刺參種質(zhì)資源調(diào)查技術(shù)規(guī)范

刺參種質(zhì)資源調(diào)查技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了刺參種質(zhì)資源調(diào)查技術(shù)規(guī)范的術(shù)語和定義、資源分布調(diào)查、生理性狀調(diào)查、分子遺傳學(xué)特性調(diào)查、環(huán)境現(xiàn)狀調(diào)查、報(bào)告編制。本標(biāo)準(zhǔn)適用于沿海范圍內(nèi)刺參種質(zhì)資源的調(diào)查。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3097海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定GB5009.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定GB5009.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測定GB5009.6食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測定GB/T12763.4海洋調(diào)查規(guī)范第4部分：海水化學(xué)要素調(diào)查GB/T12763.6海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋生物調(diào)查GB/T12763.8海洋調(diào)查規(guī)范第8部分：海洋地質(zhì)地球物理調(diào)查GB17378（所有部分）海洋監(jiān)測規(guī)范GB18668海洋沉積物質(zhì)量GB/T34748水產(chǎn)種質(zhì)資源基因組DNA的微衛(wèi)星分析DB37/T2292刺參（種質(zhì)）術(shù)語和定義GB/T34748界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。微衛(wèi)星microsatellite真核生物基因組中由兩個或多個核苷酸重復(fù)排列形成的短串聯(lián)重復(fù)序列。[GB/T34748—2017，定義3.1]資源分布調(diào)查站位布設(shè)站位布設(shè)應(yīng)遵循以下原則：根據(jù)刺參的生活習(xí)性，調(diào)查海域的地形、地質(zhì)條件、水動力條件、海藻床分布以及人工魚礁投放情況；根據(jù)隨機(jī)均勻原則，可先進(jìn)行預(yù)調(diào)查，了解刺參分布和密度；站位布設(shè)均勻布設(shè)，在人工魚礁區(qū)、海藻床或礁石區(qū)應(yīng)加密站位；若調(diào)查海域邊緣站位刺參數(shù)量較大，可適當(dāng)外擴(kuò)。調(diào)查方法圓周法在形狀不規(guī)則、海底地形較為復(fù)雜或有人工魚礁投放的調(diào)查海域，可使用圓周法。每個站位采用圓周法確定樣方面積。使用一條長約3.0m的可拉伸繩索（繩索上帶有距離標(biāo)識），一端為底部加重的金屬桿，能夠較為穩(wěn)定地垂直固定到海底，另一端為質(zhì)量較輕的金屬桿，方便潛水員移動，金屬桿高度應(yīng)高于海底凸出物。采樣時，潛水員攜帶質(zhì)量較輕的金屬桿將繩索拉直垂直于海底做圓周運(yùn)動，一個圓周為一個樣方。根據(jù)刺參分布密度，潛水員在水下可進(jìn)行半徑1.0m、2.0m、3.0m圓形樣方內(nèi)的樣品采集。條帶法條帶法適用于形狀規(guī)則、海底地形較為簡單的調(diào)查海域。使用兩條長約10m的繩索，繩索中間和兩端均有金屬桿，可固定到海底，兩條繩索的金屬桿之間系有長度約2m的繩索。采樣時，潛水員在水下將每條繩索拉直，將金屬桿固定于海底，確保各繩索夾角為90°，采集樣方內(nèi)樣品。調(diào)查時間根據(jù)刺參生活習(xí)性，在每年4月～5月和10月～11月進(jìn)行。樣品采集每個點(diǎn)位或條帶內(nèi)的刺參需全部采集，并進(jìn)行編號。分布密度計(jì)算對樣品的數(shù)量進(jìn)行測定，按公式（1）計(jì)算刺參資源分布密度。 （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動公式\*ARABIC1）式中：d——刺參資源分布密度（只/m2）；N——刺參個數(shù)（只）；M——調(diào)查海域面積（m2）。生理性狀調(diào)查調(diào)查項(xiàng)目調(diào)查項(xiàng)目包括：體長、體重、含水率、體成分（蛋白質(zhì)、脂肪、灰分）、重金屬（銅、鎘、鉻、鉛、汞、砷）。分析方法體長、體重按DB37/T2292規(guī)定的方法執(zhí)行。含水率按GB5009.3規(guī)定的方法執(zhí)行。蛋白質(zhì)按GB5009.5規(guī)定的方法執(zhí)行。脂肪按GB5009.6規(guī)定的方法執(zhí)行。灰分按GB5009.4規(guī)定的方法執(zhí)行。重金屬（銅、鎘、鉻、鉛、汞、砷）按GB17378.6規(guī)定的方法執(zhí)行。分子遺傳學(xué)特性調(diào)查樣品采集刺參分子遺傳學(xué)特性樣品可從生理性狀測定后的樣本中隨機(jī)取樣，每個樣品的抽樣量不少于30只。若樣品數(shù)量較少，可將鄰近多個站位的樣品合為1個樣品。樣品采集后，立即儲存于液氮中，上岸后立即轉(zhuǎn)移至-70℃冰箱中保存。調(diào)查項(xiàng)目微衛(wèi)星、16SrRNA。分析方法按DB37/T2292規(guī)定的方法執(zhí)行。環(huán)境現(xiàn)狀調(diào)查站位布設(shè)原則站位布設(shè)應(yīng)遵循以下原則：布設(shè)的站位應(yīng)具有代表性；調(diào)查站位按網(wǎng)格均勻分布，并能覆蓋調(diào)查區(qū)域；若調(diào)查區(qū)域存在污水排放、工程建設(shè)、海水養(yǎng)殖等區(qū)域，適當(dāng)增加區(qū)域站位密度。采樣層次按GB/T12763.4規(guī)定的方法執(zhí)行。調(diào)查項(xiàng)目海水環(huán)境水溫、水色、透明度、鹽度、pH、懸浮物、溶解氧、化學(xué)需氧量、活性磷酸鹽、亞硝酸鹽-氮、硝酸鹽-氮、氨-氮、石油類、銅、鋅、鉻、汞、鎘、鉛、砷、葉綠素-a。沉積環(huán)境鋅、鉻、汞、銅、鎘、鉛、砷、石油類、硫化物、有機(jī)碳、粒度。生物生態(tài)細(xì)菌總數(shù)、浮游植物、浮游動物、大型底棲生物。調(diào)查時間與頻率與刺參資源存量分布調(diào)查同步進(jìn)行。樣品采集與處理按GB17378.3規(guī)定的方法執(zhí)行。質(zhì)量保證措施按GB17378.1、GB17378.2規(guī)定的方法執(zhí)行。分析方法按GB/T12763.4、GB/T12763.6、GB/T12763.8和GB17378.4、GB17378.5、GB17378.7規(guī)定的方法執(zhí)行。分析評價采用單因子評價，評價標(biāo)準(zhǔn)按GB3097和GB