液相色譜原理基礎(chǔ)知識

液相色譜原理基礎(chǔ)知識第一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日免費咨詢電話 800-810-0439 400-650-0439分析中心電話 北京/p>

上海/p>

廣州：

沈陽津網(wǎng)站地址 耗材購買電話 800-820-7730【島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司】有任何問題請聯(lián)系我們第二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日1969

GPC系統(tǒng)開發(fā)1972

LC-1（LC-830）銷售

＜與DuPont簽訂許可合同后制造銷售＞1978

LC-3A系列銷售

＜CDQR方式的單柱塞型送液單元為特征＞1981

LC-4A系列銷售

＜內(nèi)置微型計算機的全自動HPLC＞1982 LC-5A系列銷售

＜世界上首創(chuàng)的微量型LC對應(yīng)HPLC＞1984 LC-6A系列銷售

＜世界上最早的積木型HPLC、現(xiàn)在的HPLC的前身＞1991

LC-10A系列銷售

＜世界上最早采用微沖程送液單元和減低噪音技術(shù)的檢測器＞1997 LC-VP系列銷售

＜采用有效性支持功能的積木型HPLC＞LC-2010銷售

＜追求性能和操作性更加完善的一體型HPLC＞LC-20AProminence銷售＜為分析實驗室?guī)砀镄碌腍PLC

＞2010LC-15C銷售＜為了讓LC分析更為便捷>2010LC-30ANexera銷售＜130MPa耐壓系統(tǒng)，低系統(tǒng)容量，高溫分析和樣品自動前處理＞島津HPLC的歷史Startedin1969在售產(chǎn)品第三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日島津HPLC的歷史2000THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-20101997THECNLOGYBREAKTHROUGHFlexibleHPLCSystemwithMicro-strokeVolumeSolventDeliveryUnitLC-VP2004THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-20AProminence2010THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-15CEssentia2008THECNLOGYBREAKTHROUGHUFLCProminence2010THECNLOGYBREAKTHROUGHUHPLCLC-30ANexera第四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日LC-20AProminence第五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日基礎(chǔ)知識講解內(nèi)容1、色譜基礎(chǔ)知識2、硬件基礎(chǔ)知識3、定量基礎(chǔ)知識4、維護基礎(chǔ)知識第六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日第一部分色譜基礎(chǔ)知識第七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素混合物色譜分離組分第八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日色譜發(fā)展史

20世紀初，俄國植物學(xué)家M.S.Tswett提出經(jīng)典液相色譜法；

20-30年代，柱分配色譜和紙色譜；

50年代，氣相色譜，薄層色譜；

60年代，凝膠滲透色譜及高效液相色譜；

70年代，高效毛細管氣相色譜法；

80年代，電色譜；

90年代，光色譜。第九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日色譜法：利用組分在兩相間分配系數(shù)不同而進行分離的技術(shù)流動相：攜帶樣品流過整個系統(tǒng)的流體固定相：靜止不動的一相，色譜柱色譜定義色譜是一種分離技術(shù).色譜的主要目的是對混合物中的目標物分離和定量第十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日色譜分類

高效液相色譜

HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)

氣相色譜

GasChromatography(GC)

薄層色譜

Thin-LayerChromatography(TLC)

毛細管電泳

CapillaryElectrophoresis(CE)第十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日液相色譜：以液體作為流動相的色譜分離方法適用于高沸點、大分子、強極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析流動相具有運載樣品分子和選擇性分離的雙重作用HPLCvsGC氣相色譜：以氣體作為流動相的色譜分離方法適用于沸點較低、熱穩(wěn)定性好的中小分子化合物的分析流動相只起運載樣品分子的能力

第十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日HPLC簡易流程圖數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)輸液泵進樣器色譜柱柱溫箱檢測器儲液瓶第十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日HPLC特點

分離性能好靈敏度高（10-9～10-12g）選擇性高（同分異構(gòu)，旋光異構(gòu)）分析速度快進樣量?。?-100

mL）第十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日HPLC分類

反相色譜（reversedphasechromatography）離子對色譜（ion-pairchromatography）正相色譜（normalphasechromatography）離子交換色譜（ionexchangechromatography）尺寸排阻色譜（GPC/GFC）第十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日反相色譜

C18(ODS)

C8(octyl)

C4(butyl)

苯基

TMS

氰基-O-Si(CH3)2-C18H37SiO2非極性——流動相的極性大于固定相的極性第十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日相互作用力是什么?OHOHC18(ODS)強弱疏水性SiO2第十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

疏水性

如果樣品有CH3CH2CH2---:

碳鏈

:

芳香基如果樣品有COOH :

羧基NH2

:

氨基OH :

羥基作用力強作用力弱第十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日反相色譜流動相的選擇

優(yōu)化水相（緩沖液）和有機相的比例非常重要 甲醇，乙腈和

THF

是常用的有機溶劑。在有緩沖液的情況下，緩沖液的濃度和pH值非常重要。第十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日流動相極性變化對分離的影響20%

水

30%

水

40%

水1:

對羥基苯甲酸甲酯2:

對羥基苯甲酸乙酯3:

對羥基苯甲酸丙酯4:

對羥基苯甲酸丁酯有機相:甲醇第二十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日固定相極性變化對分離的影響C18(ODS)強樣品SiO2C8樣品一般SiO2樣品C4弱SiO2第二十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日分析條件柱:Shim-packCLC-ODS流動相:MeOH:H2O=7:3流速:1.0mL/min溫度:40℃進樣體積:10L檢測器:UV-254nm峰1.苯甲酸甲酯2.苯甲酸乙酯3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯ODSC8

TMS固定相極性變化對分離的影響第二十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日反相離子對色譜

原理：樣品離子與流動相中離子對試劑的反離子生成疏水性離子對，而為反相色譜固定相保留固定相：疏水性的苯乙烯/二乙烯基苯樹脂或鍵合的硅膠流動相：水（緩沖液）+離子對試劑+有機溶劑離子對試劑：所帶電荷與待測離子相反第二十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

陰離子化合物氫氧化四丁基銨溴化四丁基銨陽離子化合物丁烷基磺酸鈉（C4）戊烷基磺酸鈉（C5）己烷基磺酸鈉（C6）庚烷基磺酸鈉（C7）辛烷基磺酸鈉（C8）癸烷基磺酸鈉（C10）十二烷基磺酸鈉

（SDS）常用離子對試劑第二十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日反相離子對色譜流動相的選擇離子對試劑的類型所帶電荷與待測物質(zhì)相反離子對試劑的濃度

10-4~10-2mol/L

在一定范圍內(nèi)，濃度越大，被分離物的保留值越大流動相的

pH第二十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

—

陰陽離子表面活性劑—

大分子脂肪酸—

烷基磺酸鹽和芳香硫酸鹽—

含氮化合物—

生物堿—

水溶性維生素—

酚類

有機酸、堿、鹽的分離包括：反相離子對色譜應(yīng)用第二十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日正相色譜

硅膠柱:

常用氰基柱:

常用氨基柱:

分析糖二醇基柱:

分析蛋白質(zhì)硅膠SiO2SiO2-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)化學(xué)鍵合相——流動相的極性小于固定相的極性第二十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日相互作用力是什么?OHHOSiOHSiOH強弱非常弱氫鍵力第二十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

氫鍵力

如果樣品有COOH

:羧基NH2

:氨基OH

:羥基氫鍵力強如果樣品沒有任何官能團，如碳水化合物如果樣品有大的基團,由于空間位阻氫鍵力弱第二十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日正相模式下流動相的選擇

主要試劑烷烴

（戊烷,己烷,庚烷,辛烷）芳香烴

（苯,甲苯,二甲苯）二氯甲烷氯仿四氯化碳輔助試劑甲基-t-丁基醚

（MTBE），

乙醚，四氫呋喃

（THF），二氧雜環(huán)乙烷，

嘧啶，乙酸乙酯，乙腈，丙酮，異丙醇，乙醇，甲醇為了調(diào)整保留時間，可以選擇主要試劑然后再加入輔助試劑。第三十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日流動相極性變化對分離的影響0%甲醇

2%甲醇

5%

甲醇

1:

鄰苯二甲酸二辛酯

2:

鄰苯二甲酸二丁酯

3:

鄰苯二甲酸二乙酯

4:

鄰苯二甲酸二甲酯

主要試劑

:己烷第三十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

反相色譜

流動相極性大于固定相極性適用于能溶于水/有機混合物的中性或非離子化合物分離正相色譜

流動相極性小于固定相極性適用于不溶于水/有機混合液的親脂樣品、異構(gòu)體混合物的分離和制備HPLC反相色譜與正相色譜的對比第三十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期日

反相保留時間重現(xiàn)性好固定相耐用正相對立體異構(gòu)體有很好的分離（VitaminE等）保留時間重現(xiàn)性稍差

反相色譜與正相色譜的對比