RDC基因芯片診斷方法的建立

豬呼吸道疾病綜合征基因芯片診斷方法的建立與應(yīng)用高淑霞2,4吳時友1尹燕博1莊文忠3牛鐘相2(1.山東澳蘭生物工程研究院,山東青島261001;2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院,山東泰安271018;3.山東省農(nóng)業(yè)廳,山東濟南250013;4.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院山東濟南250100)摘要：根據(jù)Genbank發(fā)表的核酸序列，分別設(shè)計合成流感病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病病毒的特異引物,應(yīng)用PCR（或RT-PCR）分別擴增各病毒的特異片斷，并克隆到pMD18-TSimpleVector構(gòu)建重組質(zhì)粒，用于各病毒探針的制備。將各探針按一定的陣列點加到硝酸纖維素膜上，制備成低密度基因芯片。在多重PCR過程中，用生物素標記的dUTP(Bio-11-dUTP)對待檢樣品進行標記，擴增產(chǎn)物與基因芯片雜交，最后用掃描儀進行讀片和分析。對臨床疑似病例檢測結(jié)果表明，該方法可以同時檢測待檢樣品中4種病毒的存在情況，與PCR方法相比，顯示了較高的靈敏度。該方法的建立，為批量樣品的檢測和豬呼吸道疾病綜合征流行病學(xué)調(diào)查提供了一種快速、靈敏和高通量的手段。關(guān)鍵詞：呼吸道疾病綜合征；基因芯片；多重PCR；核酸雜交LowDensityDNAarrayforDiagnosingPorcineRespiratoryDiseaseComplexGAOShuxia2,4,WUShiyou1,YINYanbo1,ZHUANGWenzhong3,NIUZhongxiang2(1ShandongOlandInstituteofBioengineering,Qingdao261001;2CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShandongAgricultureUniversity,Tai’an2710183.ShandongAgricultureoffice,Jinan250013;4ShandongAcademyofAgricultureScience,250100)Abstract：BasedonthepublishednucleotidesequencesofInfluenzaAvirus,Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,Porcinecirocovirus-2andPorcinepseudorabiesvirus,4pairsofprimersweredesigned.AndconservedDNA(orcDNA)fragmentsofthe4virusesobtainedbyusingPCR(orRT-PCR),wereligatedwithpMD18-TSimpleVectortoconstructrecombinantplasmidforDNAprobepreparation.TherecoveredDNAprobeswerespottedonlocatedsitesonnitrocellulosefiltertopreparelowdensityDNAarray.DuringtheprocessofmultiplexPCR,sampleswerelabeledbyBiotin-11-dUTP.ThenthelabeledPCRproductswerehybridizedwithDNAarrays,andthehybridizationsignalswerescannedandanalyzedbyscanningdeviceandsoftware.TheresultsshowedthatthisDNAarraycouldidentifyanddistinguishthe4virusesinsamplessynchronouslyandwasmoresensitivethanPCRmethod.Thismethodcanbeuseforlabdiagnosis,epidemiologyinvestigationandquarantineofanimalandanimalproductsinalarge-scale.Keywords：Porcinerespiratorydiseasecomplex;DNAarray;multiplePCR;nucleotidehybridization*correspondingauthor：Email：豬呼吸道疾病綜合征（porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC）是九十年代中期在北美提出的，用來描述當時出現(xiàn)的一種呼吸道疾病，主要癥狀是：咳嗽和呼吸困難，并伴有采食量下降、生長停滯，常發(fā)生在肥育豬群。誘發(fā)此病的主要因素是：仔豬的早期隔離斷乳和以及斷乳后的多點飼養(yǎng)管理、呼吸道病毒（PRRSV、SIV、PRV）的感染和豬肺炎支原體的存在[1]。PRDC的病原因子既包括病毒,也包括細菌，其中PRRSV、肺炎支原體和PCV-2能夠直接危害呼吸道免疫系統(tǒng)，是PRDC的主要影響因子[2]。由于多病原的混合感染，使病情復(fù)雜化，增加了診斷和防治難度，給從業(yè)者造成嚴重的經(jīng)濟損失。作者簡介：高淑霞（1969－），女，在讀博士，主要從事動物微生物與免疫學(xué)方面的研究?；痦椖浚荷綎|科學(xué)技術(shù)廳資助項目（項目編號：022023103）*通訊為此，我們采用新近發(fā)展起來的基因芯片技術(shù)，借助多重PCR、核酸雜交以及核酸標記技術(shù),建立了可同時檢測豬流感病毒（swineinfluenzavirus,SIV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)、豬圓環(huán)病毒2型(porcinecirocovirus-2,PCV-2)和豬偽狂犬病病毒(porcinepsudorabiesvirus,PRV)基因芯片檢測方法。賤1窄材料薪與方粗法肅1.須1耳材料年1挪.消1.妖1道病毒使SI阻V裹、京PR搞RS桂V女、居PC散V丑-樣2突、稍PR移V三。（愿病毒繳分離雙株的莫來源方？秤）蕩1.藍1.尊2糧受體理菌撒E.尾c裙ol議i行J隱M1域09三由山展東澳貧蘭生鍋物工鏟程研傍究院易保存法。較1.脂1.途3爭主要緩試劑柄PC肌R試咬劑稱、魄RN達as所e死In靜hi計bi屬to恰r財、冰pM男D窩18猴-T模S及im鄉(xiāng)pl講e殃Ve巾ct城or柜、倘T有4猶DN強A國li窗ga耕se舉、引IP融TG砌、X唇-g錫al正購自燙大連用寶生景物椒；陸M-惠ML丸V重re殲ve及rs濫e槽tr省an安sc籠ri嫌pt參as衰e布為復(fù)Pr顫om晴eg星a端公司萍產(chǎn)品固；膠DN陡A梁re定co體ve斷r散ki脹t戲購自鹿V-外ge數(shù)ne剖生物餃技術(shù)道有限秩公司管；梁鮭魚葵精子氏DN好A迅為儀Si銷gm脅a銜公司英產(chǎn)品涌。討1.望2為方法股1.題2.燈1永引物疏設(shè)計態(tài)因根據(jù)裙Ge嫁nb各an反k宵發(fā)表暴的核痕酸序壘列，葛分別怎針對妖A型剃流感套病毒嬸的M儉基因楚、P迫RR術(shù)SV胖的N逼基因蘇（O沃RF貧7）屬、P刺CV勺-2游的蹤ca偏p基萌因壤、P腿RV略的T拼K基棕因設(shè)償計引虧物，鑄由上噴海賽貢百盛慚合成計。引歲物序拳列以平及擴錢增片規(guī)段長社度見奮表難1跨。啄表箭1猾槐引物伶序列勞及擴近增片忍段長樹度容Ta撓bl田e括1貴pr懇im訴er輪s錯eq扭ue仿nc誓e須an核d亦pr鼓od支uc均t軌le妹ng鴿th稈病毒舍Vi練ru筋s云引物辦序列呆Pr皂im賊er閱s虛eq銷ue膛nc敞e順擴增換片段工長度迎馬Pr揮od沃uc論t據(jù)le斗ng繞th餓(團bp叮)句SI擔V角5-為C般TG欲G歸TG伐C滋AC洋T包TG跳C興CA加G煤TT紫G課-3博換5-擱GA守T添CA緒A毯GA拖A代TC刮C老AC爪A朋AT豎A看TC加-3料46摟0贊PR膏RS累V釀5餓’始-渴GC嬌TG瞧GG園TA稼AG昨AT耳CA叨TC協(xié)GC釣-3策’伯5綢’撇-有AC姑AC阿GG恐TC雀GC靈CC料TA文AT裹T退-蝶3’負細40肢8業(yè)PC萍V-已2曬5’肝-記TG苗GC器TG款CC汁CT掃GG傷GA撈TG伶AT乳CT固A深-3柱’晃5’繳-階TC艷CT翻AC悔CA就CT雁CC出CG繡CT汪AT漲TT移C塊-3倚’傍56鞏5架PR盜V偽5資’專-樂CA抬GA稀AC曬GG名CA賤GC哪CT剝GA向GC曬G降-3欄’剖5侵’畢-篇CC寸GA谷AG悉AG灑GG蝴TG頃TC刻CT淚GG固AG第C份-3競’斃54傳5近1.弟2.即2出重疊組質(zhì)農(nóng)粒的稿構(gòu)建沈采用襖PC撐R圈或岸RT島-P其CR懼獲得我各病鴿毒核代酸的獲特異黑片段斧，連旬接到買pM吹D臂18重-T擠S亮im訴pl坡e偷ve播ct臺or磁構(gòu)建昌重組卷質(zhì)粒刪，轉(zhuǎn)雁化大途腸桿雁菌高JM理10治9逢感受茶態(tài)細參胞，嚷用I飯PT狹G/境X-捕ga脖l/禮Am桿p選更擇平綢板進介行藍親白斑清篩選詢。經(jīng)椒PC壘R鑒遵定為蝶陽性蓮的質(zhì)自粒由悲上海猶鼎安唉生物作公司會測序良,堡序列職正確岡的重值組質(zhì)歉粒擴困大培搜養(yǎng)用麻于制慕備探克針卡。競1.男2.震3掌芯顫片的蠟制備其1.底2.脹3.載1摟芯片吃設(shè)計括讀芯片俊采用也4昨×我4鴿陣列曾，每暖條探前針、新陽性彼對照晉、陰蕩性對廚照和貞空白蘇對照哄各零2奸個位券點。喘陽性迫對照廢為豬鉆血紅柿蛋白求珠蛋鍛白基呼因片誼段（爬S燥），蘆不管微試驗每結(jié)果惑怎樣白，該翼位點妨都能亮產(chǎn)生獅可被蠟識別搜的信俘號彈[3疼]咬。田陰性詳對照勒是一撲段與搭靶基驕因同土源性午較低輔的雞繭血紅轎蛋白乞珠蛋棋白基裁因片更段（謀C）羞，太不管酒試驗刃結(jié)果末怎樣洋，該進位點曾都不診會產(chǎn)來生可駕被識戲別的持信號俊[3善]鐮。空笑白對盯照（山B）延為點發(fā)樣緩責沖液河。院S危SI鵝V反PR孔RS習(xí)V俊PC蛙V危2貿(mào)S保SI籃V蜘PR額RS絞V持PC事V日2柿PR河V擇B偉C背PR奶V扒B垮C執(zhí)圖忠1屯芯專片陣嫂列分段布圖樂Fi編g1驅(qū)A黑rr霸ay蕉d績is渣tr煩ib紙ut親io懂n躍1.列2.籮3.深2到探針簽的制希備造分別泳提取砍各重城組質(zhì)仁粒，雷PC初R蜓擴增鴨目的染片段啞，擴蜘增產(chǎn)割物切疲膠回扇收，院測定秀濃度競，調(diào)賄整濃性度約駁為塞20爐0n染g/轉(zhuǎn)μ勇l峰，宏10筐0溫℃另變性靈5m孤in釘，冰典浴銅5m韻in唇，繳-2凝0婦℃煉保存喇備用肆。躍1.失2.摘3.隸2丘點樣挎將預(yù)蹤處理定的硝取酸纖糧維素秀膜剪逆切固僅定后災(zāi)，按攀圖可1嫁設(shè)計亮好的章排列爆方式丸將各李探針費和對猾照用鬼芯片憐點樣償儀進分行點刺樣，莖80事℃版固定逼2h搶，密腿封，挖4驕℃泉保存惕備用奸。摸1.騰2.幟4老待讓檢樣戚品的復(fù)制備胖和標真記盆1.攀2.夸4.錄1截病毒稅核酸辭的提中取撓將屠臨床叉疑似頓病例臨的肺膛組織絲用P竄BS案勻漿確稀釋昌（慣1副∶泰5楚比例兩），元-2定0痛℃鐘凍融吼3次覽，4局℃謙12槳00垂0r液/m念in邊離心擦10陽mi釋n，舉吸取掌上清怪4坑00卻μ梅l全，加癢入6秧00陸μ前l(fā)積裂解卵液，陣震蕩蘭混勻財后靜往置吩5m河in訊，加槳入弦40童0搬μ衡l園氯仿完，震準蕩混爽勻湊,早12安00券0r膠pm聰離心蜓10傍mi盯n骨，取艱上清叛，加磚入等摧量目-2拉0庫℃仗預(yù)冷舞的異大丙醇墊，室臺溫沉何淀爭30黨mi蕩n卸，顧75極%磚乙醇銅洗滌揚一次萍，沉孫淀自美然干受燥。曲1.量2.圣4.次2您反轉(zhuǎn)條錄哪用S籠IV敲和P恰RR緊SV有兩對悲引物拜進行像反轉(zhuǎn)本錄。噸反轉(zhuǎn)愈錄體聞系：渴5歷×趁Bu唉ff閥er溉4腳μ脫l楚，饑10俊mM歐dN印TP滴2礎(chǔ)μ凈l匹，蠅M-悠ML辦V蹦re殖ve圓rs胃e管tr字an篇sc引ri雷pt饑as暈e律20已0u恩，折RN歷as語e猴In升hi煌bi朝to返r刪40者u沿，加牽DE硬PC印H緩2典O贏至劇20惕μ群l耳，鳳42尺℃紋反轉(zhuǎn)參錄駱1h庸。棒1.研2.豈4.甘3萬樣品溪標記傲取反寺轉(zhuǎn)錄姐產(chǎn)物雨2.賀0叉μ妥l艙，葛用混株合引康物進另行P繪CR注擴增浴，在瞇此過臂程中偽摻入戰(zhàn)Bi蒜ot層in敏-1乎1-壩dU微TP廉。伸PC羽R塑體系輔為：善10潑×殊Bu某f青fe互r懸2.咐5孕μ瘡l碗，午Mg丸2+雹(2甲5m龜mo拾l(fā))陷即3驗.0伙μ辯l品，曬dN非TP協(xié)(2網(wǎng).5百mm虛ol劇，恢dT灰TP容1.裂8榮mm筋ol暢)與3.史0震μ受l丟，當dU鞋TP柄3燭μ登l,噸T軟aq礎(chǔ)D班NA跌p述ol絨ym怎er閑as花e橫(故5U凈/霜μ丘l)蝕1但.0戰(zhàn)μ抱l控，混蓄合引對物參4楚μ勺l眨，R癥T產(chǎn)勵物浴2.位0距μ屋l黑，炮加夾dd抖H貢2裹O巾至咸25軟μ遞l載。循曠環(huán)參拋數(shù)為弓：架95礎(chǔ)℃倍預(yù)變短性淚5m燙in??；故9欣5貧℃捎變性鍋30順s鏈，遺56縫℃此退火摸40是s傘，臨72題℃恐延伸唱60擁s被，場30茂個循至環(huán)；否72信℃虧終延談伸膽5m床in毒。群1.欣2.于5乖標槽記樣丹品與久芯片族雜交啟雜交欺過程賴在芯斧片雜屋交儀憐上進匆行。晨1.凡2.瓣5.勇1蠟預(yù)雜煉交亡每片刻芯片攝加凈45溜0μ醒l廈預(yù)雜祝交液槍，堅42腐℃免預(yù)雜蠅交曠40預(yù)mi膽n傻。捆1.湊2.免5.通2乳雜交項棄掉玻預(yù)雜鋤交液賠，將路20璃μl御標記舊P割CR漂產(chǎn)物濤l0伍0枕℃飽變性幅5m占in灣，置拒冰水旨中仿5m狹in恰，與殿40備0μ順l亡雜交撇液混獸合，妹加到餐芯片圓盒中潮。估58催℃咳雜交鋒1h輸。低1.咽2.滾5.鋼3耳洗滌鳥用戰(zhàn)2格×菠SS灰C于、裳0.到1%存SD祥S揀和務(wù)0.誦1們×萬SS敞C雷、踐0.舒1%變SD怖S糠各禮洗滌山3具次，貧每次燥1m桿in呼。換1.灣2.輪5.細4門酶聯(lián)端加酶且聯(lián)液禾（鏈限親和諸素堿編性磷尊酸酶部），賠酶聯(lián)瞞20單mi捎n第。午1.捏2.蛋5.尺5誓顯色重酶聯(lián)掏結(jié)束判洗滌溉三次娘后，社加底顧物液掘(B駝CI東P/賄NB抹T)愿顯色辟15沃mi腰n疾，用錄雙蒸宵水充吵分沖糠洗芯納片終久止顯持色，末干燥震。念1.然2.撈5.扁6蒸雜孫交結(jié)叛果的金檢測奧及結(jié)夏果判委定來用芯餅片掃林描儀按進行金讀片課，作守為監(jiān)誼測系貍統(tǒng)，欠陽性代對照長呈陽戀性，駕陰性初和空渠白對蹄照呈勁陰性垃，檢閱測結(jié)胡果有朱效。像通過飲對陽朵性對稈照雜椒交芯濫片各薪位點顫信號壤值的邁統(tǒng)計晌，制騙定以灘下判講定標舊準：筒信號拉值竹≤芹0.況1冷判定旱為陰家性，嚷≥漆0.抬2騎判定殺為陽疤性，質(zhì)介于鎮(zhèn)0.論1抗和尖0.野2澤之間低判定啦為可禽疑，宜同時撤輸出摧檢測完報告惕。共2腎結(jié)果韻2.茄1寒陽性女重組糞質(zhì)?？虻蔫b脾定嶺2.慌1賄.1疏很PC梯R眼鑒定批堿法打小量稠提取經(jīng)質(zhì)粒說，分甚別用穩(wěn)相應(yīng)須引物火擴增史，摔PC侄R察產(chǎn)物盒電泳穗結(jié)果對顯示嶄重組改質(zhì)粒羅構(gòu)建趟成功欠，結(jié)絡(luò)果見貢圖2顯。華1貫博2尤舌3搭倡4干鉗Mbp20001000500100bp20001000500100找圖2凝各括質(zhì)粒立PC荷R產(chǎn)始物電歲泳結(jié)韻果床Fi漢g2南P勤CR聽r奇es斬ul歲ts配o要f棕re兔co白mb拉in煉an粘ts踢M,回D從NA垮M陳ar州ke承r堵DL大2,冰00優(yōu)0壩；赤1-狂4狠分別舊為S討IV牢、敏PR低RS出V罰、藥PC判V-浩2汽、怎PR鹿V藝的重膜組質(zhì)吃粒窯PC慢R矛產(chǎn)物徐。激2.由1奴.2展測蜻序鑒損定評將重劫組質(zhì)牲粒的隆測序共結(jié)果炸與G阻en還ba批nk懶已發(fā)妖表的縱序列奔進行鍬同源劈比較轎，結(jié)鴿果顯濫示插虎入片搭段與不對應(yīng)輪的病素毒序濁列的由同源麗性都讀在9存8沖%在以上匯,晃說明翅插入待片段程為病打毒的卻特異俊片段擦。們2.族2浩芯刺片特拴異性喪試驗仍結(jié)果陳分別如提取氣4種拳病毒遠的核衣酸，奮用混功合引撫物進靜行袋RT喇-跪標記競PC綱R何，同改時添全加陽習(xí)性對列照的訴質(zhì)粒蜘模板宣。雜班交后見的掃郊描結(jié)秤果見衛(wèi)圖3莖。紅從圖批3可反見，偽每片翼芯片依陽性旅對照憐的信泊號值協(xié)都蓄在凝0.幣38鍛以上愿，呈投陽性老；陰園性對涉照和潮空白滔對照格的信鼻號值秤≤涼0廈.堵1裙，呈茫陰性火；各畫病毒片相應(yīng)垃位點永的信夸號值善都漂在釀0.扣36補以上庫，伐呈陽舅性；用無非膠特異葡性雜央交信啊號出念現(xiàn)。習(xí)金圖梨3匪特異界性試喇驗幸Fi垂g邊3癢sp莖ec遷if寫ic僻it窗y裕an漁al虧ys爬is涂o另f隔DN什Aa橡rr頑ay狐2.興3駛芯劇片敏役感性鐮試驗阻結(jié)果明堿法唉小量衰提取雕pM榮D1監(jiān)8持-遙T-該SI虜V廊質(zhì)粒播，測押定質(zhì)北粒就DN選A熄濃度已為佳70攀ng舊/μ狐l灑，進僅行運10退倍遞集增稀氏釋映,旅對各攝稀釋翠度分乎別進企行標凳記椒PC握R你后與浸芯片央雜交西。結(jié)默果顯厘示，江芯片獨可以兔檢測闖到圍10命-1手0芒稀釋夢度，悄同時鐵的冷P遲CR肥瀉方法旱可以司檢測排到趕10礙-7矮。在恰本試曠驗中杰芯片追的靈頂敏度違比爛PC示R崖高匹3哨個稀易釋度萄,可愿以檢茫測出帶7f悅g的俗質(zhì)粒俱DN事A模前板。姐2.直4絞臨咬床疑裕似病籠料檢餃測民結(jié)果死表煌2左浮臨床皆病料決檢測餓結(jié)果煩Ta重bl貌e2榮D負NA潤ar思ra顏y止D管et油ec桿ti甩on拋r特es桃ul志ts俗o戒f曲ti緩ss碎ue影s忘am攔pl唐e銀s單病毒日Vi閥ru咽s眾病料句數(shù)糕Nu滑mb煎er鉗o江f屑ti蘭ss徒ue翼s尊am豎pl俗es雜君陽性華病料瓦數(shù)凍Nu菜mb站er倘o櫻f睜po副si底ti希ve救束s刊am跑pl貌e旦s宗檢出點率%畝Po日si鐘ti狀ve伸r偏at角e廊of析敏ti仍ss瓜ue侮s幻am幸pl銹es鄭PC頭R辣DN瓦Aa更rr顧ay杏PC映R屑DN沃Aa在rr布ay車SI咳V重60若4妹5遺(4務(wù)/6晚0)負7話脖(5電/6簽0)霞8襖PR承RS皇V達22詳24完(2津2/事60榨)赤37魂(2愚4/采60楊)排40稻PC孤V-羨2逮23介26湖(2狐3/葛60晨)摸38附(2亦6/披60玩)鵲43蛇PR怪V朱12妖15圈(1熄2/探60風)終20纖(1秒5/塵60禍)節(jié)25白對6戶0份噴臨床端病料胞的檢扇測結(jié)濁果顯珠示，焰基因盜芯片統(tǒng)的檢已出率葛高于勒PC炕R絹方法衰,見靜表1誤。P劫CV復(fù)-2某和P與RR例SV禿的檢睬出率憐最高膚（分念別為舉43艷%和繁40外%）狂，而池且檢魔出的棒陽性妻病料裝多為旁兩種以或兩綱種以慰上混巡合感傲染，吃其中城同時煮檢出蔬PR尋RS道V嗎和民PC眼V-穿2床的病憶例為壺19冶例，杯約占純被檢逐病料暗的3喉2%譜（1彼9伙/6搶0威），旺同時睛檢出殃P(guān)R引RS悟V、裹PC毛V-臉2和辦PR蔬V的恒病例進為5盤例，膨約占伸被檢賣病料食的8物%(傭5/看60煩)。虜說明浩PR筑DC稠主要局是由覆多病轉(zhuǎn)原混救合感返染引塔起的培。錢3龜討論趕隨著買養(yǎng)豬鈴業(yè)的圈發(fā)展燥，疾框病的謎問題救也變美得愈惹來愈顧突出咸。近萄年來塊，豬夏呼吸捕道疾票病的驚發(fā)生縱和流派行日扛益嚴掃重，運成為英養(yǎng)豬愧生產(chǎn)碌的主奇要問垃題。弦由于俱PR塊DC明是由增多病熱原混拍合感凱染引惜起的填，已儲有的略實驗闊室檢承測方號法每科次試順驗只較能檢匯測一嶄種病歌毒，句不能溫滿足筒混合音感染媽病料括的批腹量、匪快速明、靈泰敏、智平行完的檢株測要老求。輛基因曲芯片予是新卷近發(fā)太展起蔑來的造一項套技術(shù)宅，撲將核激酸探娃針以極大規(guī)潤模陣嚇列的毀形式尸有序腐地固某定于事面積伙很小抄的固蹈體介平質(zhì)表處面，帳然后蹄與已橡標記幟的待也測生漁物樣獎品中龜?shù)陌猩攴肿訐Q雜交補，通捕過激影光共恐聚焦訓(xùn)掃描茅或電首荷耦霉聯(lián)攝茅影像森機等姓儀器來對雜斯交信閑號的懇強度嫁進行嗚檢測廣分析鳳，從炊而判畝斷樣政品中胳靶分易子的唉序列專或數(shù)撕量?？富蚬庑酒嵓夹g(shù)款為生澡命科哄學(xué)研線究提姓供了勇一個嗽高通米量、威大規(guī)飾模平頑行處香理樣始品的睜技術(shù)柄平臺攤，籍已廣塑泛應(yīng)咬用于任基因團圖譜辛繪制財、姨基因口表達斜譜分共析、遣功能繩基因捕組學(xué)腳研究令、疾挖病診綿斷、鐘藥物愁篩選匆、環(huán)擱境監(jiān)衣測等舌多個扔領(lǐng)域郊。啟與其附它研蹤究方判法比向較，屠具有束快速制、靈套敏、劇特異走和可唇批量自處理帳的優(yōu)碎勢。灣本研豈究根渠據(jù)已域發(fā)表濱的病對毒核橡酸序貿(mào)列，玉設(shè)計禍出可秘特異第擴增端其保竹守區(qū)選的引宵物，以將4劑種病磁毒的漏特異坐片段瓣作為掠探針零集成堂到同振一張鄙芯片笨上，寬一次卵試驗畜可以殺同時晝檢測燈樣品晚中的卻4種址病毒恥。本夏方法峽同時召引入臘了多仆重勸PC晃R糟、核順酸雜知交及麻核酸屬標記漿技術(shù)豆，降窗低了喘假性銜結(jié)果宮的出的現(xiàn)，蝴提高伸了檢種測的晌特異打性、柜靈敏頭性和傅工作壩效率啦。檢織測結(jié)施果顯把示基敘因芯梅片具留有良續(xù)好的剪特異燥性，濃靈敏幻度達蠻到7篇fg幻，比冒同時辜進行壤的P征CR咸高1乳00私0倍倚。臨嚴床檢帶測結(jié)您果表卵明，塊基因噸芯片攜的檢篩出率恥高于擴PC姐R方飄法，驕而且窗疑似饒病例竄多為亡混合梯感染卻。本巴方法臥的建插立，就為批驗量混洗合感敏染樣絮品的需檢測歲、相掉關(guān)疾賽病鑒旁別診悔斷以翻及P嶺RD望C妻流行略病學(xué)取調(diào)查瞧提供蛛了一蘋種快雞速、腰靈敏敘和高便通量朝的手頂段。件致謝派：本地試驗開在山被東澳彈蘭生綢物工吃程研壇究院微分子院生物濕學(xué)實吩驗室眉完成痕，期娃間得跡到了尋鄭彤珠、韓負麗敏怒等實從驗室佩人員湊的大汽力支鼻持和科幫助女，在米此對鳴他們礎(chǔ)表示陶誠摯吧的謝濃意。掘參考獵文獻鞠[1講]訪Er勉ne剝st炕S助an腹fo作rd業(yè).傍Co肥mp押on罰en猴ts簽o窩f錢re近sp伶ir竟at告or午y帆co雀mp扛le襯x.泛[間J]房P安ig仿I略nt晝er董na踏ti也on爬al鍵.艱