏度相對(duì)較低、檢測(cè)范圍較窄等不足。血清cTnl測(cè)定的方法學(xué)cTnl檢測(cè)方法cTnl的測(cè)定始于20世紀(jì)80年代中期，多采用雙抗體競(jìng)爭(zhēng)放射免疫法和競(jìng)爭(zhēng)性ELISA測(cè)定法。有研究者將金標(biāo)記或硒標(biāo)記單克隆抗體與免疫層析技術(shù)相結(jié)合用紙條法定量或半定量床邊檢測(cè)cTnl濃度,最低檢測(cè)值為014ug/L。目前。TnI的檢測(cè)多采用化學(xué)發(fā)光法，用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記后作為檢測(cè)抗體,大大提高了測(cè)定的精確性和敏感性，但現(xiàn)在通用的cTnl測(cè)定方法尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化，不同的方法采用不同的抗體識(shí)別位點(diǎn)，所以在使用商品cTnI試劑盒時(shí),必須研究商品試劑的特性。用金標(biāo)單抗法定性檢測(cè)血清肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶(cTnI/MyO/CKMB)。原理：肌紅蛋白是肌肉組織中的一種亞鐵血紅素蛋白，分子量較小。肌紅蛋白是低分子量胞漿蛋白，當(dāng)肌肉細(xì)胞損傷后，先于其他心肌標(biāo)志物釋放到血液中，1~2h后開始在血液中升高，12h回落至正常水平。肌紅蛋白具有較高的靈敏度，但不夠特異。肌酸激酶同工酶是存在于心肌組織中的一種二聚體，參與肌肉組織的新陳代謝。肌酸激酶同工酶分子量是85745。CKMB主要分布于心肌中。當(dāng)心肌損傷后，CKMB釋放到血液中，3~8h后開始升高，可持續(xù)3~5天。當(dāng)心肌損傷時(shí)，三種成分在幾小時(shí)內(nèi)釋放到血液中，并持續(xù)不同的時(shí)間，以上三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)能盡早檢測(cè)出心肌是否受損。現(xiàn)狀和局限：據(jù)有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：20例AMI患者cTnI陽(yáng)性率100%，MyO陽(yáng)性率95%，CKMB陽(yáng)性率70%，CKMB結(jié)果與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相似［2］。非AMI組經(jīng)最后

診斷冠心病13例，風(fēng)心病1例，心絞痛4例，病毒性心肌炎2例，其中1例心絞痛患者cTnl陽(yáng)性，該類患者臨床治療效果較差，易發(fā)展成AMI。以往AMI的診斷主要依靠患者的臨床表現(xiàn)、心電圖改變和血清酶的升高，典型的病例不難確診，但以上檢查結(jié)果陰性的患者，雖然可能不是AMI，但卻可能是不穩(wěn)定型心絞痛或其他形式的急性冠脈綜合征［3］，單純依靠上述檢查方法，容易漏診或誤診?，F(xiàn)開展的三項(xiàng)聯(lián)合定性檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備，對(duì)未開展其他早期心肌損傷標(biāo)志檢測(cè)的基層醫(yī)院，史適合于開展此項(xiàng)檢驗(yàn)。心肌梗塞聯(lián)檢芯片設(shè)計(jì)原理：MB：肌紅蛋白廣泛而豐富地存在于肌肉中，分子量小，非常容易釋放入血，急性心肌梗死病人有先兆胸痛后2小時(shí)升高。6-9小時(shí)達(dá)高峰，24-36小時(shí)恢復(fù)至正常水平。到目前為止，它是在急性心肌梗死發(fā)生后最早的可測(cè)指標(biāo)，同時(shí)也是冠脈再通后再梗阻敏感且快速的標(biāo)志物，適于作為診斷心肌壞死的早期標(biāo)志物，其陰性預(yù)報(bào)值極高，接近100%，若發(fā)病4小時(shí)未見(jiàn)升高，則AMI可能性極低，若為陽(yáng)性，確不一定是AMI，可能因骨骼肌損傷或凡腎臟排泄功能異常的疾病所致。MB于24-30小時(shí)內(nèi)經(jīng)腎臟清除消失，如果患者接受血管再通治療成功，一般應(yīng)于24小時(shí)左右降到正常值，反之，臨床可利用MB這個(gè)特點(diǎn)判斷患者是否再發(fā)血管阻塞。cTnl：cTn是心臟橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白，由三個(gè)亞基組成：肌鈣蛋白C(TnC)，肌鈣蛋白T(TnT)和肌鈣蛋白I(TnI)。其中只有心肌肌鈣蛋白I(TnI)是一種惟一存在于心肌中的收縮蛋白，未發(fā)現(xiàn)在心肌外的其他組織出現(xiàn)，具有心肌特異性,而心肌TnC和骨骼肌TnC相同，心肌TnT與骨骼肌TnT存在交叉反應(yīng)。當(dāng)心肌細(xì)胞膜的完整性受到破壞時(shí),cTnI可迅速透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入血流，血清cTnI升高。一般在心肌損傷4-6h左右可測(cè)，峰值期在12?24h，半壽期長(zhǎng)達(dá)120小時(shí)，診斷窗口期2?14天，cTNI能發(fā)現(xiàn)先前隱藏在肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)正常值范圍內(nèi)的更小的心肌損害，對(duì)不穩(wěn)定性心絞痛(UA)和非ST抬高的AMI的鑒別有極大幫助，是心肌梗死經(jīng)過(guò)治療后判斷血管再通與否的最佳指標(biāo)，因此中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)建議將cTNI取代傳統(tǒng)CK-MB作為檢出心肌損傷的金標(biāo)準(zhǔn)，成為目前心肌損傷最具特異性的標(biāo)志物。將MB與cTnI結(jié)合起來(lái)，對(duì)AMI的診斷治療價(jià)值會(huì)高于傳統(tǒng)的檢測(cè)，心肌損傷是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，其血清標(biāo)記物MB與cTn的檢測(cè)值在不同的時(shí)間、不同的組合條件下，診斷參考值不同，必須進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)分析，才能更客觀地反映病程。生物芯片系統(tǒng)在臨床診斷中的準(zhǔn)確、靈敏、聯(lián)檢、軟件分析使得這一動(dòng)態(tài)過(guò)程更容易把握。本品采用心肌肌鈣蛋白(cTnI)、肌紅蛋白(MB)二種單克隆抗體分別固定于硝酸纖維膜，并與酶標(biāo)記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體、抗肌紅蛋白單克隆抗體及其他試劑制成，應(yīng)用滲濾式雙抗體夾心法的原理檢測(cè)血液中的心肌肌鈣蛋白I、肌紅蛋白濃度。1、模式:檢避窗口定位點(diǎn)肌鈣蛋白檢避窗口定位點(diǎn)肌紅蛋白質(zhì)控占圖(1)

、范圍：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了心肌梗塞聯(lián)檢試劑盒定性檢測(cè)所應(yīng)達(dá)到的性能指標(biāo)及檢測(cè)方法，檢測(cè)項(xiàng)目為人血清中的肌鈣蛋白、肌紅蛋白。試劑盒用于急性心肌梗塞的輔助性診斷，檢測(cè)的陽(yáng)性判斷閾值肌鈣蛋白1ng/ml、肌紅蛋白50ng/ml。使用生物芯片檢測(cè)心肌損傷的優(yōu)點(diǎn)1、 一次性檢測(cè)多個(gè)標(biāo)志物，避免多個(gè)項(xiàng)目多次重復(fù)檢測(cè)，為臨床治療贏得寶貴時(shí)間。2、 綜合芯片平臺(tái)和多種現(xiàn)行先進(jìn)方式，整體有力的提高了檢測(cè)的敏感性和特異性，并且具備高度的重復(fù)性。3、 定性檢測(cè)和定量分析相結(jié)合，軟件具有動(dòng)態(tài)分析評(píng)估能力。有力的配合醫(yī)生的診斷和治療。4、 整體檢測(cè)快速簡(jiǎn)潔，操作簡(jiǎn)單易學(xué)，自動(dòng)化強(qiáng)5、 可廣泛用于內(nèi)科、兒科、外科相關(guān)心肌損傷的多類疾病診斷、監(jiān)控。心肌肌鈣蛋白I膠體金免疫層析法原理：心肌肌鈣蛋白I(cTnI)具有高度心肌特異性，研究表明cTnl在胎兒及健康或疾病狀態(tài)的成人骨骼肌中不表達(dá)，因而是心肌細(xì)胞損傷的特異性診斷指標(biāo)，通過(guò)檢測(cè)血清cTnI能及時(shí)發(fā)現(xiàn)心肌梗塞。要研究探討cTnI檢測(cè)方法，首先要制備cTnI抗體，其次是用發(fā)光或顯色物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，最后建立檢測(cè)方法。以cTnI--BSA為抗原，免疫新西蘭兔，制備抗cTnI多克隆抗體，用BSA作為配體，采用膜滲濾親和層析法除去與BSA有交叉反應(yīng)的抗體，制備特異性抗cTnI多克隆抗體。由于心肌肌鈣蛋白I(cTnI)和骨骼肌肌鈣蛋白I(sTnI)的氨基酸序列有60%相同，用常規(guī)方法制備的抗cTnI多克隆抗體與sTnI有交叉反應(yīng)，失去特異性。用sTnI作為配體，再次采用膜滲濾親和層析法制備特異性抗cTnI多克隆抗體。使用水溶性量子點(diǎn)(QDs)標(biāo)記cTnI，制備了cTnI-QDs。標(biāo)記后的cTnI仍能與抗cTnI多克隆抗體特異性結(jié)合。基于上述研究我們采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫分析的原理首次建立了量子點(diǎn)標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)免疫分析法。這是我們?cè)谘芯?。丁口I抗體和量子點(diǎn)標(biāo)記方法的基礎(chǔ)上首次創(chuàng)建的一種檢測(cè)cTnI的新方法。方法學(xué)結(jié)果：心肌肌鈣蛋白I抗血清滴度達(dá)1：100000，Ka=2.38X1L/tool；靈敏度：當(dāng)cTnl濃度等于或高于5ng/ml時(shí)，檢測(cè)線為陽(yáng)性。即將其最低檢測(cè)值確定為5ng/ml。特異性：實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)cTnI與cTnT、cTnC以及CK—MB均無(wú)交叉反應(yīng)。穩(wěn)定性：37°C放置一周，4~C放置12個(gè)月的測(cè)試條，測(cè)定結(jié)果檢測(cè)線和質(zhì)控線均在檢測(cè)范圍內(nèi)，與新制備測(cè)試條測(cè)定結(jié)果比較無(wú)明顯差異?，F(xiàn)狀和局限：隨著對(duì)cTnI的深入研究，cTnl的檢測(cè)方法也不斷改進(jìn)。cTnI膠體金免疫層析檢測(cè)法，具有簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，既適于基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用研究，又適于野外、現(xiàn)場(chǎng)診斷、急性心肌梗死的早期診斷及科研工作需要，具有廣泛應(yīng)用前景。（1） 層析反應(yīng)是以濾膜為載體，所以濾膜的質(zhì)量致關(guān)重要，其吸附性能，層析速度和均一性等均會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，其中流速是選擇硝酸纖維素膜作為免疫層析材料應(yīng)主要考慮因素之一。國(guó)內(nèi)濾膜很難達(dá)到這一質(zhì)量。因此，我們選用美國(guó)Millipore公司中等靈敏度，中等流速的HF135膜用于人cTnI膠體金免疫層析法研究，獲得了較滿意的結(jié)果。（2） 抗體固定是免疫層析條研制的關(guān)鍵技術(shù)，而抗體包被量的最佳篩選是提高檢測(cè)靈敏度的重要因素之一。在不影響靈敏度的前提下，提高抗體包被量，可以擴(kuò)展測(cè)定的線性范圍。但如果包被抗體量過(guò)多，捕捉的抗原也就多，如果遇到樣品含量非常高時(shí)，消耗標(biāo)記物過(guò)多，可能導(dǎo)致質(zhì)控線過(guò)淺或根本不顯色。相反包被抗體量過(guò)少，檢測(cè)的線性范圍也就窄，就不能有效捕捉抗原，則降低靈敏度，所以，經(jīng)篩選確定3.5mg/ml的抗體濃度作為最佳包被濃度。即可以保證檢測(cè)的靈敏度和線性范圍，又可以保證質(zhì)控線正常顯色。3.膠體金全血快速檢測(cè)試原理：是免疫層析基礎(chǔ)上的一步法體外診斷。用來(lái)對(duì)發(fā)生心肌梗死時(shí)人血清、全血和血漿中的心肌鈣蛋白I進(jìn)行定性檢測(cè)。采用雙抗夾心免疫法，當(dāng)標(biāo)本加入樣品槽后，通過(guò)結(jié)合墊和金抗體結(jié)合，復(fù)合物沿膜流動(dòng)和抗體在檢測(cè)區(qū)域反應(yīng)。如果標(biāo)本中存在有可檢出濃度或更濃的標(biāo)志物，就會(huì)在檢測(cè)區(qū)出現(xiàn)一條色帶。如果沒(méi)有就會(huì)保持無(wú)色。標(biāo)本繼續(xù)移動(dòng)至控制區(qū)域，出現(xiàn)粉紅-玫瑰紅的色帶，說(shuō)明試驗(yàn)正常結(jié)果有效?，F(xiàn)狀和局限：期望值：本試劑盒在TnIN1.5ng/ml時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。在血液中cTnl的濃度達(dá)到正常水平上限的時(shí)間是發(fā)生癥狀后的4-6個(gè)小時(shí)。達(dá)到最高濃度是12-24個(gè)小時(shí)并在某些病人身上會(huì)持續(xù)升高約6-10天。因此在發(fā)生癥狀后的第1個(gè)小時(shí)內(nèi)取樣檢測(cè)結(jié)果為陰性并不能肯定地排|>MI的可能性。如果懷疑是AMI的話，應(yīng)在合適的時(shí)間間隔內(nèi)取樣重復(fù)試驗(yàn)。性能特征值：靈敏度：本試劑盒在cTnIN1.0ng/ml時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。精確性：陰性（Ong/ml）TnI(0.3-0.8ng/ml)TnI(>1.1ng/ml)標(biāo)本數(shù)量8910109陰性8851陽(yáng)性15108特異性/靈敏度98.9%50.0%99.1%干擾實(shí)驗(yàn)：以下濃度的物質(zhì)對(duì)心肌鈣蛋白的檢測(cè)不產(chǎn)生干擾。膽紅素10mg/dl膽固醇800mg/dl血紅素250mg/dl甘油三酯1250mg/dl實(shí)驗(yàn)限制性1、 檢測(cè)結(jié)果應(yīng)和其他臨床信息如臨床癥狀和其他檢測(cè)方法的結(jié)果綜合考慮以判斷AMIO發(fā)生胸口疼痛后2-16小時(shí)內(nèi)取樣的病人標(biāo)本如為陰性結(jié)果也排除AMI可能性，陽(yáng)性結(jié)果的病人可能是AMI患者，需要更多的信息確認(rèn)。因?yàn)樵诓∪税l(fā)生癥狀和cTnI釋放之間有一定時(shí)間，建議對(duì)懷疑是AMI的患者做連續(xù)取樣檢測(cè)。2、 本檢測(cè)方法用于定性試驗(yàn)，要確定cTnI的濃度應(yīng)采用一個(gè)定量的分析方法。3、正如所有的診斷實(shí)驗(yàn)一樣，明確的醫(yī)學(xué)診斷結(jié)論不應(yīng)僅僅依靠一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果而定，而應(yīng)由主治醫(yī)生經(jīng)過(guò)綜合分析所有的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果之后再作結(jié)論。5.酶免疫法(ELISA)定量檢測(cè)肌鈣蛋白(1)cTn的檢測(cè)cTn可以用高度敏感的酶免疫法(ELISA)作定量檢測(cè)，也可用快速的固相免疫層析法作定性檢測(cè)。在正常標(biāo)本中運(yùn)用現(xiàn)有的方法檢測(cè)不出cTnT和cTnI。因此，循環(huán)血中出現(xiàn)任何一種可檢測(cè)到的cTn必然是心肌細(xì)胞受損的結(jié)果?，F(xiàn)狀：復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)及微生物工程系復(fù)旦金鷹生物醫(yī)藥研發(fā)中心制備抗人心肌肌鈣蛋白I(cTnI)單克隆抗體、建立檢測(cè)人cTnI鏈酶親和素-生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法，用基因工程表達(dá)的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠，以雜交瘤技術(shù)制備得到三株特異性抗人cTnI的單克隆抗體記為6G3,6A6,3G9.三株雜交瘤細(xì)胞中6G3和6A6為IgG1,3G9為IgG2b,腹水效價(jià)分別為4x10-5,4x10-5和10-5.親和常數(shù)為5.0x109,6.4x109和3.8x109mol-1.Westernblotting結(jié)果表明6G3和6A6能夠識(shí)別cTnI-C復(fù)合物.把6G3抗體生物素化并制備抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗體.以多抗作為固相捕捉抗體，生物素化6G3抗體作為檢測(cè)抗體，建立檢測(cè)cTnI的雙抗體夾心ELISA方法并初步應(yīng)用于臨床病人標(biāo)本檢測(cè).以cTnI-C復(fù)合物多抗捕捉檢測(cè)方法具有良好的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性，靈敏度為0.9ng/mL，較包被其他抗體捕捉方法提高1~2倍.批內(nèi)變異系數(shù)為5.03%,回收率為94.56%,測(cè)定17例AMI病人和18例血清樣本臨床診斷結(jié)果符合率為100%.發(fā)展：cTnT的ELISA分析法最早于1989年報(bào)道。第一代cTnTELISA分析法(cTnT1)商品化試劑于1992年進(jìn)入市場(chǎng)。cTnT1使用兩種肌鈣蛋白T特異的單克隆抗體-心肌肌鈣蛋白T特異抗體M7為捕捉抗體和肌鈣蛋白T特異抗體1B10作為標(biāo)記抗體，使cTnT1的敏感性較最早的ELISA分析法高5倍。但臨床應(yīng)用表明cTnT1對(duì)患有嚴(yán)重骨骼肌損傷病人會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。1997年第二代cTnTELISA分析法(cTnT2)商品化試劑問(wèn)世。cTnT2使用高度心肌特異的抗體M11.7取代了cTnT1中與骨骼肌有交叉反應(yīng)的抗體1B10。與cTnT1相比較，cTnT2具有相同的診斷敏感性和更高的心肌特異性，分析時(shí)間則由原來(lái)的90min降低到45min而不影響分析的準(zhǔn)確性和臨床特異性，因此在臨床實(shí)踐中cTnT2已取代cTnT1。cTnT的檢測(cè)方法第三代cTnT分析法(cTnT3)生產(chǎn)的試劑也已于最近進(jìn)入市場(chǎng)°cTnT3運(yùn)用重組人基因技術(shù)代替cTnT2的牛血清，在增加特異性和靈敏度的同時(shí)，測(cè)定的線性范圍達(dá)25pg/L，分析時(shí)間縮短到＜20min。用于檢測(cè)cTnT的快速診斷試劑盒已經(jīng)問(wèn)世，由原BoehringerMannheim公司專利生產(chǎn)，并能做到定量檢測(cè)，與cTnTELISA之間有較好的相關(guān)性(r=0.98；y=0.85x+0.002)。(2)cTnl的檢測(cè)定量檢測(cè)cTnI的方法很多。最早使用多克隆抗體檢測(cè)的放射免疫法。隨后，相繼報(bào)道了運(yùn)用單克隆抗體檢測(cè)的各種不同的酶免疫法。發(fā)展：鑒于DadeStratusII檢測(cè)系統(tǒng)是第一個(gè)通過(guò)美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)的cTnI檢測(cè)系統(tǒng)，許多臨床研究報(bào)道］了其他cTnI商用分析系統(tǒng)與之相比較的結(jié)果。美國(guó)臨床病理學(xué)會(huì)(CAP)在1997年對(duì)檢測(cè)cTnI的Access、OpusPlus和StratusII三個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平均cTnI濃度根據(jù)使用的分析系統(tǒng)而有實(shí)質(zhì)性的不同access的測(cè)定值最低，有些甚至比OpusPlus結(jié)果低20倍。這些極端結(jié)果采用DadeStratusI分析系統(tǒng)測(cè)定，結(jié)果大約是OpusPlus分析法的1?3倍。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)］，Stratus和Opus所用抗體的識(shí)別點(diǎn)位于cTnI的氨基末端，而Access所用抗體的識(shí)別點(diǎn)則位于cTnI的羧基末端。相對(duì)而言，血中cTnI的氨基末端較穩(wěn)定，較少降解，這可能是引起測(cè)定結(jié)果變異的重要因素之一。此外，采用全血或血漿標(biāo)本時(shí)的某些抗凝物質(zhì)(如EDTA)也會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生影響。EDTA螯合血標(biāo)本中的鈣離子，使cTnI-cTnC復(fù)合物解離，游離cTnI單體形成增加，從而影響檢測(cè)值。由于cTnI分析法和分析系統(tǒng)之間存在著很大絕對(duì)的和相對(duì)的誤差，許多有識(shí)之士提