手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程

PAGEPAGE1手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程第一篇：手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程手部微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程（SOP）一、適用范圍1．評價醫(yī)務(wù)人員洗手、衛(wèi)生手消毒、外科手消毒的效果。2．懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手的傳播有關(guān)時。二、監(jiān)測時機在接觸患者前或進行診療活動前采樣。三、采集方法i．被檢人洗手或手消毒后，在接觸患者前或進行診療活動前采樣。2．被檢人將雙手伸出，五指并攏。3。檢查者取2支無菌棉拭子，并浸于含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液中。4．取_支棉拭子在一只手手指曲面，從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭予；按同樣方法用另一支棉拭予涂擦另一只手。5．剪去操作者手接觸部位，將2支棉拭子投入10ral含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。四、標本檢測(一)帶菌量檢測(平皿傾注法)1．將采樣管在混勻器上震蕩20XX用力振打80次左右。2．將無菌吸管分別吸取lmJ待檢樣品接種于2個直徑為90mm無菌平皿中。3．再加入已熔化的45-48℃的營養(yǎng)瓊脂15．18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固。4．將平皿置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。5．計算公式：細菌總數(shù)(cfu／cm2)=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)／60(cm2)(二)細菌種類鑒定1．將無菌增菌肉湯培養(yǎng)液試管置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h。2．若無菌增菌肉湯培養(yǎng)液試管渾濁，應(yīng)根據(jù)實際情況選擇血平板、中國藍平板、雙S平板、麥康凱平板或各種商用快速篩選平板進行細菌接種。3．接種后將平板置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h，挑取可疑菌落進行微生物學鑒定，必要時做藥敏。六、注意事項1．結(jié)果判定：衛(wèi)生手消毒后細菌總數(shù)應(yīng)≤10cfu／cm2；外科手消毒細菌總數(shù)應(yīng)≤5cfu／cm2。2．應(yīng)根據(jù)所用方法，選擇含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液。3．傾注時溫度必須控制在45-48℃，溫度過高可致細菌死亡，過低則影響傾注效果。4，當懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手的傳播有關(guān)時，監(jiān)測目的在于考察實際工作中醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生狀況，雖然同樣在接觸患者前或進行診療活動前采樣，但醫(yī)務(wù)人員不一定進行了手衛(wèi)生。5．當懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)或流行與手傳播有關(guān)時目標微生物的監(jiān)測只能定性不能定量。主要參考文獻：中華人民共和國消毒技術(shù)規(guī)范(20XX年版)醫(yī)院感染管理辦法(20XX年)環(huán)境微生物監(jiān)測標準操作規(guī)程（SOP）一、適用范圍監(jiān)測消毒液(含氯消毒液和戊二醛等)細菌學情況。二、監(jiān)測時機使用中的消毒液。三、基本方法瓊脂傾注法(細菌學)。四、基本試劑1．PBS緩沖液(無水磷酸氫二鈉2．85g，磷酸二氫鉀1．36g，蒸餾水1000m1)。2．緩沖液A(PBS緩沖液+甘氨酸2g)：用于醛類、碘類消毒劑。3．緩沖液B(PBS緩沖液謊代硫酸鈉趣)：用于過氧乙酸、含氯制劑。五、操作步驟(一)細菌學監(jiān)測1．用無菌移液管吸收使用中消毒液1m1，加入9ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液中，充分混勻，作用約10min。2．再用無菌吸管分別吸取上述lml的待檢樣本，置于2個直徑為90mm的滅菌平皿內(nèi)。3．加入已熔化的45-48℃的營養(yǎng)瓊脂16一18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固。4．其中一個平板置于(25±1)℃溫箱培養(yǎng)7日，觀察霉菌生長情況；另一個平板置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)72h，記數(shù)菌落數(shù)，必要時做致病菌(金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌等)的檢測。5．計算公式：消毒液染菌量(cfu／m1)=每個平板上的菌落數(shù)×10(二)細菌種類鑒定1．從營養(yǎng)瓊脂中挑取可疑菌落，根據(jù)實際情況可選擇血平板、中國藍平板、雙S平板、麥康凱平板或各種商用快速篩選平板進行細菌接種。2．接種后將平板置于(36±1)℃溫箱培養(yǎng)24-48h，挑取可疑菌落進行微生物學鑒定，必要時做藥敏與分子生物學分型。六、注意事項1消毒液染菌量結(jié)果應(yīng)≤100cfu／ml，不得檢出致病菌。2必須選擇含相應(yīng)中和劑的稀釋液進行采樣，稀釋液與消毒液作用時間不少于10min。3傾注時瓊脂溫度保持在45-48℃，溫度過高可致細菌死亡，過低則影響傾注效果。中華人民共和國消毒技術(shù)規(guī)范(20XX年版)醫(yī)院感染管理辦法(20XX年)新生兒保溫箱清洗消毒標準操作規(guī)程（SOP）一、新生兒暖箱類型保溫箱、藍光箱二、基本要求1、應(yīng)有1～2個備用暖箱用以周轉(zhuǎn)清潔消毒。2、暖箱和藍光箱應(yīng)當每日大晚班濕式清潔恒溫罩內(nèi)外表面，特殊感染患兒(包括多重耐藥菌)還應(yīng)消毒，一人用后一消毒。同一患兒長期連續(xù)使用暖箱和藍光箱時，應(yīng)當每周消毒一次，用后終末消毒。3、暖箱和藍光箱濕化液應(yīng)用滅菌水，每日更換。4、清潔消毒后備用的暖箱應(yīng)放在輔助區(qū)，注明清潔消毒日期、失效日期、清潔消毒人員姓名及檢查人員姓名。推薦有效期為2周，2周內(nèi)使用，可僅擦拭恒溫罩內(nèi)外表面。5、使用中的暖箱應(yīng)注明啟用日期。三、暖箱、藍光箱清潔消毒流程1、先拔掉暖箱電源，推至清潔消毒間(輔助區(qū))，濕式擦拭電線后將電線盤起掛好。2、先放掉水箱內(nèi)殘水后再清洗、浸泡消毒。3、取下恒溫罩上輸氧孔的塑料套、輸液軟墊，清洗、擦拭消毒。4、取出嬰兒床，清洗、消毒。5、取出床擱板上密封條，清洗、浸泡消毒。6、取出床擱板，清洗、消毒。7、暖箱若為箱外加水式，則逆時針擰下箱體外面的加水杯或用螺絲刀卸掉，用棉簽刷洗加水杯內(nèi)壁，然后清洗、消毒后沖凈，晾干備用。8、取下空氣過濾器蓋板，取出空氣過濾網(wǎng)，用清潔劑漂洗沖、冼晾干．齲能揉搓濾網(wǎng)。9、擦拭空氣過濾器蓋板里面表面及空氣輸入管內(nèi)外部。10、擦拭恒溫罩內(nèi)、外表面、機身內(nèi)、外表面和機架。11、更換手套，將所有浸泡消毒的物品取出、沖洗、擦干。12、按拆卸的反順序逐個裝回。安裝時注意部件放置的位置、方向，旋鈕應(yīng)鎖緊，密封條四周應(yīng)確保密封。13、安裝完畢，插上電源，測試性能是否良好。14、消毒用500mg／L含氯消毒液。主要參考文獻：[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．新生兒病室建設(shè)與管理指南(試行)[S]．20XX[2]中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術(shù)規(guī)范【S]．20XX．新生兒病房醫(yī)院感染管理標準操作規(guī)程（SOP）一、建筑布局1、新生兒室相對獨立，嬰兒有單獨的床位。每張床位占地面積不少于3平方米，床間距不少于1米。2、設(shè)置普通病室、隔離室、配奶問、沐浴問。3、病室和病室入口處設(shè)置手衛(wèi)生設(shè)施，每個新生兒床單元放置快速手消毒劑。二、工作人員管理1、新生兒病室嚴格限制非工作人員進入，患感染性疾病者嚴禁入室。2、工作人員入室前應(yīng)著清潔的工作服、工作鞋、洗手。3、手衛(wèi)生：執(zhí)行《洗手、衛(wèi)生手消毒SOP》。4、醫(yī)護人員在進行診治過程中應(yīng)當實施標準預防，并嚴格執(zhí)行手衛(wèi)生規(guī)范和無菌操作技術(shù)。接觸患兒前后洗手或手消毒。接觸血液、體液、分泌物、排泄物等操作時應(yīng)當戴手套，操作結(jié)束后應(yīng)當立即脫掉手套并洗手。三、患兒管理1、診療和護理操作應(yīng)當以先早產(chǎn)兒后足月兒、先非感染性患兒后感染性患兒的原則進行。2、對有感染高危因素的新生兒進行相關(guān)病原學檢測，采取針對性措施，避免造成醫(yī)院感染。3、對患具有傳播可能的感染性疾病、有多重耐藥菌感染的新生兒，應(yīng)當及時隔離或轉(zhuǎn)院，執(zhí)行《新生兒病房隔離制度》。對隔離患兒執(zhí)行《新生兒隔離病房SOP》。4、新生兒病室存在嚴重醫(yī)院感染隱患時，應(yīng)當立即停止接收新患兒，并將在院患兒轉(zhuǎn)出。四、監(jiān)測1、新生兒室按醫(yī)院規(guī)定進行醫(yī)院感染監(jiān)控和報告，開展新生兒醫(yī)院感染目標性監(jiān)測。2、開展必要的環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測。3、針對監(jiān)測結(jié)果中存在的問題進行分析整改。五、環(huán)境管理1、病室內(nèi)應(yīng)定時通風換氣至少2～3次／曰，每次不少于30分鐘。2、臺面、地酶曰濕式擦拭、清掃，遇感染物質(zhì)時即刻用500mg／1。含氯消毒劑消毒。六、物品管理l、一次性使用的醫(yī)療器械、器具由醫(yī)院統(tǒng)一采購，不得重復使用。2、氧氣濕化瓶、吸痰瓶應(yīng)當每曰更換清洗消毒。3、藍光箱和暖箱應(yīng)當每日清潔并更換濕化液，～人用后一消毒。清洗消毒方法執(zhí)行《新生兒保溫箱清洗消毒SO[，》。4、接觸患兒皮膚、粘膜的器械、器具及物品應(yīng)當一人一用一消毒。如霧化吸入器、面罩、氧氣管、體溫表、吸痰管、浴巾、浴墊等。5、患兒使用的奶具執(zhí)行《新生兒奶具清洗消毒SOP》。保存奶制品的冰箱要定期清潔與消毒。6、新生兒淋浴用具一人一用～消毒。7、新生兒使用的被服、衣物等應(yīng)當保持清潔，每日至少更換一次，污染后及時更換。患兒出院后床單元要進行終末消毒。七、醫(yī)療廢物管理新生兒病室的醫(yī)療廢棄物管理執(zhí)行我院醫(yī)療廢物管理制度。主要參考文獻：[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．新生兒病室建設(shè)與管理指南(試行)[s]．20XX[2]中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術(shù)規(guī)范[S]．20XX．洗手、衛(wèi)生手消毒標準操作規(guī)程（SOP）一、術(shù)語和定義1、洗手：醫(yī)務(wù)人員用肥皂(皂液)和流動水游毛去除手部皮膚污矚、碎『新口部分致病菌的過程。2、衛(wèi)生手消毒：醫(yī)務(wù)人員用速干手消毒劑揉搓雙手，以減少手部暫居菌的過程二、配備洗手與衛(wèi)生手消毒設(shè)施1、流動水。2、非手觸式水龍頭。3、清潔劑：肥皂應(yīng)保持清潔與干燥。盛放皂液的容器宜為一次性使用，重復使用的容器應(yīng)每周清潔與消毒。4、于手紙或烘手機，避免二次污染。5、速干手消毒劑。6、洗手揉搓六步驟圖。’三、洗手與衛(wèi)生手消毒、1洗手與衛(wèi)生手消毒應(yīng)遵循以下原則：a)當手部有血液或其他體液等肉眼可見的污染時，應(yīng)用肥皂(皂液)和流動水洗手。b)手部沒有肉眼可見污染時，宜使用速干手消毒劑消毒雙手代替洗手。2在下列情況下，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)根據(jù)l的原則選擇洗手或使用速干手消毒劑：a)直接接觸每個患者前后，從同一患者身體的污染部位移動到清潔部位時。b)接觸患者粘膜、破損皮膚或傷口前后，接觸患者的血液、體液、分泌物、排泄物、傷口敷料等之后。c)穿脫隔離衣前后，摘手套后。d)進行無菌操作、接觸清潔、無菌物品之前e)接觸患者周圍環(huán)境及物品后。f)處理藥物或配餐前。3醫(yī)務(wù)人員在下列情況時應(yīng)洗手，然后進行衛(wèi)生手消毒：aL)接魅患者的血液、體液和分泌物以及被傳染性致病微生物污染的物品后。b)直接為傳染病患者進行檢查、治療、護理或處理傳染患者污物之后?！?醫(yī)務(wù)人員洗手方法，見洗手揉搓六步驟圖。5醫(yī)務(wù)人員衛(wèi)生手消毒應(yīng)遵循以下方法：a)取適量的速干手消毒劑于掌心。b)嚴格按照附錄A醫(yī)務(wù)人員洗手方法A．3揉搓的步驟進行揉搓。c)揉搓時保證手消毒劑完全覆蓋手部皮膚，直至手部干燥。主要參考文獻：[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范[S]．20XX導尿管相關(guān)尿路感染預防與控制標準操作規(guī)程（SOP）一、插管前l(fā)、嚴格掌握留置導尿管的適應(yīng)證，盡量避免不必要的留置導尿。2、仔細檢查無菌導尿包，如過期、外包裝破損、潮濕，不應(yīng)使用。3、根據(jù)年齡、性別、尿道情況選擇合適的導尿管口徑、類型。通常成年男性選16F，女性選14F；4、規(guī)范手衛(wèi)生和戴手套。二、插管時1、消毒2次：用0.5％的碘伏棉球消毒尿道口及其周圍皮膚粘膜，每只棉球限用一次，程序如下：男性：自尿道口、龜頭向外旋轉(zhuǎn)擦拭消毒，注意擦凈包皮及冠狀溝。女性：首次消毒順序由外向內(nèi)，自上而下：陰阜、大陰唇、兩側(cè)小陰唇、尿道口；再次消毒順序由內(nèi)向外，自上而下：尿道口、兩側(cè)小陰唇、尿道口；最后會陰、肛門。2、插管過程嚴格執(zhí)行無菌操作，動作要輕柔，避免尿道粘膜損傷。3、對留置導尿患者，采用密閉式引流系統(tǒng)。二、插管后1、保持尿液引流系統(tǒng)通暢和完整，不要輕易打開導尿管與集尿袋的接口。2、懸垂集尿袋，不可高于膀胱水平，并及時清空袋中尿液。3、如要留取尿標本，可從集尿袋采集，但此標本不得用于普通細菌和真菌學檢查。4、導尿管不慎脫落或?qū)蚬苊荛]系統(tǒng)被破壞，應(yīng)更換導尿管。5、疑似導尿管阻塞應(yīng)更換導管，不得沖洗。6、保持尿道口清潔日常用溫水保持清潔即可但大便失禁的患者清潔以后還需消毒。7、患者洗澡或擦身時要注意對導管的保護，不要把導管浸入水中。8、不主張使用膀胱沖洗或灌注來預防泌尿道感染。9、長期留置導尿管病人，定期更換導尿管(1次／2周)和集尿袋(2次／周)。10、疑似出現(xiàn)尿路感染而需要抗菌藥物治療前，應(yīng)先更換導尿管。11、每天評價留置導管的必要性，盡早拔除導管。三、其他預防措施定期對醫(yī)務(wù)人員進行宣教。主要參考文獻：李曉松．基礎(chǔ)護理技術(shù)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，20XX：146—150．胡必杰，郭燕紅，高光明，等.醫(yī)院感染預防與控制[M].上海：上海科學技術(shù)出版社，20XX：6—7醫(yī)院內(nèi)肺炎預防與控制標準操作規(guī)程（SOP）醫(yī)院獲得性肺炎(HAP)，是我國最常見的醫(yī)院感染類型，呼吸機相關(guān)肺炎(VAP)是其中的重要類型，預后較差。1、如無禁忌證，將床頭抬高30-45°。2、對存在HAP高危因素的患者，用O．2％洗必泰漱口，每日2次；對氣管插管病人用0：2％洗必泰口腔沖洗，每曰2次。3、鼓勵手術(shù)后患者(尤其胸部和上腹部手術(shù))早期下床活動。4、指導患者正確咳嗽，予以翻身、拍，背，以利于痰液引流。5、對于使用呼吸機的患者，建立預防VAP集體治療措施。(1)嚴格掌握氣管插管或切開適應(yīng)證，使用呼吸機輔助呼吸的患者應(yīng)優(yōu)先考慮無創(chuàng)通氣。(2)對氣管插管或切開患者，吸痰時應(yīng)嚴格執(zhí)行無菌操作。吸痰前、后，醫(yī)務(wù)人員必須遵循手衛(wèi)生規(guī)則。(3)呼吸機螺紋管使用一次性，有明顯污染物時則及時更換；每周更換萬向延長管；濕化罐添加滅菌注射用水，每天更換；螺紋管冷凝水使用500g/L做菌消毒劑處理后傾倒污水池，不可直接傾倒在室內(nèi)地面，不可使冷凝水流向患者氣道。(4)消毒呼吸機外殼、按鈕、面板，使用75％酒精擦拭，每天1次。(5)正確進行呼吸機及相關(guān)配件的消毒：濕化罐用500mg／[。含氯消毒劑浸泡消毒，流動水沖洗、晾干密閉保存。(6)不宜常規(guī)采用選擇性消化道脫污染(SDD)來預防HAP／VAP。(7)盡量減少使用或盡早停用預防應(yīng)激性潰瘍的藥物，包括H2受體阻滯劑如西米替丁和／或制酸劑。防治誤吸。(8)對于人工道/機械通氣患者，每天評估是否可以撤機和拔管，減少插管天數(shù)。（9）加強營養(yǎng)，檢測血脂。6、每年不少于2次對醫(yī)務(wù)人員進行有關(guān)預防措施的教育培訓。主要參考文獻：[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術(shù)規(guī)范[S]．-20XX．’[2]胡必杰，郭燕紅，高光明，等．醫(yī)院感染預防與控制[M]．上海：上海科學技術(shù)出版社，20XX：3第二篇：微生物限度檢查法標準操作規(guī)程微生物限度檢查法標準操作規(guī)程一、目的：建立微生物限度檢查的基本操作規(guī)程，為微生物檢查人員提供正確的操作規(guī)程。二、適用范圍：適用于品管化驗室的微生物限度檢查。三、職責：品管微生物檢驗員對本標準的實施負責。四、正文：定義：微生物限度檢查法：系指非規(guī)定滅菌制劑及其原輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法，包括染菌量及控制菌的檢查。2實驗用具：電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水溫箱、試管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管架、注射器、針頭、注射器盒、研缽、75%酒精棉球、紫外燈（365nm波長）。3培養(yǎng)基：3.1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、乳糖膽鹽培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基。3.2培養(yǎng)基的管理、配制應(yīng)符合檢定菌、培養(yǎng)基管理規(guī)程、培養(yǎng)基配制規(guī)程。試液：甲基紅試液、a-奈酚乙醇試液、40%氫氧化鉀溶液、靛基質(zhì)試液。稀釋劑：0.9%無菌氯化鈉溶液。供試品溶液的制備：取供試品（供試品如為固體，置研缽中研磨成細粉）放入試管中，加入適量的稀釋劑制成1：10濃度的供試品溶液。對照用菌液：控制菌檢查均應(yīng)作相應(yīng)已知菌的對照試驗，對照菌株為大腸桿菌[CMCC（B）441022]。取相應(yīng)菌株的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)18-20XX時，稀釋至1：106，對照菌的加入量為50-100個。8檢查法：8.1除另有規(guī)定外，細菌的培養(yǎng)溫度為30-35℃，霉菌的培養(yǎng)溫度為25-28℃，控制菌的培養(yǎng)溫度為35±1℃。8.2細菌、霉菌計數(shù)：8.2.1平皿菌落計數(shù)法取均勻供試液，進一步稀釋成1：102、1：103等適宜的稀釋級。分別取連續(xù)三級10倍稀釋的供試液各1ml，置直徑約90mm的平皿中，再注入約45℃的培養(yǎng)基約15ml，混勻，等凝固后，倒置培養(yǎng)，每個稀釋級應(yīng)作2~3個平皿。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數(shù)，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌計數(shù)。8.2.2菌數(shù)測定陰性對照試驗取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4個無菌平皿中，分別按細菌、霉菌計數(shù)用的培養(yǎng)基制備平板，培養(yǎng)，檢查，不得長菌。8.2.3細菌培養(yǎng)時間為48小時，分別在24小時及48小時點計菌落數(shù)，一般以48小時菌落數(shù)為準，霉菌培養(yǎng)時間為72小時，分別在48小時及72小時點計菌落數(shù)，一般以72小時菌落數(shù)為準。菌落如蔓延生長成片，不宜計數(shù)。8.2.4點計后，計算各稀釋級的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報告規(guī)則報告菌數(shù)。8.2.5菌數(shù)報告規(guī)則：細菌宜選取平均菌落數(shù)在30-300之間的稀釋級，霉菌宜選取平均菌落數(shù)在30-100之間的稀釋級，作為報告菌數(shù)計算的依據(jù)。如只有1個稀釋級菌落數(shù)在30-300（30-100）之間時，將該稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如同時有兩個稀釋級在30-300（30-100）之間時，按下式計算兩級比值。比值=低稀釋級平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)高稀釋級平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù).當比值≤2時，以兩稀釋級的均值報告，當比值＞2時以低稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如同時有3個稀釋級的平均菌落數(shù)均在30-300（30-100）之間時，以后兩個稀釋級計算級間比值，如各稀釋級的平均菌落數(shù)均不在30-300（30-100）之間，以最接近30或300的稀釋級平均菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如各稀釋級平均菌落數(shù)均在300（100）以上，按最高稀釋級菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如各稀釋級平均菌落數(shù)均小于30時，一般按最低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告，如當1：10（1：100）稀釋級平均菌落數(shù)等于或大于原液（或1：10）時，應(yīng)以培養(yǎng)基稀釋法測定，按測定結(jié)果報告菌數(shù)。8.2.6培養(yǎng)基稀釋法：取供試液（原液或1：10供試液）3份，每份各1ml，分別注入5個平皿內(nèi)（每皿各0.2ml）每個平皿中傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)，計數(shù)，每1ml注入的5個平板點計的菌落數(shù)之和即為每1ml的菌落數(shù)，共得3組數(shù)據(jù)，以3份供試液菌落數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)報告。如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數(shù)小于1時，則報告菌數(shù)為小于10個。8.3控制菌檢查除另有規(guī)定外，取供試液10ml（相當于供試品1g、1ml、cm2），直接或處理后接種，經(jīng)增菌、分離培養(yǎng)后，進行革蘭氏染色、生化試驗等項檢查。8.3.1大腸菌群：8.3.1.1檢樣稀釋及培養(yǎng)①以無菌操作，將檢樣25g（ml）放于含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的玻璃珠），經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好在均質(zhì)器中以8000—10000r/min的速度處理1min，作成1：10的均勻稀釋液。②用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖不要接觸管內(nèi)稀釋液），混合均勻，做成1：100的稀釋液。③另取1ml滅菌吸管，按上述操作順序，做10倍遞增稀釋液。如此每次遞增稀釋一次，即換用一支1ml滅菌吸管。④根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或標本污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，每個稀釋度接種三管。8.3.1.2乳糖發(fā)酵試驗將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。8.3.1.3分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實試驗。8.3.1.4證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。8.3.1.5報告：根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100ml（g）大腸菌群的MPN值。9結(jié)果判斷：9.1細菌菌落數(shù)、霉菌菌落數(shù)、控制菌三項均符合該品種微生物限度項下的規(guī)定，應(yīng)判為供試品符合規(guī)定；其中任何一項不符合該品種項下規(guī)定，應(yīng)判供試品不符合規(guī)定。9.2細菌菌落數(shù)、霉菌菌落數(shù)第一次測定超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，應(yīng)從同一批號樣品中隨機抽樣，復試兩次，以三次結(jié)果平均值報告。9.3如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上生長霉菌菌落數(shù)或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上生長細菌菌落數(shù)超過該品種項下微生物限度規(guī)定時，經(jīng)復試2次，如3次結(jié)果平均值仍超過規(guī)定，應(yīng)判為供試品不符合規(guī)定。9.4各類制劑檢出控制菌或其他致病菌時，按第一次檢出結(jié)果為準，不再抽樣復試，即應(yīng)判該供試品不符合規(guī)定。第三篇：儲血室與配血室空氣微生物監(jiān)測操作規(guī)程儲血室與配血室空氣微生物監(jiān)測操作規(guī)程一、目的：規(guī)范儲血室與配血室的細菌培養(yǎng)。二．適用范圍：適用于血庫儲血室與配血室的細菌培養(yǎng)。三．操作步驟：(一)儲血室空氣培養(yǎng)1．儲血室空氣培養(yǎng)在每月20XX右，均應(yīng)在紫外線消毒后2．取90mm平板培養(yǎng)皿，打開培養(yǎng)皿蓋子，放在儲血室中間15分鐘，蓋上蓋子，并填寫好檢驗單，送細菌室培養(yǎng)。3．48小時后，觀察結(jié)果。儲血室空氣培養(yǎng)要求在：<20XXFU/m3(二)配血室空氣培養(yǎng)1．配血室空氣培養(yǎng)在每月20XX右，均應(yīng)在紫外線消毒后2．取90mm平板培養(yǎng)皿，打開培養(yǎng)皿蓋子，放在配血室中間15分鐘，蓋上蓋子，并填寫好檢驗單，送細菌室培養(yǎng)。3．48小時后，觀察結(jié)果。配血室空氣培養(yǎng)要求在：<500CFU/m3第四篇：醫(yī)院感染微生物的監(jiān)測醫(yī)院感染微生物的監(jiān)測1、病房物體表面污染細菌的監(jiān)測病房物體表面消毒處理后4小時內(nèi)進行采樣，用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在5×5cm2的物體表面往返涂抹5次，放入10ml采樣液內(nèi)送檢。定量接種的平板放置35℃培養(yǎng)24~48h，觀察結(jié)果。物體表面每平方厘米的菌落總數(shù)的計算公式為：采樣面積（cm2）采樣液稀釋倍數(shù)物體表面菌落總數(shù)（CFU）/cm2=平板上菌落平均數(shù)2、空氣中細菌監(jiān)測AT10)=50000N(1000平板暴露時間(T)}{5平板面積(A)}{100在空氣消毒后、操作之前，用空氣采樣器或空氣沉降法采樣。空氣沉降法采樣簡便、經(jīng)濟，但不能精確定量，采樣方法為：室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)、外布點部位距離墻1m處；室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)4角及中央5點，4角的部點部位距離墻1m處。將直徑9cm普通營養(yǎng)瓊脂平板放在各采樣點5分鐘后送檢。平板放置35℃培養(yǎng)24~48h，計算1m3空氣中的細菌數(shù)。沉降法采樣菌落數(shù)根據(jù)5分鐘內(nèi)在100cm2培養(yǎng)基上降落的細菌數(shù)相當于10L空氣中含的細菌數(shù)。計算公式：空氣細菌總數(shù)CFU/m3=平板上平均菌落數(shù)（N）3、醫(yī)務(wù)人員手部污染細菌監(jiān)測醫(yī)務(wù)人員的手消毒后，五指并攏，用浸濕的無菌棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂抹2次，將棉拭子放入含有中和劑的10ml采樣液管內(nèi)送檢。定量接種后35℃培養(yǎng)24h，若無細菌生長放置48h，計算每平方厘米生長的細菌數(shù)。手細菌總數(shù)（CFU/cm2）=平板上菌落平均數(shù)×采樣液稀釋倍數(shù)÷雙手涂抹面積（cm2）。4、醫(yī)院環(huán)境污染細菌的監(jiān)測的衛(wèi)生學標準（1）層流潔凈手術(shù)室和層流潔凈病房：空氣中菌落數(shù)不超過10個CFU/m3，物體表面和醫(yī)務(wù)人員手部不超過5個CFU/m2，而且無致病菌檢出為合格。（2）普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房、供應(yīng)室潔凈區(qū)：空氣中菌落數(shù)不超過20XXCFU/m3，物體表面和醫(yī)務(wù)人員手部不超過5個CFU/cm2，而且無致病菌檢出為合格。（3）兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、急診室、供應(yīng)室的清潔區(qū)、各類普通病房、化驗室：空氣中菌落數(shù)不超過500個CFU/m3，物體表面和醫(yī)務(wù)人員手部不超過10個CFU/cm2，而且無致病菌檢出為合格。第五篇：微生物實驗室生物安全操作規(guī)程微生物實驗室生物安全操作規(guī)程(20XX版)Dr.Tiger(修訂說明：CNAS-CL09實施后，對微生物實驗室的生物安全提高了要求，對實驗室人員在配制培養(yǎng)基過程的生物安全、高壓鍋的生物指示劑還有菌種的傳代次數(shù)均提出明確的要求，為適應(yīng)新要求，對舊版的微生物實驗室生物安全操作過程作了補充，同時修改和完善了一些小問題)一、目的制訂本規(guī)則，保證實驗室工作人員的健康安全、實驗設(shè)備安全衛(wèi)生以及防止對外界環(huán)境造成污染。二、適用范圍適用于所有進入微生物實驗室人員。實驗室工作人員必需嚴格遵守安全操作規(guī)程。三、安全操作規(guī)程：1.員工安全操作規(guī)程1.1實驗室入口處須貼上生物危險標志，注明危險因子、生物安全級別、負責人姓名和電話、進入實驗室的特殊要求及離開實驗室的程序。1.2禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負責人批準后方可進入，做好衛(wèi)生防護，并在有關(guān)人員陪同下方可進入，同時注意做好環(huán)境維護及保密工作。1.3進行感染性實驗時，禁止他人進入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負責人同意后方可進入。免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的工作人員必須經(jīng)實驗室負責人同意方可在實驗室工作。1.4接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手。1.5禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。1.6盡量以移液器吸取液體，禁止口吸。1.7實驗過程中，嚴格按有關(guān)操作規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生。1.8每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。1.9實驗人員在配制培養(yǎng)基過程中，需盡量避免接觸性或吸入性危害，特別是配制TTB和碘液等對人體有害的培養(yǎng)基或試劑時，要穿戴工作服、口罩和手套，并在通風櫥中進行。1.10工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓，掌握預防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓。人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向?qū)嶒炇邑撠熑藚R報，并記錄事故經(jīng)過和處理方案。1.11禁止將無關(guān)動物帶入實驗室。2.無菌室安全操作規(guī)程2.1無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面一次(拖布專用)，紫外線照射消毒30min以上，超凈工作臺臺面每次實驗前要用75％酒精擦洗。然后紫外線消毒30min。操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時紫外線消毒。2.2無菌室應(yīng)保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。2.3無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5％的甲酚溶液，75％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。2.4無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。2.5需要帶入無菌室使用的器械、平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。2.6工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%乙醇等消毒劑再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。2.7無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘，滅菌后通無菌風至少30min以上人員才能進入。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。2.8供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。2.9每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。2.10吸取菌液時，必須用移液器吸取，切勿直接用口接觸吸管。2.11接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。2.12帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液或巴氏消毒液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。2.13如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。2.14凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水龍頭下沖洗，嚴禁污染下水道。2.15無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在層流無菌風開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌營養(yǎng)瓊脂平板5個，分別放置無菌室四周及中央位置，開蓋暴露30分鐘后，倒置于36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落/平皿，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落/平皿。如超過限度，應(yīng)用臭氧發(fā)生器等對無菌室進行徹底消毒，直至重復檢查合乎要求為止。3.壓力蒸汽滅菌器的安全使用操作程序：3.1堆放：將需滅菌的物品予以妥善包扎，各包之間留有空隙，依次堆放在滅菌桶的篩板上，以蒸汽穿透，提高滅菌效果。需滅菌物品外需黏上高壓指示膠帶以檢驗滅菌溫度是否達到要求。3.2加水：在鍋體內(nèi)注入生活用水，水位一定要超過電熱管2厘米以上（不宜過多）；連續(xù)使用時，每次操作前，必須補足上述水位，以免燒壞電熱管和意外發(fā)生。3.3密封：在每次使用高壓鍋前，都必須認真檢查高壓鍋的出氣伐和安全閥，確保其狀態(tài)完好，如有故障，在故障排除之前不得使用高壓滅菌鍋。把堆放好物品的滅菌桶放在鍋體內(nèi)，蓋上鍋蓋并鎖緊。3.4加熱滅菌：將滅菌器接通與銘牌一致的電源，按下電源開關(guān)，接通電源，指示燈亮，表示電源已正常輸入本器，按下開始按紐電熱管開始加熱工作；非全自動的高壓滅菌鍋要注意排空空氣，確保滅菌時高壓鍋內(nèi)是飽和水蒸氣，高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌期間工作人員需監(jiān)視高壓鍋指示面板上的壓力、溫度和時間等。3.5開蓋：滅菌結(jié)束后，切勿立即將滅菌鍋內(nèi)的蒸汽排出，否則：由于液體物品的溫度未能下降，而壓力蒸汽突然釋放，會使液體劇烈沸騰，造成溢出或容器爆裂。應(yīng)待壓力表指針歸零位后，方可開啟鍋蓋。3.6滅菌后無菌工器具及培養(yǎng)基應(yīng)存放于無菌區(qū)域（如滅過菌后的無菌室或生物安全柜內(nèi)），無菌物品需有明確標識。3.7每年至少2次用嗜熱脂肪芽孢桿菌作為生物指示劑檢查滅菌效果并記錄，指示物需放在不一達到滅菌的部位（如堆放物品的居中位置）。4.生物安全柜操作規(guī)程4.1確認玻璃窗處于關(guān)閉位置后，打開紫外燈，對安全柜內(nèi)工作空間進行滅菌。滅菌結(jié)束后，關(guān)閉紫外燈。安全柜使用前后均需滅菌。4.2抬起玻璃門至正常工作位置。打開外排風機。打開熒光燈及內(nèi)置風機。檢查回風格柵，使之不要被物品堵塞。在無任何阻礙狀態(tài)下，讓安全柜至少工作10分鐘。4.3用消毒液徹底清洗手及手臂。穿上工作褂，戴橡膠手套并套在袖口上，如有必要的話，戴防護眼鏡和防護面罩。4.4按實驗程序放入實驗材料，要將工作區(qū)域內(nèi)的污染物質(zhì)與潔凈物質(zhì)分開放置。盡量將所需要的物品在正式操作前全部放入安全柜，但不要過載，不要擋住前后風口。4.5盡量避免使用可干擾安全柜內(nèi)氣流流動的裝置和程序。在操作期間，避免隨便移動材料，避免操作者的手臂在前方開口處頻繁移動，盡量減少氣流干擾。盡量不要使用明火，接種環(huán)之類用紅外滅菌器滅菌。4.6在操作過程中，如果有物質(zhì)溢出或液體濺出，在將物品移出安全柜前，要對其表面進行消毒，為防止安全柜內(nèi)有任何殘留的污染物，在安全柜工作過程中，就要將安全柜內(nèi)表面全部消毒。所有接觸了污染材料的物體，在從安全柜中取出前，要進行表面消毒。所有開口容器，從安全柜中拿出前要蓋好。4.7全部工作結(jié)束后，用70%的乙醇或適當?shù)闹行韵緞?，擦拭安全柜?nèi)表面，讓安全柜在無任何阻礙的情況下繼續(xù)至少工作5分鐘，以清除工作區(qū)域內(nèi)浮沉污染。4.8關(guān)閉照明燈和安全柜風機。關(guān)閉玻璃門，打開UV燈消毒。滅菌結(jié)束后，關(guān)閉UV燈。4.9定期抬起工作區(qū)域下面板，擦拭或沖洗工作面底下空間。5.標準菌株安全操作規(guī)程5.1標準菌株由專人保管。保管人負責建立標準菌株目錄；目錄至少應(yīng)包編號、菌株號、菌種名稱、來源、購買日期、購買數(shù)量、保存方法等。5.2標準菌株應(yīng)做好標識后，保存于專用冰箱中。5.3標準菌株不能隨意轉(zhuǎn)借其它單位或個人，需要時，須經(jīng)實驗室負責人批準后方可提供。5.4必須在生物安全柜中進行標準菌株實驗，操作過程中，不要穿戴巳經(jīng)污染的防護性手套觸摸門柄、儀器或污染區(qū)以外區(qū)域，避免擴大污染范圍。5.5試驗結(jié)束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進行高壓消毒的物品，應(yīng)使用有效的消毒劑消毒處理。5.6標準菌株傳代原則上不超過5代。6.微生物培養(yǎng)物廢棄物安全處理程序6.1盡可能使用塑料器材代替玻璃器材,防止利器損傷。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運送到特定區(qū)域消毒，最好進行高壓消毒。6.2禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須應(yīng)用次氯酸消毒液或其他有效藥品進行消毒。6.3所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室之前須經(jīng)巴氏消毒液消毒處理或高壓滅菌后,置于專門污物袋內(nèi)，交由專業(yè)衛(wèi)生處理公司處置。6.4實驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒。7、微生物實驗室緊急事故處理辦法7.1刺傷、切割傷或